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文档简介

PCR法聚合酶链反应法(PolymeraseChainReaction:PCR)PCR仪96孔PCR封口DNA电泳DNA成像PCR仪与操作器皿、用具自动灭菌锅PCR技术原理与应用

以双链DNA为模板，由DNA聚合酶沿2个引物结合的DNA的3’端反复延伸，结果扩增出2个引物间的基因(双链DNA)。5’

5’PCR反应过程

（一个循环三步）1，DNA变性（解链）

94C15-30Sec.2，引物结合（退火）两引物分别在低温(55C30Sec.)与单链

DNA结合3，延伸反应

DNA聚合酶分别与引物和单链DNA结合的复合物结合，在有4种核苷酸(dNTP)的存在下沿引物的3’端延伸，分别合成一条新的DNA链。

PCR循环数（n）TaqDNA聚合酶是耐热酶基因数=2的n次方：

2n=目标基因PCR循环中目的基因的变化第一循环：5‘3’变性：正链

解链负链退火（引物和模板结合）与延伸：正链5’

（新合成负链）负链（新合成正链）5’第2、第3个循环新合成正链：

第二次新合成负链新合成负链：第二次新合成正链/目的基因第3个循（N个循环）第二次新合成正链(目的基因)、负链百万倍扩增目的基因电泳结果PCR反应体系TaqDNA聚合酶反应缓冲液（Buffer）10xBuf.dNTP摸板DNA(单链/双链)上游引物下游引物水Total:50uL/100uL/20uL液体石蜡（防蒸发）

图示PRRSV检测分型ORF2-ORF7

ORF7

ORF6北美洲型(VR-2332349bp)欧洲型(LV:354bp)VR/LV共有645bpF-PCR与PCR比较

F-PCRPCR优点

灵敏++

迅速++

准确++

方便++缺点PCR产物交差污染

-+使用溴化乙啶（EB）

-+MuPCR检测WSBVWSBV-ORFx(975bp)P2(116)P4(193210)ORF

P3(738755)P1(958975)Fig.SchematicrepresentationofthemultiplexPCRlayoutusedtoamplifyWSBVDNA,andindicatethepositionswheretheprimers(P1-4)一、填空题二、单项选择题三、多项选择题四、判断对错五、名词解释六、简答题七、论述题八、附加题兽医微生物学/细菌各论部分复习一、填空题21.霉形体又称支原体，是一类能通过细菌滤器，是目前所知的能够在无生命人工培养基中生长繁殖的最小微生物。含有DNA和RNA，二分裂或芽生方式繁殖。2.衣原体有较复杂的、能进行一定代谢活动的酶系统，但不能合成带高能键的化合物，须利用宿主细胞的三磷酸盐和中间代谢产物作为能量来源，必须在活细胞内生存。二、单项选择题种植()可净化被炭疽杆菌污染的土壤。

A．地锦草B．鱼腥草C．草坪D．三叶草蛭弧菌可扑食（）需氧菌。

A．革兰阴性B．致病C．革兰阳性D．非致

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