微生物实验室的质量保证

微生物实验室的质量保证第一页，共四十三页，2022年，8月28日微生物实验室的质量控制实验室的规范化管理制定严格的管理度制定规范化操作程序

影响微生物试验结果的重要因素包括：培养基的质量和规范化操作菌种的保藏及实验结果的正确判断等。第二页，共四十三页，2022年，8月28日

微生物实验室的质量控制环境保证培养基保证无菌性检查适用性检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断第三页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的配制及质量控制

第四页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的配制

培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品

化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明

有

效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。

配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确

保培养基的质量符合要求。

第五页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的配制

使用容器

-配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿。

-使用的器皿应用蒸馏水或纯化水完全冲洗。-配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水.

第六页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的配制

对配制培养基的过程作详细的记录

记录内容

配制日期、培养基名称、成分、配制数量、

质量监控结果等进行全面详细记录。第七页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的制备方法

称量

按照产品说明书的规定称量，各称量物的重量应记录。对培养基的组分应准确称量，并要求有一定的精确度。第八页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的制备方法

配制将准确称量的各组分或脱水培养基加入溶剂中，完全

溶解，如需要可适当加热。

所有的培养基对热都或多或少的敏感，因此当培养基需要

加热溶解时，应注意不要加热过度，否则会使培养基颜色变

深。配制培养基所用的器具应能方便控制加热和不断搅拌。

当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。第九页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的制备方法

分装配制的培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、

制备斜面。经灭菌的培养基分装，应在无菌环境下操作，避免污染。第十页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的制备方法

对热敏感的培养基分装容器

应预先进行灭菌，以保证培养基的无菌性。第十一页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的制备方法

矫正pH

配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也必须对pH进行验证，高压灭菌前的pH应比最终pH值高0.2左右。

矫正pH后的培养基应加热、过滤，使培养基澄清。第十二页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的灭菌

灭菌方法及条件不当可直接影响培养基质应通過无菌

性试验和促生长试验进行验证.验证方法同《中國药典2010年版》附录灭菌法。

第十三页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的灭菌

培养基的灭菌应按照生产商提供或使用者验证的

参数进行。商品化的成品培养基必须附有所用灭菌方

法的资料。第十四页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的灭菌

不同种类培养基应采用不同的灭菌方法，配制好的培养基灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌。

流通蒸汽灭菌

是最常用的最有效的灭菌法，121℃，15min(121℃，30min)或116℃，40min可杀死所有的细菌芽孢。第十五页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的灭菌

滤膜过滤除菌

如配制的培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌和血清凝固器除菌。

-滤膜过滤除菌采用孔径0.22um的滤膜过滤器.-滤膜材质依过滤物品的性质及目的而定。

不得对被滤过成分有吸附作用，不得有物质释放

和纤维

的脱落，也不得使用含有石棉的滤器。-滤器和滤膜在使用前应进行验证，并进行灭菌。血清凝固器80～100℃、30min，连续三天，间歇灭菌。第十六页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的贮藏

-商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。-培养基标签上应标有批号，生产日期、有效期及培

养基的有关特性。-所采用的保藏和运输条件应使培养基最低限度失去

水分并提供机械保护。第十七页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的贮藏

脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮存，

如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛

有脱水培养基的容器.第十八页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的贮藏

配制好的培养基应验证的条件下贮藏-保存在2～25℃避光的环境。

-若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用，-若保存于密闭容器中，一般在一年内使用。

第十九页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的贮藏-琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷冻破

坏凝胶特性。

-琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，一般不超

过一周，且应密闭包装，若延长保存，保存期需经

验证确定。

-培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压灭菌器

中，避免影响培养基的质量。

第二十页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的贮藏-固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采

用流通蒸汽进行，只允许一次，融化的培养基应放在45～50℃的水浴中，不得超过8小时。

-使用过的培养基（包括失效的培养基）应按照国家

污染废物处理相关规定进行。第二十一页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

所有配制好的培养基均应进行验证，验证方法参照《中国药典2010年版》附录无菌检查或微生物限度检

查项下有关规定进行。第二十二页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

实验室配制的培养基监控项目

外观、性状、pH、促生长试验、定期的稳定性检查

以及培养基有效期的确定。第二十三页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

验证时间

-由同一批脱水培养基配制培养基时，若采用已验证的配制和灭菌程序，那么可不进行批批促生长试验。-如果培养基制备的方法未经验证，那么，配制的每一批培养基必须进行促生长试验。

试验方法

-根据培养基的用途参照《中国药典2010年版》附录

无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。

第二十四页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

培养基的有效期是指已通过促生长试验的培养基在整个

有效期内均需符合这些相应的标准。

每批培养基储存的时间将取决于一定存放条件（包括容器

和密封性）的培养基组成成分的稳定性。第二十五页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

试验结果处理

-当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不合格的原因。

-这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重复出现。

-如果未找到原因或还没有解决有关培养基的促生长问题，

任何不符合要求的批次均不能使用。第二十六页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

鉴定微生物的诊断试剂

如

革兰染色、氧化酶试验试剂等。质量控制试验与培养基质量控制试验相似。

试剂用于未知样品鉴定-选择正确的标准质控菌-按使用说明上的要求进行质控试验。第二十七页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

用于环境监控的培养基应特别小心防护。尤其是用

于关键区域监控的培养基最好是终端灭菌，如果不能

采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%

的预培养。防止将外来的污染带到环境中及避免出现假阳性结果。第二十八页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

测定PH值每批培养基灭菌后均应测定PH值；在冷却至室温

（25℃）进行测定。

除非经验证表明培养基的PH允许的变化范围很宽，

否则，培养基的PH的范围不得超过规定的±0.2。第二十九页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

一般性状

-制成平板或分装于试管的培养基应检查；容器和盖

子的破裂，装量。

-固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。

-其他如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的汽泡，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数

量和有效期的检查和记录，培养基的无菌检查等。第三十页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

-液体培养基应观察培养基的颜色，是否有沉淀，

微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数量

和有效期的检查和记录等。第三十一页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

培养基的促生长和抑制性能试验

无菌检查用培养基使用前应进行适用性试验

适用性试验

无菌性试验

灵敏度检查第三十二页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的质量控制

培养基的灵敏度检查

菌种金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]

枯草芽胞杆菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

第三十三页，共四十三页，2022年，8月28日灵敏度检查培养基接种量试验菌培养温度培养基培养时间接种管数装量

(℃)(天)（支）（支）

金黄色葡萄球菌30～35硫乙醇酸盐流体3212铜绿假单胞菌3212生孢梭菌3212白色念珠菌23～28改良马丁529黑曲霉39

①每种菌液接种量含菌小于100cfu②同时做1支空白对照培养基的质量控制第三十四页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的质量控制

结果判定空白对照管应无菌生长。

-若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度

检查符合规定。

-若加菌的培养基管不生长或生长不好，判培养基的灵

敏度检查不符合规定，不能用于无菌试验，并寻找造

成不合格的原因。培养基的适用性检查可在供试品的无菌检查前或与供

试品的无菌检查同时进行。第三十五页，共四十三页，2022年，8月28日

微生物限度检查(计数培养基)培养基的适用性检查

微生物限度检查(计数培养基)

使用前应进行适用性试验，适用性试验包括促生长、抑制及指示能力检查。第三十六页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的适用性检查菌种大肠埃希菌[CMCC（B）26003]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]白色念珠球菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（F）98003]第三十七页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的适用性检查

检查方法菌种培养基加入菌数培养温度培养时间（cfu）（℃）（h）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌营养琼脂50~10030~3548

枯草芽孢杆菌黑曲霉玫瑰红钠琼脂50~10023~2872

白色念珠球菌白色念珠球菌酵母浸出粉胨50~10023~2872

葡萄糖琼脂

第三十八页，共四十三页，2022年，8月28日

培养基的适用性检查

-菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用。-保存在2～8℃可以在24小时内使用。-黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过

的贮存期内使用。第三十九页，共四十三页，2022年，8月28日

结果判定

被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。第四十页，共四十三页，2022年，8月28日⑶控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查培养基特性试验菌株大肠埃希菌胆盐乳糖促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌

MUG促生长能力+指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝或麦康凯促生长能力+指示能力大肠埃希菌大肠菌群乳糖胆盐促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌乳糖发酵促生长能力+指示能力大肠埃希菌曙红亚甲蓝或麦康凯促生长能力+指示能力大肠埃希菌

第四十一页，共四十三页，2022年，8月28日培养基的适用性检查沙门菌营养肉汤促生长能力乙型付伤寒沙门菌四硫磺酸钠亮绿促生长能力乙型付伤寒沙门菌抑制能力金黄色葡萄球菌胆盐硫乳琼脂或沙门、志贺氏属琼脂培养基促生长能力+指示能力乙型付伤寒沙门菌曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂培养基促生长能力+指示能力乙型付伤寒沙门菌