病原生物学实验二课件

病原生物学实验（二）细菌接种技术实验目的1掌握常用的细菌接种方法2熟悉细菌生长现象的观察方法

（一）细菌的分离培养和接种技术接种工具接种针和接种环L型涂布棒接种环境接种罩、超净工作台或无菌室内进行。分区划线划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5.划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.每次划完后应灭菌.2.斜面接种法：用于菌种移种，以进一步鉴定和保存菌种。

四种接种方法将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生长现象。（二）细菌在培养基上的生长现象菌落与菌苔菌落菌苔2.细菌在液体培养基中的生长现象浑浊：大多数细菌，如E.c.沉淀：多见于链状排列的细菌。菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。细菌在液体培养基中的生长现象菌膜菌沉淀均匀浑浊对照细菌在半固体培养基中的生长现象有动力现象无动力现象肠道致病菌的分离培养(1)

一.肠道杆菌的生物学性状

二.S-S培养基的特性及用途三.分离培养方法

主要内容1.相似的形态染色—从形态上无法区别中等大小的G-杆菌

多有鞭毛、菌毛乳糖发酵试验肠道致病菌

肠道非致病菌

多数不发酵乳糖

多数发酵乳糖2.活泼的生化反应初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌

+/-

-

+伤寒杆菌

-

-

+痢疾杆菌

-

⊕

⊕大肠杆菌硫化氢乳糖葡萄糖菌名

三种细菌的生化反应胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。常用于肠道致病菌的分离培养。

（二）SS培养基细菌SS平板大肠杆菌粉红色大菌落痢疾杆菌无色细小，半透明菌落伤寒杆菌无色细小半透明菌落(中间有黑色沉淀）SS培养基中菌落特点1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿）

原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。

方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37℃培养24小时，观察结果。细菌在自然界的分布2.紫外线对细菌的影响（每个实验室2个培养皿）取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37℃培养24h后取出观察结果。密涂接种

分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。3.咽喉部细菌的检查（每班4个平皿）取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次；盖上平皿盖，置37℃温箱中倒置培养24h后取出观察结果。4.化学消毒剂对细菌的影响方法：取一普通平皿培养基，一部分写上“前”，另一部分写上“后”，然后将手指在写有“前”的部分沾一下，再将手指用酒精进行消毒，在写有“后”的部分沾一下。放入37℃温箱培养24小时后观察。

（每个实验室4个平皿）5.自选细菌进