多酚氧化酶的研究现状

Word-5-多酚氧化酶的研究现状PPO活性的测定办法篇一

测定多酚氧化酶活性的办法有：检压法、极谱电极法、比色法、碘量滴定法等[19]。最早是将酚或邻苯二酚作为底物用滴定法来测定多酚氧化酶活性，后来发觉用极谱电极法测定O2消耗更精确一些[20]。但是，无论是滴定法还是极谱电极法都必需经过种子研磨的过程，为了测定的省时便利，Kruger[21]首创了无须研磨种子就能够测出小麦多酚氧化酶活性的办法:种子在水中浸泡16h，然后加入邻苯二酚，反应30min后用动态的微盘计数器测溶液的色彩变化。将这种办法与研磨种子氧电极法比较，相关系数为0.85。陪同着科技的进展和分光光度计的应用，Anderson[22]将整粒种子测定办法做了进一步改进:3～5个整籽粒或0.4g被钳碎的种子放入离心管中，加入用50mMMOPS缓冲液配制的L-DO-PA，室温振荡反应30min或37℃振摇5min后过滤，然后在分光光度计下测定475nm汲取值，这种办法与研磨种子氧电极法比较，相关系数为0.86。

PPO的催化机理篇二

多酚氧化酶(PolyphenolOxidase，PPO)是从真菌到植物乃至哺乳动物体内都广泛存在的一类铜蛋白，它能有效催化多酚类化合物氧化形成相应的醒类物质。在茶儿茶素氧化PPO底物儿茶素(catechin)类能和许多金属离子络合，Cu2+离子形成的配位物中的配位数为4或6，能够从配位体的配位键来阐明PPO的催化生化机理。PPO的多肽链利用自身的折叠卷曲，形成具有一定构象的高级结构。Cu2+与多肽链上的氨基酸残基以配位键相连，主要有His-His和Cys-His残基作为铜离子的配基，形成具有特定立体结构的活性部位。当邻苯二酚基和底物存在时，因为其"逼近'及"定向'效应，使多肽链和底物的空间构象发生转变，互相契合，从而使底物进入活性中心，邻苯二酚基上的二个羟基与多肽链上的氨基酸残基以氢键相连，形成酶与底物的复合物，因为复合物的不稳定性，多肽链构象发生扭曲，氢键断裂，H被附着在多肽链上，酶与底物不再契合，两者都同时发生构象改变，于是产物脱离了活性部位，成为邻醌。邻醌可发生一系列次生氧化作用，形成了多种氧化产物。酶又利用脱氢作用，发生构象回转，恢复以前的自然 构象，重新成为具有催化本事的蛋白质。

PPO活性影响因素篇三

随着诱导剂特性的不同，PPO的分子特性如分子量、等电点等都有所转变。生长培养基的成分也可部分地控制PPO酶产量，例如：硫酸铵抑制PPO形成，而谷氨酸增进PPO形成。在植物组织中激发剂可打破PPO的埋伏状态。在蚕豆中PPO可被游离脂肪酸酸化激发，菠菜类囊体中分别出来的PPO可被亚麻酸激发。这表明PPO的自然 激发剂的确存在。同样PPO的自然 抑制剂也存在，例如菠菜叶中的草酸盐，茶叶中的橡黄素、白花青素等。矿物质养分例如钙或磷的缺乏可导致PPO活性的降低；硼缺乏对单子叶植物无影响，但可导致双子叶植物中PPO活性的增强。植物正常新陈代谢受到干扰也会导致PPO活性的转变：例如储藏时通风不好或生长时水分不够均可引起PPO水平的上升。铜是PPO的组成部分，铜缺失时苜蓿叶片不能表现出PPO酶活性，即使后来再补充铜也不可，这说明全酶只能在发育的早期形成。

钟瑾等[16]用自制壳聚糖与戊二醛交联对PPO固定化举行了初步探讨，表明当戊二醛浓度为2%时，酶活力最高，并提出在确定给酶量时，要兼顾酶活和回收率二者的影响以达到最佳。李荣林等[17]应用海藻酸钠和戊二醛交联法对PPO举行包埋取得了胜利，并对其性质举行了系统讨论发觉[18]：将酶的最适pH上移至7.0，最适温度升高至40℃，酶对金属离子的适应性增加，对抑制剂敏感性下降，低温储藏下，半衰期由3个月升高到221天。

多酚氧化酶PPO的结构特性篇四

PPO是一种含有Cu2+离子的结构蛋白，能够催化酚类上的羟基，使之转化为醌或催化多酚类变为氧合醌。由于醌类具有较强的电化学性质，会发生自动氧化、蛋白质的亲核聚合反应及一些二级反应，而这些反应都会导致酶促褐变反应的发生。植物中的PPO包括一些由核编码的，多基因的家族。在蕃茄中，已有几个PPO的基因被分别出来，并从结构上将其分为三组。在马铃薯中，有4条自立的cDNA被克隆，每一个都显示了独特的空间图景。在扁豆中，有三条与PPO有关的cDNA克隆已被建立。全部的PPO基因都有两个区域，一是与Cu有关的编码区，另一个是引领肽(transitpeptide)，以便能进入质体。PPO的前体（含有引领肽的）约60-75KDa，而成熟的PPO（去除了引领肽的有活性的形式）约45-69KDa，因为这种潜在的酶活性的存在，使PPO活性的问题讨论起来非常复杂。未激发的PPO可被陈化作用、加盐、去污剂（如SDS）、蛋白酶切或尿素的加入等激发。

PPO的生理功能篇五

高等植物组织发生褐变主要是PPO活动的结果。PPO催化单酚羟基化为邻二酚，二羟酚氧化为邻醌。醌聚合并与细胞内蛋白质的氨基酸反应，结果发生黑色或褐色色素沉淀，终于导致水果、蔬菜等经济作物养分走失和经济损失。

PPO作为一种氧化还原酶还在光合作用中发挥作用。如调整叶绿体中有害的光氧化反应速度，参加其中电子传递；PPO还可增进伤口的愈合，也可增强植物对病原体的抗性。如烟草对炭疽病、黄瓜对黑星病、苹果对轮纹病、棉苗对枯萎病菌、水稻对白叶枯病菌和细菌性条斑病以及番茄对小昆虫的抗性等。PPO的`作用方式有：

1、如番茄的具腺毛状体中含有大量PPO，PPO具有存在于表皮中、活化态和可溶性的特性，在毛状体介导的抗病过程中起作用[12]。

2、利用醌共价调整亲核氨基酸形成抗养分机制，直接抵挡昆虫和病原体[13]。

3、醌的毒性直接发挥抗病作用。

4、如番茄中PPO克隆的反义表述可对基因家族的各成员举行负调整，对病原体产生超敏感性（感触性过敏）[14]。

5、邻醌的次生反应所产生的黑色素的痂可阻挡感染的蔓延[15]。

PPO与水果和作物的褐变有关，为了防止水果褐变保持水果的新奇性