微生物生长与生活环境

微生物生长与生活环境第一页，共四十页，2022年，8月28日第一节微生物纯培养一、微生物纯培养的概念实验室条件下，由一个微生物细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。第二页，共四十页，2022年，8月28日第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术纯培养基本步骤：稀释平皿法划线法单细胞挑取法纯培养方法(2)培养

(1)分离第三页，共四十页，2022年，8月28日第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。基本过程：（1）梯度稀释过程；（2）分离培养过程涂布倾注梯度稀释过程10-110-210-310-410-510-6第四页，共四十页，2022年，8月28日第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术4)操作要点：

无菌操作稀释平板分离法使用过程中的几个问题1)梯度稀释度的确定：需分离微生物在样品中的数量2)选择菌落接种的依据：

a、菌落特征；b、菌体的特征3)微生物纯培养的标准：菌落特征一致性第五页，共四十页，2022年，8月28日2、单细胞挑取法：从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术第六页，共四十页，2022年，8月28日3、平皿划线法用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术第七页，共四十页，2022年，8月28日第一节微生物纯培养三、目标微生物纯培养筛选的基本思路１、待分离样品的确定２、培养基的选择３、纯化过程环境条件的控制（温度、空气、PＨ、抑制剂）第八页，共四十页，2022年，8月28日（一）纯培养的保存试管斜面培养基低温、干燥、隔绝空气第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮1、灭菌彻底2、棉塞大小要合适

3、无菌操作保存过程的注意点：防止杂菌污染。第九页，共四十页，2022年，8月28日（二）纯培养的衰退与复壮第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮衰退的原因：衰老、变异衰退的表现：生长缓慢优良性状的丧失抗逆性下降衰退的预防：控制继代频率创造良好的培养条件采取有效的保存方式复壮狭义（被动）广义（主动）复壮方法：选优汰劣第十页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律微生物生长的指标(生物量的测定)细胞群体数量的增加细胞群体总重量增加从群体水平上衡量(间接的测定方法)第十一页，共四十页，2022年，8月28日一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律微生物生长量的测定微生物数量的测定显微镜直接计数法稀释平板计数法最大概率法比浊法称重法含N量测定法DNA含量测定法ATP含量测定法代谢活性法微生物重量的测定第十二页，共四十页，2022年，8月28日(一)微生物数量的测定

1、显微镜直接计数法使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。

优点：操作简便，计数直观。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律第十三页，共四十页，2022年，8月28日(一)微生物数量的测定

2、稀释平板计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。

优点：传统计数方法。对设备要求不高。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律10-310-510-410-6第十四页，共四十页，2022年，8月28日(一)微生物数量的测定

３、比浊计数法根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。

优点：简便，直接。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律第十五页，共四十页，2022年，8月28日(二)微生物重量的测定

1、称重法用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。优点：简单可靠。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律在活性污泥法中采用的指标：（1）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定）（2）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确）第十六页，共四十页，2022年，8月28日(二)微生物重量的测定

2、含氮量测定法

根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。

一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律原理：（1）微生物蛋白质含量稳定（2）氮是蛋白质的稳定成分

(蛋白质量=6.25×总含N量)优点：测定准确。第十七页，共四十页，2022年，8月28日二、细菌分批培养群体生长规律第二节微生物纯培养群体生长规律分批培养：将少量的细菌接种到一定体积的液体培养基中，在适宜的条件下培养，最后一次性收获的过程。生长曲线：细菌在新的适宜的环境中生长、繁殖、衰老、死亡的动态变化。第十八页，共四十页，2022年，8月28日

根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期对数期稳定期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律第十九页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期（延迟期、滞留适应期）滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律特点：分裂迟缓、代谢活跃。产生原因：（2）细胞分裂必需因子的缺乏（1）接种时的机械损伤引第二十页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期（延迟期、滞留适应期）4、菌株的遗传性滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律研究滞留适期长短的意义？影响滞留适应期长短的因素1、培养基成分2、接种物菌龄3、接种量第二十一页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律对数期（指数生长期）特点：（1）代谢活性（2）世代时对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律第二十二页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律对数期（指数生长期）对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律Nt=2nN0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.301t/(lgNt-lgN0)

n——繁殖代数

G——世代时(每繁殖一代所需的时间)N0——对数生长期开始微生物数量

Nt——对数生长期经过时间t后微生物数量第二十三页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律稳定期（最高生长量期）最高生长量期特点：1、细菌数量增加率为0。2、部分细菌大量积累代谢产物。细菌数量增加率为0的原因?二、细菌分批培养群体生长规律第二十四页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律衰亡期特点：菌体活性降低、大量死亡；细胞畸变、自溶革兰氏染色不稳定衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律第二十五页，共四十页，2022年，8月28日什么时期菌体代谢产物最多什么时期细菌细胞代谢活性最强什么时候细菌细胞总数最多什么时期细菌细胞生长速度最快什么时期世代时间短而稳定对数生长期最高生长量最高生长量对数生长期对数生长期第二节微生物纯培养群体生长规律小结二、细菌分批培养群体生长规律第二十六页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律三、连续培养

以一定流速输入新鲜培养液并流出培养物，确保流出的老菌数等于新增殖数，使培养保持对数生长的过程。

优点：一定生理状态实验材料提高工业生产效益第二十七页，共四十页，2022年，8月28日保持细菌培养液浊度恒浊培养第二节微生物纯培养群体生长规律三、连续培养保持细菌培养液营养物质浓度恒化培养第二十八页，共四十页，2022年，8月28日分批培养与连续培养特征的比较第二节微生物纯培养群体生长规律相同点：群体培养特征不能反映各个体的生长状况不同点：分批培养：经历四个时期连续培养：理论上,对数生长期第二十九页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物纯培养群体生长规律三、同步培养通过诱导或选择，使所有细胞处于同一生长阶段。低于适温度适温培养

2、选择法：滤膜过滤1、诱导法：控制温度、培养基成分等获得同步培养的方法硝酸纤维薄膜法第三十页，共四十页，2022年，8月28日同步培养生长曲线特点第二节微生物纯培养群体生长规律三、同步培养群体生长是一次性跳跃过程维持的代数1-2代（？）第三十一页，共四十页，2022年，8月28日第三节微生物的生活环境极端环境条件对微生物的影响死亡环境条件一定范围的变化，影响形态生理生长繁殖温度O2氧化还原电位水分辐射化学药物pH影响微生物生长的主要环境因子第三十二页，共四十页，2022年，8月28日第三节微生物的生活环境一、温度1、温度对微生物生长的影响微生物的生长温度类型低温型中温型高温型温度对微生物生长的影响高温：蛋白质变性酶失活核糖体解体

致死时间、致死温度低温：酶活性下降、新陈代谢缓慢微生物的三种基本温度最低生长温度最高生长温度最适生长温度第三十三页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物的生活环境2、高温灭菌一、温度高温灭菌湿热灭菌干热灭菌：干燥条件，160℃维持1-2h。高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压的同时产生高温。利用高温杀死菌。巴斯德消毒法：采用60-70℃的温度处理15-30min

的消毒方法。间歇灭菌法：100℃，30-60min

冷却，37℃培养1d反复三次第三十四页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物的生活环境3、低温保藏一、温度菌种保存（试管斜面或孢子砂土管）食品保藏特例：流感杆菌、脑膜炎球菌第三十五页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物的生活环境二、氧化还原电位Eh好气性微生物Eh>0.1V，而以为宜兼性厌气微生物Eh<0.1V行厌气性呼吸

Eh>0.1v行好气呼吸厌气性微生物Eh值—0.1V以下

第三十六页，共四十页，2022年，8月28日第二节微生物的生活环境二、水分1、水分对微生物生长的影响：细菌最适水的活度值：

酵母菌最适水的活度值：

霉菌最适水的活度值：0.802、应用：干燥法保存物品