标准解读

《LY/T 3107-2019 柳树品种微卫星标记鉴别技术规程》是一项针对柳树品种鉴定的标准，主要通过微卫星（也称为简单序列重复或SSR）标记技术来进行。该标准详细规定了从样品采集到最终结果分析的全过程，适用于柳树种质资源的鉴定、保护以及利用等方面。

在样品采集方面，标准指出了采样对象应为健康、无病虫害的新鲜叶片，并对样本保存条件提出了具体要求，以保证DNA的质量不受影响。对于DNA提取，推荐使用高效且稳定的CTAB法或其他适合的方法，确保获得高质量的基因组DNA用于后续实验。

关于引物选择与PCR扩增，《LY/T 3107-2019》列举了几组经过验证具有良好多态性的微卫星位点作为参考，并提供了相应的正向和反向引物序列。同时，还明确了PCR反应体系配置、循环参数设置等关键步骤的操作指南，旨在提高扩增效率并减少非特异性产物的产生。

电泳检测环节，标准建议采用聚丙烯酰胺凝胶电泳或者毛细管电泳系统来分离不同长度的扩增片段，并通过银染或荧光标记的方式进行可视化。此外，还强调了数据分析的重要性，包括如何正确读取条带信息、构建遗传距离矩阵及运用软件工具完成聚类分析等内容，以便于准确判断样品间的亲缘关系。

整个过程遵循科学严谨的原则，不仅能够有效区分不同的柳树品种，也为进一步研究其遗传多样性提供了技术支持。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2019-10-23 颁布
  • 2020-04-01 实施
©正版授权
LY/T 3107-2019柳树品种微卫星标记鉴别技术规程_第1页
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文档简介

ICS6502020

B61..

中华人民共和国林业行业标准

LY/T3107—2019

柳树品种微卫星标记鉴别技术规程

TechnicalregulationforwillowvarietiesidentificationbySSRmarkers

2019-10-23发布2020-04-01实施

国家林业和草原局发布

LY/T3107—2019

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国林木种子标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC115)。

本标准主要起草单位南京林业大学江苏省林业科学研究院山东省林业科学研究院

:、、。

本标准主要起草人李淑娴戴晓港尹佟明陈赢男刘德玺何旭东

:、、、、、。

Ⅰ

LY/T3107—2019

柳树品种微卫星标记鉴别技术规程

1范围

本标准规定了以柳属Salix植物为材料利用微卫星标记对国家和省审

()DNA,(microsatellite)

认定的柳树品种进行分子鉴定的规范化操作技术

()。

本标准适用于附录中所列柳树品种的鉴别

A。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

21

.

微卫星标记microsatellite

短串联重复序列

shorttandemrepeats,STRs

简单重复序列

simplesequencerepeats,SSR

基因组中由个个核苷酸组成的串联重复序列

2~6DNA。

22

.

基因型频率genotypefrequency

不同基因型在全部个体中所占的比率全部基因型频率的总和为或

,1100%。

3操作程序

31取样和保存

.

取柳树幼嫩叶片片片用干燥硅胶密封保存用于提取

5~10,,DNA。

32DNA提取所需试剂

.

321称取溶解到超纯水中调节定容到

..1mol/LTris:12.11gTris80mL,pH=8.0,100mL。

322称取溶解到超纯水中调节定容到

..0.5mol/LEDTA:18.61gEDTA80mL,pH=8.0,100mL。

323氯化钠称取氯化钠溶解到超纯水中定容到

..5mol/L:23.38g80mL,100mL。

324醋酸钾称取醋酸钾超纯水溶解后定容到

..5mol/L:25.54g,200mL250mL。

325称取十二烷基硫酸钠超纯水溶解后定容到

..2%SDS:1.0g(SDS),40mL50mL。

326称取十六烷基三甲基溴化铵溶解到超纯水中定容到

..10%CTAB:10gCTAB()80mL,

100mL。

327氯仿异戊醇氯仿异戊醇混合

..:240mL,10mL。

328乙醇乙醇加入超纯水

..70%:70mL,30mL。

329裂解液

..CTAB:1mL1mol/LTris(pH=8.0),4mL0.5mol/LEDTA(pH=8.0),28mL

氯化钠聚乙烯吡咯烷酮定容到

5mol/L,10mL10%CTAB,5g,100mL。

3210缓冲液称取碱和硼酸加入溶液

..TBE(10×):108gTris55g,40mL0.5mol/LEDTA

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