课题1微生物的实验室培养

肠黏膜上分布的细菌专题2微生物的培养与应用微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．定义：种类：病毒非细胞结构特点：个体微小、结构简单、代谢速度快酵母菌、霉菌、蘑菇草履虫、变形虫原核生物-“衣蓝支细线”真核生物真菌原生生物微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物。葡萄球菌大肠杆菌放线菌酵母菌霉菌螺旋菌变形虫课题1

微生物的实验室培养培养基可以分为哪几类？培养基一般都含有哪些营养物质，此外还要满足哪些要求？一、培养基自主学习什么是培养基？一、培养基基础知识定义：是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质。分类：①液体培养基：②固体培养基：凝固剂琼脂菌

落基本成分：①碳源、氮源、无机盐、水牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨

10.0gNaCl5.0g琼脂

20.0g蒸馏水

定容至1000ml。碳源、氮源、维生素氮源、维生素碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-葡萄糖、脂肪酸等自养微生物异养微生物氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、尿素等1.关于微生物营养物质的叙述中，正确的是()A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量练一练②还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（生长因子）以及氧气的要求．二、无菌技术避免杂菌污染的方法包括哪四个方面？什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？获得纯净培养物的关键是什么？防止外来杂菌的入侵对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触主要内容：消毒：使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。①定义：②常用方法：煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。紫外线消毒灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，（包括芽胞和孢子）。①定义：②常用方法：灼烧灭菌：干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.（最常用的）实验操作制备培养基接种培养观察、记录结果用什么方法灭菌？灭菌过程中为什么要包牛皮纸？制备牛肉膏蛋白胨固体培养基有哪些步骤？倒平板有哪些步骤？一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：

2.称量：牛肉膏3.溶化：整个过程不断用玻棒搅拌--防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。4.灭菌:(先调pH)高压蒸汽灭菌，干热灭菌5.倒平板:待培养基冷却到50℃左右时--在酒精灯附近倒平板--平板倒置--（培养基为液体，不烫手）（防止污染）（培养基表面水分更好挥发，防止皿盖水珠落入培养基）练习1.获得纯净培养物的关键是（）A

将用于微生物培养的器皿，接种用具和培养基等器具进行灭菌B接种纯种细菌C适宜环境条件下培养D防止外来杂菌的入侵2.下列操作与无菌技术无关的是（）A接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B接种前用火焰烧灼接种针C培养在50℃左右时搁置斜面D在酒精灯的火焰旁完成二、纯化大肠杆菌最常用的接种方法：平板划线法稀释涂布平板法平板划线法：（杀死接种环上原有的微生物）通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面---分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落（避免高温杀死菌种）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。（接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而使每次划线时菌种的数目减少，最后得到菌落。）（为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种）划线结束后灼烧接种环：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。注意：微量移液器稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。①系列稀释操作②涂布平板操作稀释103倍稀释104倍稀释105倍三、培养37℃恒温箱中培养12h～24h结果分析与评价1、培养基的制作是否合格？2、接种操作是否符合无菌要求？3、是否进行了及时细致地观察与记录？如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。观察培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存2、长期保存：甘油冷冻管藏法菌种的保存课题延伸目的：保持菌种的纯净方法：微生物的培养基础知识实验操作结果分