项目十一 抗生素效价测定技术

抗生素效价测定技术一、发酵技术1.定义原始定义发泡、产生二氧化碳的过程；生物化学中定义有机物进行分解代谢释放能量的过程；工业微生物中发酵定义通过微生物或其他生物细胞或经过生物工程改造的工程菌的培养来制备工业产品或转化某些物质的过程。2.发酵分类（1）按氧气需要量（2）按工艺不同AMET01需氧发酵（大多数药品）、厌氧发酵。AMET02浅层发酵（薄层培养基）、深层发酵（在液体深层中进行发酵）液体深层发酵分类分批发酵：营养物和菌种一次加入进行培养，直到结束放出。广泛应用。01特点：营养物质减少；微生物增多；环境非稳态；微生物生长四个时期明显。连续发酵02以一定的速度向发酵罐内添加新鲜培养基，同时流出培养液，微生物在稳定状态下生长，可以有效延长微生物生长的对数期。特点：操作稳定，利于设备机械化、自动化；减少灭菌次数、易于过程优化；易染菌、微生物与易变异、设备要求高；微生物生长四个时期不明显。常用于废水处理、酒精、氨基酸等发酵工业。补料分批发酵或半连续发酵03介于分批发酵和连续发酵之间的一种方式。可以解除底物抑制，产物抑制或客服微生物过度生长，提高有用产物的转化率。应用广泛，如面包酵母、氨基酸、抗生素等。（3）按培养基状态分类（4）按发酵产品类型分类（141页4min）菌体发酵（虫草头孢菌）A转化发酵D酶发酵B生物细胞发酵E代谢产物发酵C利用微生物细胞中的酶将一种化合物转化为另一种，如乙醇到乙酸。（5）单一或混合菌种发酵（6）菌种状态游离发酵、固定化发酵。固定化发酵是指固定在水不溶性载体上，在一定的空间范围进行生命活动(生长、发育、繁殖、遗传和新陈代谢等)的细胞。3.发酵工艺流程一般发酵工艺简图典型的分批微生物反应工艺流程图二、抗生素效价测定1.抗生素定义生物在生命活动中产生的极微量能选择性的抑制或影响其他生物机能的一类天然有机化合物。可以由微生物（主要）、动物。植物产生。抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准。差异毒力较大A抗菌活性强B有不同抗菌谱C2.医用抗生素特点滥用抗生素的原因有哪些？3.抗生素单位和效价（１）质量单位以抗生素的生物活性部分重量作单位

1微克（ｕｇ）＝１U，１毫克＝1000U。（２）类似质量单位以特定的纯粹抗生素类的重量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）。（3）质量折算单位以原始的活性单位相当的试剂质量为1U进行折算。如青霉素的单位是以50ml肉汤培养基内能完全抑制金黄色葡萄球菌生长的青霉素量为1U。（4）特定单位（5）抗生素效价效价是指抗生素有效成分的含量，即在同一条件下比较抗生素和标准品的抗菌活性，常用百分数表示。

效价=检品的抗菌活性/标准品的抗菌活性4.抗生素效价的微生物测定方法稀释法、比浊法、管碟法（1）管碟法：

是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。管碟法原理

在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比，可以得出一条曲线。

抗生素浓度换算成对数，则抑菌圈直径与抗生素对数成直线关系1.实验菌株的培养；2.pH6.0磷酸盐缓冲液的配制；3.青霉素标准品溶液的配制；稀释成2U/ml或0.5U/ml的两种浓度；4.待检样品溶液的配制；5.平板制备；6.效价测定实验步骤（143页）在平板底部四边，分别对角注明“SH”、“SL”和“UH”、“UL”标记将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上。SLULSHUH以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。培养箱中培养。抑