邻菲罗啉分光光度法测定铁(一)

邻菲罗啉分光光度法测定铁（一）陈睿婷E-mail:ruiting_chen@163.com仪器分析实验紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是研究物质分子在紫外-可见光区分子吸收光谱的分析方法。入射光I0透射光It吸光度：单光束紫外可见分光光度计主要部件原理：由光源发出的连续光谱，进入单色器经色散元件分光，获得的单色光分别通过参比溶液和样品溶液，进行光强度（吸收）的测定。0.575光源单色器吸收池检测器显示（一）、掌握分光光度法测定铁的原理及方法（二）、通过测定铁的条件试验，掌握分光光度法测定铁的条件及方案的拟定。（三）、掌握分光光度计的组成部分，操作注意事项和如何使用它实现对物质的检测。（四）、掌握7200型分光光度计的使用方法。一、实验目的Lamber-Beer定律

Lambert-Beer定律是说明物质对单色光的吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）和液层厚度（l）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外-可见光度法定量的基础。Sample(conc.C)Pathlengthl入射光I0透射光It

A＝Ecl浓度（比尔定律）厚度(朗伯定律）吸光系数

吸光度二、实验原理在pH=2～9的条件下，Fe2+与邻菲罗啉（邻二氮菲）生成很稳定的橙红色的络合物，其反应如下：此络合物的logK稳=21.3，ε=11000。显色反应：使得无色物质通过反应生成有色物质，提高测定灵敏度和选择性。邻菲罗啉-Fe2+配合物的紫外吸收光谱510nm青绿色橙红色4Fe3++2NH2OH·HCl═4Fe2++N2↑+H2O+4H++2Cl-在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe3+还原为Fe2+：测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe2+水解，影响显色。通常在pH值~5的缓冲液介质中测定。本试验中用HAc-NaAc缓冲溶液三、仪器和试剂7200型可见分光光度计、pHS-3B型酸度计仪器：铁标准溶液（CFe3+=10g/ml）10%盐酸羟胺水溶液0.1％邻菲罗啉水溶液1mol/LNaAc缓冲溶液C(HCl)=0.1mol/L溶液C(NaOH)=0.4mol/L溶液试剂：四、实验步骤（一）条件试验

1、测定波长选择：吸收曲线(A-l曲线)的绘制，选择最大吸收波长作为测定波长；

2、反应时间选择：邻菲罗啉铁配合物的稳定性，绘制A-t曲线；

3、显色剂用量：显色剂浓度的影响，绘制A-V曲线；

4、pH选择：溶液酸度对配合物的影响，绘制A-pH曲线。

1、吸收曲线的绘制试样配制：铁标液CFe3+=10μg/mL盐酸羟胺10%NaAc缓冲液1mol/L邻菲罗啉0.1%参比溶液0.00mL1mL5mL5mL试液5.00mL1mL5mL5mL吸收曲线（A-λ）波长λ(nm)450460470480490500510吸光度A波长λ(nm)520530540550560570吸光度A用蒸馏水定容至50mL静置10分钟，测试

2、邻菲罗啉配合物的稳定性试样配制：与实验1一样，可共用。铁标液CFe3+=10μg/mL盐酸羟胺10%NaAc缓冲液1mol/L邻菲罗啉0.1%参比溶液0.00mL1mL5mL5mL试液5.00mL1mL5mL5mL曲线（A-t）：时间t(min)515306090吸光度A检测波长：510nm用蒸馏水定容至50mL024610154560

3、显色剂浓度影响试样配制：铁标液CFe3+=10μg/mL盐酸羟胺10%NaAc缓冲液1mol/L邻菲罗啉0.1%试液10.00mL1mL5mLxmL曲线（c-A）邻菲罗啉0.1%0.10mL0.30mL0.50mL1.00mL3.00mL5.00mL10.00mL吸光度A参比：蒸馏水；检测波长：510nm静置10分钟，测试用蒸馏水定容至50mL

4、溶液酸度对配合物的影响试样配制：铁标液10μg/mL盐酸羟胺10%pH调节溶液邻菲罗啉0.1%pH值吸光度110.00mL2mL5mL

0.4mol/LNaOH5mL210.00mL2mL5mL

0.1mol/LHCl5mL310.00mL2mL5mLNaAc缓冲5mL参比：蒸馏水作参比；检测波长：510nm溶液反应5分钟后测量，加样顺序从左到右，看溶液pH值对配合物稳定性和配位反应的速度的影响。用蒸馏水定容至50mL1、移液管的使用常见移液管：标有温度和容量(注意是否标有吹)用途：准确移取一定体积的液体操作：洗涤(蒸馏水)、润洗(3次)、移液、洗涤干净注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2、读数时视线与凹液面平齐；3、每次移液后，锥形瓶壁用蒸馏水冲洗（洗瓶的头不要碰到瓶壁）容量瓶的使用注意事项：1、使用前要检漏。加水至刻度，塞上瓶塞，倒立，检查是否漏水，瓶塞旋转180°，如上操作。2、使用过程中，防止瓶塞被混淆污染，不能随意放置桌上。3、洗涤时洗至不挂水珠，再用蒸馏水润洗3次，用铬酸洗液清洗。4、读数时要用手前3指轻轻夹起容量瓶，使之自然垂直，再读数。5、容量瓶不可烘干，防止体积变化。7200可见分光光度计1、选择模式：mode

透光率（Transmittance）吸光度（Absorbance）校正：透光率模式全黑比色皿：0%空白溶液：100%测试：吸光度模式2、波长选择转动波长旋钮每次测量前都要重新校正。测试从