深圳市血液中心 血液筛查工作汇报(20150414烟台)

深圳市血液中心

血液筛查工作情况汇报深圳市血液中心曾劲峰

1234抗-HTLV血液筛查献血者不规则抗体的检测化学发光检测技术（CLIA）在血液筛查中的应用输血安全相关科研工作汇报报告内容一、抗-HTLV血液筛查抗-HTLV血液筛查国内外概况人类嗜T淋巴细胞自血病病毒可通过血液途径传播，能引起恶性淋巴瘤、成人T淋巴细胞白血病(ATL)等疾病。我国抗-HTLV阳性人群主要分布于福建沿海地区、新疆和广东地区，阳性率为0.01％~1.0％。为探索深圳地区献血人群HTLV感染情况，我们于2014年初将其纳入到血液筛查检测项目中。抗-HTLV血液筛查国内外概况厦门已于十年前已经开展了抗－HTLV的检测。

深圳市血液中心经过认真考虑，决定于2014年开始对深圳地区献血人群开展抗－HTLV筛查。试剂：万泰公司提供的抗－HTLV试剂。血液样本常规酶免检测HTLV酶免检测初筛阳性样本正常发放原样管双孔复检复检阳性样本白膜层留样送检我中心HTLV检测开展情况至今检测数据2014年4月至今，共计检测近10万人份，初筛阳性标本共计73例抗-HTLV初筛阳性率：0.7‰

确证阳性2例目前，初筛阳性样本送中国食品药品检定研究院确证实验HTLV对献血资格判定的顾虑由于政策法规的限制，HTLV不是法定检测项目，因此未将HTLV初筛阳性的检测结果用于献血资格的控制我国卫生行政主管部门已决定在部分地区推动HTLV的检测，如何完善相关行业法规及行业标准，值得我们共同讨论二、献血者不规则抗体的检测国内外现状1.

目的和意义美国、日本、澳大利亚等国家和我国的香港地区均已将不规则抗体筛查列入献血者常规检测。我国卫生行政部门目前尚未要求对献血者进行抗体筛查。1.2不规则抗体的不良影响不规则抗体是除ABO血型系统抗体以外的所有抗体，是引起众多临床问题的主要原因之一。输血不良反应不规则抗体血型鉴定困难新生儿溶血病疑难配型1.

目的和意义

◆

有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体；◆在配血前鉴定不规则抗体，可以避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误；◆特别对于交叉配血不合或有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者，能够最大限度降低输血风险。

1.3不规则抗体筛选的重要意义1.

目的和意义2014年8月至今，深圳市血液中心无偿献血者标本17939例符合献血条件的献血人群。

2.

技术和方法抗人球蛋白检测卡，即不规则抗体筛检卡（江苏苏大赛尔）不规则抗筛细胞（长春博德）

2.1样品来源2.2试剂2.

技术和方法不规则抗筛细胞2.2试剂红细胞血型抗体筛选格局图序Rh-hrMNSsKiddDuffyLewisDiegoLutheranKellPXg序结果号DCEceMNSsJkaJkbFyaFybLeaLebDiaDibLuaLubKkKpaKpbP1Xga号盐水IAT1++--+++++-++-+--+-+-+-++-1

2+-+++++-++++--+++-+-+-+--2

3-+-++++-+-+++-+-+-+-+-+-+3

2.3仪器

2.技术和方法Aigel300全自动血库系统◆微柱凝胶法：应用微柱凝胶法对17939例献血者血浆进行不规则抗体筛查,对初筛阳性反应样品重复检测2次。仍为阳性反应的送输血研究所做抗体特异性鉴定实验。

干扰因素少，操作法简单、方便、敏感性高；结果易判断又能较长时间保存；操作具有可证明性，便于管理；④自动化、信息化程度高。2.技术和方法2.4方法3.

检测数据标本量初检阳性标本数量复检阳性标本数量确诊阳性标本数量1793934（0.19%）21（0.12%）21（0.12%）单位：例表1献血人群不规则抗体筛查结果注：21例确诊阳性标本中多数为抗－M抗体和冷抗体3.1数据种类3.1阳性标本示例一010740这个标本结果是1+，疑似阳性（确认结果为阴性）.3.检测数据3.1阳性标本示例二211261这个标本的Ⅲ号筛选细胞为弱阳性（确认结果：冷抗体）3.检测数据4.横向合作的目的完善临床输血信息化管理系统

加强输血管理，深圳市血液中心与合作医院间的Lis系统进行关联，有效实现了血液信息快速的互换共享。资料齐全与合作医院的管理系统成功连接数据准确查询方便统计快捷操作简单管理规范安全备份4.横向合作的目的◆评估深圳地区不规则抗体筛查的阳性率◆评估不规则抗体筛查结果对临床患者交叉配血的影响◆确保受血者输入献血者的红细胞的安全性，最大限度保证红细胞的存活时间◆评估不规则抗体筛查对输血安全风险，为电子交叉配血推广和应用打下基础合作意义4.横向合作的目的电子配血，是将信息化技术应用到配血中的一种技术，就是将献血者的血液信息和患者的血液信息输入计算机，由计算机系统判断和传输血型鉴定结果、审核血型信息并选择相容性血液输注。电子配血-优势安全性节省人力物力节省时间减少血液浪费电子配血是未来输血发展的必然趋势。4.横向合作的目的三、化学发光检测技术（CLIA）在血液筛查中的应用在国内进口设备应用广泛CLIA技术在血液筛查的应用情况（之一）澳大利亚，新西兰，新加坡，马来西亚，泰国，韩国，印度尼西亚，香港等国家和地区。以上国家基本都在使用Abbott的Prism化学发光系统。项目涉及：HBsAg，anti-HCV，anti-HIV1/2的血清学检测。新加坡血液中心的检测设备CLIA技术在血液筛查的应用情况（之二）日本使用的是自己开发的方法（CLEIAs,CL4800testingsystem,Fujirebio,Tokyo,Japan），检测项目增加了anti-HBc（定性），anti-HBs（定量）。同时日本还常规检测anti-HTLV1。CLIA技术在血液筛查的应用情况（之三）其他区域，如美国全部使用化学发光检测系统用于血液筛查。检测项目增加了anti-HBc，anti-HTLVI/II，anti-T-Cruzi(抗查格斯)等项目的检测。而在欧洲，化学发光也被广泛，如德国，法国等。病毒标志物的检测糖尿病各类激素水平检测感染性疾病心血管疾病肿瘤标志物检测临床应用广泛为什么血站实验室没有应用?规范要求用于血液筛查的检测试剂属于药品和三类医疗器械监督管理范畴，质量必须符合《中华人民共和国药品管理法》和《中华人民共和国医疗器械监督管理条例》的有关规定；而一般医院检验科试剂属于三类医疗器械监督管理目前没有国产CLIA试剂取得“药字”号注册资格。国产设备没有普及，只有少数进口企业的产品可以应用，且使用成本相对较贵化学发光免疫技术未在国内血站实应用原因法律法规法律、法规评估国产CLIA设备连续工作的稳定性、可靠性；评估国产CLIA试剂的检测灵敏度，特异性；评估CLIA检测技术血站实验室开展检测的可行性；测试目的-评估内容CLIA试剂:深圳迈瑞公司生产的磁微粒化学发光检测试剂。比对试剂：为血站现用的HBsAg3.0(Sorin)、HIV(Biorad)、TMA核酸检测试剂(Grifols)AntiHBc(科华、万泰、新创)及检测项目:HIV(Ab/P24

Ag)、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc检测平台:全自动化学发光分析仪，血站现有ELISA及核酸检测平台检测原理`材料：试剂及检测平台CLIA检测血样：2014年4月期间单独采集的2163样品(促凝管)考评试剂：CLIA磁微粒化学发光试剂(迈瑞)参考试剂：ELISA-HBsAg3.0(Sorin)、

HIV(Biorad)、AntiHBc(科华、万泰、新创)TMA核酸检测试剂(Grifols)样本测试原则样本在迈瑞CL2000i化学发光仪上测试HIV、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc，测试与血站血筛同步进行重复测样本挑选原则（重测三次）：考评试剂HBsAg结果与HBV核酸检测或HBsAg酶免结果不符的样本；考评试剂HBsAg结果为阳性或HBV核酸检验为阳性或HBsAg免疫检验结果阳性，而迈瑞HBeAg为阴性的样本；考评试剂HIV测试结果与HIV核酸检测或HIV酶免结果不符的样本CLIA实验设计

增强型ALP+AMPPD发光体系超顺磁性微粒子分离系统

模块化设计，单机最高240T/H，灵敏度高，精密度高，线性范围宽一键实现试剂在线更换，检测耗材少全自动化学发光仪CL2000i联机/拓展图单机图CLIA实验设计样本结果处理：以三种方法测试中两次测试一致的结果为CLIA系统最终结果。参考结果判定项目核酸结果ELISA结果参考结果（CLIA）HBsAg阳性阳性阳性阳性阴性阳性阴性阳性阳性阴性阴性阴性HIV阳性阳性阳性阳性阴性阳性阴性阳性阳性阴性阴性阴性Anti-HBc以三家结果AntiHBc(科华、万泰、新创)均相同为参考结果HBeAg阳性样本已罗氏和雅培结果为准，阴性样本即认为阴性工作流程献血样本采集样本离心处理化学发光及血站测试结果对比分析样本重测与结果分析HIV抗原抗体试剂盒测试结果3例ELISA阳性全部检出：对比试剂（罗氏+雅培）也为阳性；考察试剂初测23例假阳—后续分析：与采血管等有关；通过优化参数及试剂配方，19例重测全部转阴，剩余4例假阳。系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数NAT216302163ELISA216032163系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数NAT216302163MR系统2140232163系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数血站结果216032163MR系统2140232163MRHIV化学发光VS血站结果(血站结果为参比)99.07%2140100.00%3MRHIV化学发光VSNAT(NAT为参比试剂)98.94%21400.00%0ELISAVSNAT(NAT为参比试剂)99.86%21600.00%0HBsAg测试结果MR系统与血站结果共有13例样本结果不符。进行第三方试剂验证：罗氏HBsAg定量检测试剂盒与雅培HBsAg定量检测试剂盒系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数NAT215122153ELISA2144192163系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数ELISA2144192163MR系统215492163系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数NAT215122153MR系统215492163系统阴性样本阳性样本总样本数阴性符合率符合样本数阳性符合率符合样本数血站结论2142212163MR系统21549216399.86%21480.00%0MRHBsAg化学发光VS血站参考结果99.95%214142.86%9MRHBsAg化学发光VSNAT99.40%21380.00%0ELISAVSNATMRHBsAg化学发光VSELISA100.00%214447.37%913例结果不符HBsAg样本验证结果13例不符样本，迈瑞系统与罗氏系统完全符合，与雅培有2例不符。2例不符样本中1例(218#-20140407)深圳血站测试结果与雅培结果一致。1例(30#-20140421)深圳血站结果与雅培、罗氏和迈瑞结果均不一致！HBsAg样本日期样本编号核酸结果ELISA血站结论IU/ml结果IU/ml结果IU/ml结果20140415115NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg2014041610NegPOSPOS0.01Neg<0.05Neg0.04Neg2014041692NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041782NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140417116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg20140417218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.05POS2014041859NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041887NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042034NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140420218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042130NegNegNeg0.48POS0.241POS0.82POS2014042146NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg20140423116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg注：迈瑞系统cutoff为0.08IU/ml，罗氏为0.057IU/ml，雅培为0.05IU/ml深圳市血站测试结果MR系统测试结果罗氏e411系统测试结果雅培i1000系统测试结果12例参考HBsAg＋测试结果分析样本日期样本编号测试结果（IU/mL，CO=0.08IU/mL）ELISA核酸20140416200214203112460.00+-20140417200214303981420.00+-20140417200214304068420.00+-20140418200214203281460.00+-20140418200214203230420.00+-20140418200214005968420.01-+20140419200214203356440.00+-20140419200214101835460.00+-20140421200214203455420.00+-20140421200214101924440.00-+20140422200214101940440.01+-20140424200214304348460.01+-

捕获一例HIV窗口期背景：捐血者：男，39岁，在我中心第一次献血2015年3月15采集血样，16日同时进行ELISA一遍、NAT一遍检测。HIV检测试剂为抗体/抗原试剂，TMA核酸检测试剂；检测结果：ELISA-/NAT+3月27日（采血12天后）进行第二次抽样检测。检测结果：ELISA+/NAT+HIVELISA检测漏检例证HIVELISA检测漏检例证样本采集日期迈瑞HIVAg/Ab(COI)罗氏HIVAg/Ab(COI)罗氏HIVAg(COI)ELISATMA抗HIV硒标方法WB带型2015031562.5153.9399.980.23进口第四代0.019国产第三代＋－无特异性条带2015032758.1151.9890.3711.24进口第四代0.22国产第三代＋－无特异性条带对比测试结果说明:HIV化学发光法检测窗口期早于ELISA2.CLIA试剂性能与进口CLIA试剂对本例样品的HIV检测性能相当行业规范对CLIA方法的政策性完善民族企业的崛起和进步，国产试剂、检测平台的发展检测成本的降低国家对血筛试剂审批制度的改进

期待四、输血安全相关科研工作汇报专门从事血液病毒核酸检测的深入研究工作。研究输血潜在的感染风险，提高中心的科研水平。1.成立核酸研究室1.人才的引进：2013年以来引进多名博士、硕士，提高科研能力2.购置科研设备，建立研究平台3.建立先进的病毒分子生物学系统分析方法和技术。

聘请英国剑桥大学输血医学部JPALLAIN教授（英国两院院士）为我中心核酸研究团队客座