第二章 细胞培养设施和基本条件

第二章

细胞培养设施和基本条件细胞培养设施和基本条件实验室设计原则:防止微生物污染和有害因素影响要求:工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘划分不同功能区并用铝合金板隔开无菌操作区应在室内较少走动的内侧清洗和消毒安置在另室一般包括：准备室、培养室和缓冲室准备室：用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。培养室：用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。天花板不宜高过2.5M。缓冲室：（更衣室）41缓冲室专用培养实验室布局示意图普通细胞培养室内走廊宽敞的细胞培养区

实验室设备

一、最常用的大型必备装置和仪器

超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、离心机、冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等二、最常用的培养器具

l.过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器2.手术器械3.培养器皿：溶液瓶、培养瓶、培养皿、多孔培养板、移液管和吸管、离心管

净化工作台（必备！）

根据气流的方向分为垂直流超净工作台

水平流超净工作台

根据操作结构分为:单边操作及双边操作

超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。要注意检查是否堵塞！（看酒精灯）

超净工作台结构和模式图超净工作台使用前应用紫外灯照射30分钟。操作最好在操作区的中心位置进行，在设计上，这是一个较安全的区域。开启超净工作台风机并打开工作灯。

操作中严格遵守无菌操作规程。操作结束后，要认真清理操作台面，除必备的公共物品外，其余要带离工作台。清水擦拭后，再用75%酒精擦拭台面。超净工作台的使用及注意事项:CO2培养箱：用于维持适当温度、湿度与pH质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过0.5度;培养箱的温度设在35～37℃，这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。

培养容器需与外界保持通气状态箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精）水槽:用于保持一定湿度二氧化碳培养箱

CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2

。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：1.用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气2.保持培养箱内空气干净3.箱内用无菌蒸馏水保持箱内湿度4.不宜长时间将门打开5.器械和手的消毒用途:烘干和干热消毒玻璃器皿和金属器械等使用时注意:1.鼓风与升温同时进行，100度时可停止鼓风2.禁止先升温后鼓风3.100度以下时再打开箱门4.塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒电热恒温鼓风干燥箱高压灭菌锅倒置显微镜

倒置显微镜(InvertedMicroscope)的组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。学生正在进行细胞观察倒置显微镜

倒置显微镜水纯化装置很少使用离子交换装置处理的水蒸馏水装置分金属和玻璃两种洗刷装置人工洗刷*超声洗涤装置玻璃吸管洗涤自动双重纯水蒸馏器

超纯水仪超声波清洗机正压过滤器细胞冷冻贮存器离心机小型台式离心机符合分离细胞要求加样器不锈钢正压过滤器离心机

液氮罐

Operationof

Micropipette

1、selectsuitablepipetteandtipsaccordingtothedesiredvolume2、setthevolume3、extractingthesolutionthroughpushingbuttontoposition14、releasingthroughpushingtobottom磁力搅拌器精密pH计微孔板震荡器

器械（取材用）解剖刀解剖剪虹膜剪镊子注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长培养器皿等玻璃器皿