标准解读

《GB/T 40225-2021 肌动蛋白抗体的检测 免疫印迹法》是一项国家标准,该标准规定了通过免疫印迹法(Western Blot)来检测肌动蛋白抗体的具体方法。适用于医学研究、临床诊断等领域中对于肌动蛋白抗体存在与否及其浓度水平进行测定。

在准备阶段,首先需要确保所有实验材料和试剂的质量符合要求,包括但不限于抗原、一抗、二抗、封闭液等,并且操作环境需达到生物安全实验室的相关要求。样品处理过程中,根据待测样本类型不同,可能涉及细胞裂解物制备或血清直接使用等步骤。关键在于保证目标蛋白质能够有效提取并保持其天然状态下的结构特性。

接下来是电泳分离环节,采用SDS-PAGE技术将混合物中的各种蛋白质按照分子量大小区分开来。之后通过转移膜装置把已分离好的蛋白质从凝胶转移到固相支持介质上,通常为硝酸纤维素膜或PVDF膜。此过程需注意控制电流强度及时间以获得最佳转印效果。

完成转移后进入免疫反应阶段,首先是用适当浓度的一抗溶液与膜上的特异性抗原结合;经过洗涤去除未结合的一抗后,再加入带有标记物的二抗,使其识别并与一抗形成复合体。最后通过化学发光或其他显色系统显示出阳性条带的位置,从而判断是否存在针对肌动蛋白的特异性抗体以及它们的大致含量。

整个流程强调了实验条件的选择、操作规范性以及结果判读的重要性。每一步骤都需严格按照标准给出的方法执行,以保证数据准确可靠。此外,还应定期对仪器设备进行校准维护,确保长期稳定运行。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2021-05-21 颁布
  • 2021-12-01 实施
©正版授权
GB/T 40225-2021肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法_第1页
GB/T 40225-2021肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法_第2页
GB/T 40225-2021肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法_第3页
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文档简介

ICS07080

CCSA.40

中华人民共和国国家标准

GB/T40225—2021

肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法

Determinationofactinantibody—Westernblottingmethod

2021-05-21发布2021-12-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法

GB/T40225—2021

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

:

服务热线

:400-168-0010

年月第一版

20215

*

书号

:155066·1-67373

版权专有侵权必究

GB/T40225—2021

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC387)。

本文件起草单位中国测试技术研究院成都正能生物技术有限责任公司深圳市第二人民医院

:、、、

甘肃中商食品质量检验检测有限公司深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司上海市计量测试技术研

、、

究院

本文件主要起草人李怀平周李华邱俊康马丽侠顾大勇张秦川张译文蒋子敬王伟叶德萍

:、、、、、、、、、、

何海宁洪霞刘刚

、、。

GB/T40225—2021

肌动蛋白抗体的检测免疫印迹法

1范围

本文件描述了肌动蛋白抗体的免疫印迹检测方法

本文件适用于基于免疫印迹法原理的肌动蛋白抗体的测定

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

31

.

肌动蛋白actin

一类形成微丝的球状多功能蛋白质细胞骨架的主要成分广泛表达于真核细胞中

,,。

注1目前发现肌动蛋白至少存在种异构体形式主要分布在心肌骨骼横纹肌和平滑肌组织中调控细胞的收缩

:6,、,

能力也表达于非肌肉细胞调节细胞结构和活力

,,。

注2肌动蛋白分子质量为具有高度保守性在细胞中的表达相对稳定因此它常被用作

:45ku±3ku(1u≈1Da),,,

校正系统的内参

32

.

肌动蛋白抗体actinantibody

以肌动蛋白为抗原免疫动物之后获得的动物血清中能够与肌动蛋白特异性抗原抗体结合的免

,“-”

疫球蛋白的总称

4缩略语

下列缩略语适用于本文件

过硫酸铵

APS:(ammoniumperoxodisulphate)

二喹啉甲酸

BCA:(bicinchoninicacid)

化学发光试剂

ECL:(electrogeneratedchemiluminescence)

辣根过氧化物酶

HRP:(horseradishperoxidase)

乙基苯基聚乙二醇

NP-40:(NonidetP40)

磷酸盐缓冲液

PBS:(phosphatebuffersaline)

磷酸盐吐温缓冲液

PBST:(phosphatebuffersalinew

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