高效液相色谱常见问题分析与对策

高效液相色谱常见问题分析与对策流淌相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、峰拖尾原因解决方法1、筛板堵塞a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷填充色谱柱a、使用更长的色谱柱b、转变流淌相或更换色谱柱4PHPHPH5、样品与填料外表的溶化点发生反响ab、更改色谱柱B、峰前延原因解决方法上升柱温2、样品溶剂选择不恰当使用流淌相作为样品溶剂3、样品过载降低样品含量A1、A2C、峰分叉原因解决方法1、保护柱或分析柱污染问题仍旧存在，入口可能被堵塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流淌相转变样品溶剂。假设可能实行流淌相作为样品溶剂。原因解决方法1、样品过载E、早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当a、削减进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应a、调整系统连接〔使用更短、内径更小的管路〕b、使用小体积的流通池G、K’增加时，脱尾更严峻原因解决方法1、二级保存效应，反相模式a、参加三乙胺〔或碱性样品〕b、参加乙酸〔或酸性样品〕剂〔或离子化样品〕d、更换一支柱子2、二级保存效应，正相模式a、参加三乙胺〔或碱性样品〕b、参加乙酸〔或酸性样品〕官能团化合物〕d、试用另一种方法3、二级保存效应，离子对〔或碱性样品〕原因

、参加盐或缓冲、参加水〔或多解决方法1、缓冲不适宜a50-100mM的缓冲液bPkaPHI、额外的峰原因解决方法正常2、前一次进样的洗脱峰a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰a、检查流淌相是否纯洁b、使用流淌相作为样品溶剂c、削减进样体积J、保存时间波动原因解决方法调好柱温2、流淌相组分变化防止变化〔蒸发、反响等〕3、色谱柱没有平衡在每一次运行之前赐予足够的时间平衡色谱柱K、保存时间不断变化原因解决方法1、流速变化重设定流速从泵中除去气泡3、流淌相选择不恰当a、更换适宜的流淌相b、选择适宜的混合流淌相L、基线漂移原因解决方法〕掌握好柱子和流淌相的温度，在检测器之前使用热交换器图2〔〕使用氦气。3、流通池被污染或有气体用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N〔不要用盐酸〕〕取出堵塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流淌相配比不当或流速变化更改配比或流速。为避开这个问题可定期检查流淌相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流淌相发生变化时用中等强度的溶剂进展冲洗，更改流淌相时，在分析前用10-20倍体积的流淌相对柱子进展冲洗。7、流淌相污染、变质或由低品质溶剂配成HPLC8、样品中有强保存的物质〔高K’值〕以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步上升的基线。使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。重设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用的流淌相。将波长调整至最大吸取波特长M、基线噪音〔规章的〕原因解决方法1、在流淌相、检测器或泵中有空气流淌相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液音。如有必要，更换泵密封。3、流淌相混合不完全用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂〕削减差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备6、泵振动在系统中参加脉冲阻尼器〔不规章的〕原因解决方法如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流淌相污染、变质或由低质溶剂配成检查流淌相的组成。选择互溶的流淌相4、检测器/记录仪电子元件的问题断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调整器〕1N〔不能用磷酸〕清洗流通池8、检测器灯能量缺乏更换灯更换色谱柱10、流淌相混合不均匀或混合器工作不正常修理或更换混合器，在流淌相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置原因解决方法1、流淌相组成变化2、流淌相流速太低调整流速3、漏液〔特别是在柱子和检测器之间〕section3音。假设必要更换密封。调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载bc、柱子与检测器之间的d、记录仪响应时间太长5、a、小体积进样〔例如：、削减响应时间或、使用内径为d、削减响应时间增加浓度7、保护柱污染或失效更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低柱子。9、柱入口塌陷翻开柱入口，填补塌陷或更换柱子选择其它类型的色谱柱以改善分别效果11、柱温过低75℃12、检测器时间常数太大使用较小的时间常数P、分别度降低原因解决方法〕重配置流淌相2、保护柱或分析柱堵塞图假设问题仍旧存在色谱柱可能被强保存的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。假设问题仍旧存在，进口可能堵塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。Q、全部的峰面积都太小原因解决方法削减衰减的设定2、检测器时间常数设定太大设定较小的时间常数增大进样量使用正确的连接原因解决方法1、检测器衰减设定过低实行较大的衰减削减进样量正确连接记录仪诊状可能的缘由解决方法(一)保存时间变化柱温变化柱恒温，必要时需配置恒温箱等度与梯度间未能充分平衡至少用10缓冲液容量不够用柱污染每天冲洗柱柱内条件变化稳定进样条件,调整流淌相柱快到达寿命承受保护柱(二)保存时间缩短流速增加检查泵,重设定流速样品超载降低样品量键合相流失流淌相PH3~7.5流淌相组成变化防止流淌相蒸发或沉淀温度增加柱恒温(三)保存时间延长流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排解泵内气泡硅胶柱上活性点变化用流淌相改性剂,如加三乙胺,或承受碱至钝化柱键合相流失同前(二)3流淌相组成变化同前(二)4温度降低同前(二)5(四)消灭肩峰或分叉15%样品溶剂过强承受较弱的样品溶剂柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,承受较弱腐蚀性条件柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品进样器损坏更换进样器转子(五)鬼峰进样阀剩余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗样品中未知物处理样品柱未平衡重平衡柱,用流淌相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天配,用抗氧化剂HPLC(六)基线噪声气泡(锋利峰)流淌相脱气,加柱后背压HPLC检测器灯连续噪声更换氘灯电干扰(偶然噪声)承受稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)检测器中有气泡流淌相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾柱超载降低样品量,增加柱直径承受较高容量的固定相峰干扰清洁样品,调整流淌相PH钝化样品同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)3死体积或柱外体积过大 连接点降至最低,对全部连接点作适宜调整,尽可能承受细内径的连接收柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,承受保护柱(八)峰展宽进样体积过大同(四)1在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低集中1010%流淌相粘度过高增加柱温,承受低粘度流淌相检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器保存时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱柱外体积过大将连接收径和连接收长度降至最小样品过载进小浓度小体积样品高效液相色谱常见故障的判定及解决方法总汇〔二〕12、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、分别度降低原因解决方法1、流淌相污染或变质〔引起保存时间变化〕1、重配置流淌相2、保护柱或分析柱堵塞图2、去掉保护柱进展分析。假设必要则更换保护柱。口处的筛板或更换色谱柱。Q、全部的峰面积都太小原因解决方法1、检测器衰减设定过高1、削减衰减的设定2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数3、进样量太少3、增大进样量4、记录仪连接不当4、使用正确的连接R、全部的峰面积都太大原因解决方法1、检测器衰减设定过低1、实行较大的衰减2、进样过多2、削减进样量3、记录仪连接不正确3、正确连接记录仪A、手动进样阀，转动不灵原因解决方法1、转子密封损坏1、更换或调整转子密封2、转子太紧2、调整转子的松紧度B、手动进样阀，载样困难原因解决方法1、进样阀安装不当1、重安装2、定量环堵塞2、清洗或更换定量环3、进样器污染3、清洗或更换进样器4、管路堵塞4、清洗或更换管路C、自动进样阀，不能转动原因解决方法1、无压力〔或电源〕1、供给恰当的压力〔电源〕2、转子太紧2、调整转子的松紧度3、进样阀安装不当3、重安装D、自动进样阀，其它问题原因解决方法1、堵塞1、清洗或更换堵塞部件2、机械故障2、见随机修理手册3、掌握器故障3、修理或更换掌握器由气味、景象和声音可以觉察的问题〔除了味觉味。大局部的问题是可以通过眼睛看到。A、溶剂的气味原因解决方法1、漏液1section32、溅出2、a、检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净B、热气味原因解决方法1、仪器过热1、a、检查并调整通风设施b、检查并调整温度设定c、关掉仪器，查找修理手册C、读数不正常原因解决方法1、压力不正常1section22、柱温箱问题2、ab、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯D、灯警告原因解决方法1、压力超出极限值1、ab、检查并调整极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、警告音原因解决方法1、溶剂泄漏/溅出1、找到并解决2、其它警告音2、见用户手册F、刺耳的短音或长音原因解决方法1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进展恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册由气味、景象和声音可以觉察的问题〔除了味觉味。大局部的问题是可以通过眼睛看到。A、溶剂的气味原因解决方法1、漏液1section32、溅出2、a、检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净B、热气味原因解决方法1、仪器过热1、a、检查并调整通风设施b、检查并调整温度设定c、关掉仪器，查找修理手册C、读数不正常原因解决方法1、压力不正常1section22、柱温箱问题2、ab、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯D、灯警告原因解决方法1、压力超出极限值1、ab、检查并调整极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、警告音原因解决方法1、溶剂泄漏/溅出1、找到并解决2、其它警告音2、见用户手册F、刺耳的短音或长音原因解决方法1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进展恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册常见故障及日常维护您更多的维护方法。溶剂瓶问题维护1、进口筛板堵塞1、a、更换〔3-6〕b、过滤流淌相，0.5u2、气泡2、流淌相脱气泵问题维护1、气泡1、流淌相脱气、泵密封损坏3、单向阀损坏3、过滤流淌相，运用在线过滤，预备备用单向阀进样阀问