细胞工程培养基

培养基种类成分配制技术筛选方法第三讲培养基

教学内容

培养基种类

完全培养基

初代培养基

继代培养基

固体培养基

液体培养基

基本培养基

诱导培养基

增殖和生根培养基基本培养基

◆

1962年由Murashige和Skoog为烟草组培设计◆无机盐、离子浓度高，含高K、N，硝酸盐含量较高，含铵盐。◆营养丰富

◆加速合作愈伤组织和培养物生长

MS培养基Miller培养基B5培养基SH培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基基本培养基

◆无机元素用量是MS的1/3－1/2◆微量种类少

◆无肌醇MS培养基Miller培养基B5培养基SH培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基基本培养基

◆1943年White培养番茄根尖时设计◆无机盐量较低◆使用广泛

◆适合生根培养、胚胎培养等MS培养基Miller培养基White培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基基本培养基

◆1968年Gamborg在大豆根细胞培养时设计◆含较低的铵，硝酸盐和盐酸硫胺素用量较高。

◆适合双子叶植物，尤其木本植物组培。MS培养基Miller培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基基本培养基

◆特点与B5相似，硫酸铵改用磷酸二氢铵。

◆无机盐浓度较高。

MS培养基Miller培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基基本培养基

◆1974年朱至清等为水稻花药培养而设计◆成分简单◆硝酸钾和硫酸铵含量高

◆适合花粉、花药培养MS培养基Miller培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基基本培养基

◆1974年为原生质体培养而设计◆有机成分复杂

◆用于原生质体培养(包括原生质融合的培养)MS培养基Miller培养基SH培养基B5培养基N6培养基KM-8P培养基White培养基营养分布均匀，生长发育整齐一致，但通气性差。通气性较好，便于操作，但营养分布不均，生长发育不一致。固体培养基液体培养基

MS培养基配方硝酸铵1650硫酸锌8.6硝酸钾1900氯化钴0.025氯化钙440硫酸铜0.025硫酸镁

370钼酸钠0.25磷酸二氢钾170碘化钾0.83硫酸亚铁27.8硼酸6.2EDTA-Na237.3烟酸0.5肌醇100盐酸吡哆素0.5硫酸锰22.3盐酸硫胺素0.1

甘氨酸2

培养基的成分

植物激素

无机盐

有机物质培养体支持材料

辅助物质水

分无机盐

元素名称

添加形式

NKNO3,NH4NO3大量

PKH2PO4NaH2PO4元素

KKClKNO3(≥0.5mmol/L)CaCaCl2·2H2OMgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·

7H2OFeFeNa2-EDTA微量

BH3BO3元素

MnMnSO4

(≤0.5mmol/L)CuCuSO4

MoNa2MoO4·2H2OClCaCl2·2H2O有机物质维生素

氨基酸天然复合物

椰乳香蕉泥水解酪蛋白碳水化合物

马铃薯其

它碳水化合物

种类：蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖等。蔗糖浓度：2-3%，胚培养为4-15%。注意：

高压灭菌部分糖会分解。大生产时可用白砂糖。功能：

能源；维持渗透压（1.5－4.1大气压）；种类：B族维生素、B1、B6、烟酸、生物素（ＶＨ）、抗坏血酸（ＶＣ）、肌醇、泛酸或泛酸钙。浓度：0.1－1.0mg/L

功能：参加酶的形成参加蛋白质和脂肪代谢等生命活动

VB1促愈伤组织产生，提高活力

VB6

促根生长

Vpp与代谢和胚发育有关

Vc防组织褐变维生素肌醇促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成对组织细胞繁殖、分化的促进作用浓度100mg/L

肌醇（50－100％）影响B1的效应。椰乳：促愈伤组织和细胞培养，用量10～20%。使用注意茎尖大小。

天然复合物香蕉泥：对pH值缓冲大，用量150～

200ml/L，

应用在兰花组培。

水解酪(乳)蛋白：浓度100-200mg/L，多用于微茎尖培养。

天然复合物马铃薯提取液：对pH值缓冲大，用量150-200g/L，使苗壮。其它：

荸荠汁、玉米汁、0.5％酵母提取物、麦芽汁、番茄汁。

氨基酸种类：甘氨酸、酰胺、水解酪蛋白等。功能：蛋白质组成成分植物激素1.生长素类（1）种类：

IAA(吲哚乙酸)、NAA（-萘乙酸）、IBA(吲哚丁酸)

2,4－D（2.4-二氯苯氧乙酸）（2）机理：渗入细胞并与细胞某种特定受体结合，发生特定生化反应，产生一定的生长效应。（3）作用：诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂和伸长。（4）浓度：

0.05－5mg/L植物激素2.细胞分裂素（CTK）

（1）种类：6－BA（6-苄氨基嘌呤）、KT（激动素）、ZT(玉米素)（2）机理：与细胞分裂和分化有关；生长素参与核的有丝分裂但与胞质无关；分裂素则促进核分裂又促进胞质分裂，也诱导细胞扩大；解除顶端优势，促进侧芽生长。（2）作用：诱导不定芽分化和茎、苗增殖。（3）浓度：0.05－10.0mg/L植物激素3.赤霉素（GAs）

（1）种类：GA3(赤霉素)（2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。注意：不耐热。

WTripening-inhibitor(rin)西红柿的RIN基因突变导致果实不能成熟

便于长距离运输和延长货架期Firstgeneticallywholefoodinfoodsupply(1994):FlavrSavr'tomato(U.S.A)“丽春”硬度较对照增加7%，储藏特性明显优于对照，在28-32度夏季自然条件下存放40天。多聚半乳糖醛酸酶基因的抑制表达

我国的转基因番茄百日鲜---华中农大利用基因工程技术构建反义ACC氧化酶（或者称为乙烯形成酶EFE）基因载体，通过农杆菌介导转化，获得转基因番茄植株果实耐贮藏，果实在25℃温度下，可贮藏40－50天，较对照延长贮藏期20－30天西红柿果实成熟的分子调控模式控制果实形状的关键基因位点-fs8.1果实由传统的椭球形变为近长方体形，便于机器收割培养体支持材料1.琼脂(1)用量6－10g/L(2)种类琼脂粉琼脂条(3)作用固化作用注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。2.其它

玻璃纤维滤纸桥海绵等辅助性物质抗生素抗氧化物活性炭抗生素链霉素青霉素庆大霉素功能防止外植体内生菌造成的污染。种类青霉素链霉素土霉素四环素氯霉素利福平卡那霉素庆大霉素等用量

5－20mg/L注意抗生素对组织生长有抑制作用，使用要慎重。

抗氧化物2.用量：50－200mg/L，3.作用：防止氧化4.注意：可用抗氧化剂洗涤外植体伤口表面。1.常用抗氧化剂：半胱氨酸、VC

活性炭1.作用：

吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1-0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）；有利于胚胎培养。2.常用浓度：0.5－10g/L3.注意：活性炭具副作用。植物组织培养常用培养基成分培养基（单位：mg／Ｌ）

成分WhiteHellerMSERB5NitschN6

无机物NH4NO3

－－16501200－720－KNO380---190019002527.59502830CaCL2.2H2O---75440440150---166CaCL2---------------166---MgSO4.7H2O750250370370246.5185185KH2PO4------170340---68400(NH4)2SO4------------134---463Ca(NO3)2.4H2O300------------------NaNO3---600---------------Na2SO4200------------------NaH2PO4.H2O19125------150------KCL65750---------------KI0.750.010.83---0.75---0.8WhiteHellerMSERB5NitschN6H3BO31.516.20.633101.6MnSO4.4H2O50.122.32.23---254.4MnSO4.H2O--------10----ZnSO4.7H2O318.6--2101.5Zn.Na2.EDTA------15------Na2MoO4.2H2O----0.250.0250.250.25--MoO30.001------------

CuSO4.5H2O0.010.030.0250.00250.0250.025--CoCL2.6H2O----0.0250.00250.025----ALCL3--0.03----------NiCL2.6H2O--0.03----------FeCL3.6H2O--1----------Fe2(SO4)32.5------------FeSO4.7H2O----27.827.8--27.827.8Na2.EDTA>2H2O----37.337.3--37.337.3NaFe.EDTA--------28----

有机物WhiteHellerMSERB5NitschN6

肌醇----100--100100--

烟酸（B3）0.05－0.50.5150.5B60.01－0.50.510.50.5B10.01－0.10.5100.51

甘氨酸3－22－22

叶酸－－－－－0.5－

生物素－－－－－0.05－

蔗糖2％－3％4％2％2%5%细胞分裂素与生长素对器官或愈伤组织的影响复习思考题：比较固体培养基和液体培养基的优缺点配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？培养基的成分包括哪几类？各有何作用？在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？抗生素的作用是什么？？

第二节最佳组培方案的筛选组培方案筛选步骤：文献检索预备试验参观咨询最佳组培方案筛选正交试验文献检索

◆植物的学名、品种名、商品名◆此种植物组培的相关报道◆重点收集分析的技术信息收集、分析的技术信息◆外植体取样时间与外植体类型◆诱导、继代、生根培养基配方◆培养条件（温度、湿度、pH值等）◆移栽驯化条件及基质配比预备试验

针对某些关键因素简单拟定试验方案，粗略判断某因素是否有影响及影响程度、剂量的大致范围。观察。。。L16(45)正交表

正交试验L16

(45)正交表正交表的代号试验方案形成的处理数试验因子数（列号数）试验因子的作用剂量水平数（可容纳的水平数）正交试验

L16(45)诱导苹果生根正交试验结果L4(23