微生物检验重点知识

微生物识要点：一、葡萄球1致病因素：血浆凝固酶；溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮剥脱毒素；TSST-1；耐热核酸酶；葡激酶；透明质酸酶；脂酶。2临床意义：疖痈等；内脏感染肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心内膜炎；全身感染败血症、脓毒血症；（毒素相关）食物中毒；烫伤样皮肤综合症；毒性休克综合症；假膜性肠炎。3鉴定：溶血；

细菌和菌落形态；生化实验：触+微阳性；链+肠阴性葡：杆菌肽R，呋喃唑酮S金黄色葡萄球菌特征：普通平-脂溶性黄色色素；血琼-β血浆凝固酶+；甘露醇发酵+

耐热核酸酶+2何确定标本中离的细菌为萄球菌并确其有无病性。答①直接镜检经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌可初步报告疑为葡萄球菌需进一步分离培养鉴定②分离培养血培养需经增菌后转种血平板进一步鉴定若无细菌生长需连续观察7天并以血平板确定有无细菌的生长脓液尿道分泌物脑脊液沉淀物可直接接种血平板37℃过夜，可形成直径约2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。③试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定，SPA检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA测有A蛋白的存在。二、链球菌：致病因素：M白；脂磷壁酸；透明质酸酶；链激酶；链道酶；链球菌溶血素；致热外毒素。临床意义A群：化脓性炎猩红热风湿热急性肾小球肾炎IIIII肺炎链球菌大叶性肺炎中耳炎乳突炎鼻窦炎、脑膜炎、心内膜炎。3鉴定：形态。培养+血清等，血琼脂-灰白色，半透明或不透明表面光滑小菌落；肺炎链球菌呈脐窝状。几中链球菌特征：群：血平板β溶血;杆菌肽-敏感群：血平板β溶血;杆菌肽-耐药CAMP+；胆汗七叶苷（—尿酸水解试验（+）草绿色链球菌：血平板α溶血；耐药；胆汗七叶苷（—肺炎链球菌血平板α溶血optochin敏感菊糠分（+汗溶（+荚膜肿胀实验（+）三、大肠埃希菌致病因素：侵袭力（K抗原和菌毛内毒素；肠毒素（LT）临床意义：肠道外感染（泌尿系统感染为主，腹膜炎，胆道感染，肺炎等；肠道感染：EHEC、ETEC、EPEC、EIEC、EaggEC3鉴定：普通平板（湿润、光滑、灰白中等大小菌落）有便毛，有动力，葡萄糖发酵（+硝酸盐还原（+氧化酶（—酶（+）中国兰平板（蓝色伊红美蓝（紫黑色）麦康凯和SS（红色）四、志贺菌属1致病因素：侵袭力（菌毛毒素；外毒素（志贺毒素，也称Vero）2临床意义1）急性细菌性痢疾：腹痛腹泻脓血粘液便，里急后重，发热，便中带血，粘液和；中毒性菌痢多见于小儿，）慢性细菌性痢疾；3）携带者3鉴定：葡萄糖发酵（+硝酸盐还原（+氧化酶（—酶（）接种SS和麦康凯平板分离出无色透明的小菌落为可疑志贺菌血清学鉴定。5.述对疑似疾患者行病原学诊的常规快速法答：常规鉴定：①初步鉴定②最后鉴别③鉴别试验④血清学鉴定⑤非典型菌株可用传代法及毒力试验进行鉴定。快速诊断直接凝集②免疫荧光菌球法③协同凝集试验④乳胶凝集试验⑤分子生物学方法五、沙门菌属致病因素侵袭力（Vi抗原毒素，肠毒素。临床意义胃肠炎（食物中毒血症和败血症；肠热症（伤寒副伤寒）3鉴定：接种SS麦康凯平板，分离出无色、透明的小菌落为可疑沙门氏菌，需进一步生化反应鉴定，3如何根据体和抗体的化特点断肥达试验结果？答：若O、H凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大，若两者均低，肠热症的可能性小，若高H高，可能预防接种或非特异性回忆反应，若OH不高，则可能感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。4对肠热症患进行微物学检查时本采集注意什么？答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第1、2取外周血，第2、3周取粪便、尿液，全程可取骨髓分离培养细菌。六、铜绿假单胞菌其生物学特性主要有℃不生长，而42℃生长。在血琼脂、麦康凯培养基上均可形成5不同形态的菌落，在普通培养基上可产生多种色素。鉴定：革兰阴性杆菌，葡萄糖氧化发酵（氧化型力阳性，氧化酶（+触酶（+专性需氧，营养要求不高，麦康凯上生物良好，初始分离培养基特征性菌落（扩展性，平坦，具有锯齿边缘，金属性光泽，产生蓝绿色色素，玉米面气味）度长，4度不长。七、嗜血杆菌简述流嗜血杆菌的物学特.答：革兰阴性短小球杆菌，无芽胞、无鞭毛、不能运动，多数菌有荚膜。需氧或兼性厌氧最适生长温度℃，最佳培养基是巧克力琼脂。临床意义：脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎，鼻窦炎，中耳炎鉴定：培养特性，5-10%，X因子，因子；血琼脂：卫星现象；巧克力平板，露滴状菌落。八、霍乱弧菌霍乱患为什么会出剧烈腹及严重脱水症状？答霍乱弧菌可产生致泻性极强的霍乱肠毒素该毒素由个A亚单位和5个相同的单位组成，B亚单位使毒素分子与真核细胞上的受体结合，A单位具有酶活性功能。A亚单位进入胞后，激活腺苷环化酶，令胞cAMP水平增高，导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔，同时钠的吸收减少，导致严重的腹泻和呕吐.九白喉棒杆菌简述白棒状杆菌的病过程答白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉头气管及鼻腔粘膜有时皮肤结膜等部位也可见到传染源为患者及带菌者细菌多随飞沫或污染的物品传播感染后白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素，引起局部炎症和全身中毒症状。白喉杆菌在侵犯局部增殖，产生外毒素致病2．述白喉菌体外毒力验的原、方法及结判断。答：①琼脂平板毒力试验。将含20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中，每只平皿10ml℃冷却在凝固之前将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉于琼脂内，制成平板Elek平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画直线接种，划线宽度约6-7mm，两端与皿壁连接。同时，与之相距处平行划线接种一标准产毒菌株作为阳性对照37℃培养24-48小时若菌苔两侧出现斜向外延伸的乳白色沉淀线并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合则为产毒株②SPA协同凝集试验白喉抗毒素IgG先吸附在上入待检菌培养物上清液。若有白喉外毒素则与SPA-IgG结合出现可见的凝集反应③对流电泳将已知的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中电泳后若两孔之间出现白色沉淀线，表明待检菌为产毒株。鉴定：革兰染色阳性，有明显的异染颗粒的杆菌，无荚膜，无鞭毛，菌体长短不一，直或微弯，一端或两端膨大，排列呈V等文字形碲酸钾血培养出黑色菌落，有或无狭窄B溶血，菌落灰白色，隆起，湿润。九结核菌.致病机制：荚膜。脂质：包括索状因子，磷脂，硫酸脑苷脂，蜡D。3蛋白质与蜡质D结合使机体产生超敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状。2.结核分枝菌细胞中脂质含量，这一点有何意义答：结核分枝杆菌胞壁含脂质多，与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等特性有密切关系，脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性；细胞壁含大量脂质，可防止菌体内水分的丢失，故对干燥的抵抗力特别强；同时影响营养物质的吸收，故生长缓慢，且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质D、硫酸脑苷脂等毒性成分以不同机制致病。3简述从标本检验结分枝杆菌的法。答：1．显微镜检查(1)直接涂片染色镜检：是一种临床常用的简易快速的检查方法。直接涂片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀／min，20min)的尿沉淀物—接种环涂片，涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进行齐-尼抗酸染色，或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查，后法用荧光显微镜高倍镜检查镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少个视野结核分枝杆菌抗酸染色后呈红色其它细菌和细胞为蓝色经荧光染色的结核分枝杆菌在黑色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸性杆菌或“未找到抗酸性杆菌而不能报告“找到结核分枝杆菌(2)浓缩集菌涂片检查法：如果直接涂片镜检不易检出结核杆菌应采用浓缩集菌涂片检查法以提高结核杆菌的检出率所谓浓缩集菌涂片即为将采集标本离心取沉淀涂片或是采用漂浮集菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取—个接种环，涂抹面积大约直径在15mm可，干燥固定后染色镜检2．核酸检测用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染设计结核分枝杆菌特异片段的引物进行扩增然后用结核分枝杆菌rRNA序列特异的DNA探针与之杂交PCR技术的特异性与敏感性均大于953的检测用ELlSA法检测患者血清中抗，可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一结核病人的血清阳性率为80—90。4简述抗酸染的步骤及结，并举两种抗酸菌答：①初染：石炭酸复红加温染5min②脱色：3%的盐酸酒精脱色1min③复染：美兰染1min果：抗酸菌为红色，非抗酸菌为蓝色。结核分枝杆菌与麻风分枝杆菌均为抗酸菌5．患者怀患有肺结核如何进微生物学检？（包标本采集至告结果的过程，检查法应有统方法和快检查方）答：1）标本采集：根据感染部位不同，采集不同的标本。）标本直接检查：①显微镜检查②核酸检测③抗PPDIgG的检测。3）分离培养与鉴定4）药物敏感性试验5）免疫学诊断6）动物接种梅毒螺体获得性毒（TP）:一期：硬疳；二期：毒疹；期皮肤黏膜疡，内器官肉芽。标本直接检测1、暗视野显微镜检查2、免疫荧光染色、镀银染色法4、核酸检测。抗体检测性病研究实验室试验VDRL)2快速血浆反应素环状卡试验RRR甲苯胺红不加热血清试验（）荧光梅毒螺旋抗体吸收试验FTA-ABS；荧光梅毒螺旋抗体双染色试验FTA-ABS-DS;抗梅毒螺旋抗体的微量血凝检测MHA-TP;抗梅毒螺旋抗体明姣颗粒凝集试验ELISA1.较支原体与菌L型主要区（表格自）【生物学性状与致病性--细菌L型--原体】--{培养特性--需要高渗-需要胆固醇}{落-油煎蛋状，0.5-1mm---油蛋状0.1-0.3mm}{态--高度多形态性--高度多形态性}{大小--大小为µm--小为µm}{细胞膜--不含固醇--含高浓度固醇}{细胞--缺乏或--}细胞壁缺失的原因-青霉素、溶菌酶和胆汁等作用所致，去除条件可恢复--遗传}{通滤器-能通过滤器--通过滤器}{青霉素的作用--抵抗--抵抗}{液体培养--有一定混浊度附壁---混浊度极低}{病性--引起慢性感染，如骨髓炎、尿路感染和心内膜炎--原发性非典型性肺炎，泌尿生殖道感染和条件致病}1.述衣原体独的发育期。答沙眼衣原体严格寄生在细胞内有独特的发育周期在其繁殖发育的周期内，可见两种形态，原体及始体。原体具有感染性，通过表面受体吸附于易感细胞并被细胞吞噬进体内在吞噬体内体积增大进入增殖状态成始体。始体在吞噬体内以二分裂的形式进行分裂繁殖出子代并成熟为原体从易感细胞中释放出来，再感染新的易感细胞。2.眼的病原体其传播式。答：沙眼的病原体是沙眼衣原体，传播方式主要通过眼-眼或眼-手-眼传播3.原体有哪些要特点答：①形态多为球型，革兰染色阴性原体小，介于细菌和病毒之间，始体大，大小与细菌相似。②代谢，缺乏能量来源，故严格的细胞内寄生③有独特的发育周期④有DNA和RNA两种核酸⑤由肽聚糖组成的细胞壁多种抗生素敏感。4.原体引起哪重要疾？答：能引起人类的沙眼、泌尿生殖道的感染和呼吸系统等疾病2.述白色念菌感染微生物检查法及结分析答①直接镜检可见革兰阳性圆形或卵圆形芽生孢子及假菌丝②分离培养在沙氏培养基上形成乳白色或淡黄色类酵母菌落检可见假菌丝及成群的卵圆形芽生孢子③血清学实验可检测多种假丝酵母菌的抗体用或胶乳凝集实验可检出白假丝酵母菌细胞壁甘露聚糖动物实验将白假丝酵母菌悬液经尾静脉或腹腔注入小鼠或耳静脉注入兔体内，5-7天后动物死亡，解剖发现肾、肝等有脓肿。白色念菌检验：1标本直接检查直接显微镜检查；G试验，也称螯试验，也测定1-3-B-D-聚糖；抗原检测，ELISA免疫印迹；核酸检测；2培养鉴定接种沙氏培养基，或度培养1-4天，可见奶油色类酵母样菌落，镜检可见假菌丝和芽生孢子。鉴定试验：1芽管形成试验2厚膜孢子形成试验3糖同化或发酵试验。白色念菌鉴定的依有哪些答①直接镜检观察到圆形或卵圆形的芽生孢子假菌丝假菌丝中隔部伴有芽生孢子，顶端有厚壁的厚膜孢子，革兰染色阳性，着色不均匀。②玉米琼脂室温及35℃均生长并形成顶端厚膜孢子，42也能生长。③芽管形成试验阳性。④葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖发酵试验阳性，蔗糖、乳糖发酵试验阴性。⑤葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖同化试验阳性，乳糖同化试验阴性。⑥三氮唑氯试验，培养基不变色或淡红色。桥。新生隐菌主要侵犯部位为肺、脑、脑膜，也可侵犯皮肤，骨，关节致病物质为荚膜；标本直接检测：1显微镜检查2抗原检测3抗体检测4核酸检测1.述流行性冒病毒形态结构及主要结成分功能。流感病毒呈球形或丝状⑴流感病毒的内部结构核衣壳：病毒分片段的，结合有核蛋白NP以及与复制和转录有关的三种依赖RNARNA聚酶蛋白。呈螺旋对称。基质蛋白M蛋白盖在核衣壳外面M蛋白抗原性稳定，也具有型特异性。外膜：来自宿主细胞的脂质双层膜。⑵流感病毒的辅助结构血凝素(HA)：HA（病毒吸附护性抗原，血凝抑制抗体保护性抗体)神经氨酸酶（NA）（核衣壳释放）与病毒释放有关。2.述分离与定流感毒常用的实室检验法有些。.主要包括病毒分离培养、血清学诊断和快速诊断方法3.型流感病为何容引起大流行流感病毒节段，甲型和乙型由8个节段，丙型由7个节段构成。甲型流感病毒根据其表面HA和NA抗原性的不同，可分为若干亚型。4.述流感病的抗原异。抗原漂（antigenicdrift因HA或NA的点突变造成变异幅度小属量变，引起局部中、小型流行。抗原转换（antigenic）因HA或NA的大幅度变异造成，属质变，导致新亚型的出现，引起世界性的暴发流行。轮状病临床意：月婴幼儿呈急性胃肠炎感染，24-72小时潜伏，80%儿先发热，呕吐和腹痛，随即频繁腹泻，第10-20次，淡黄色水样便或蛋花汤样酸性便呀白色米汤样便，无粘液和脓血，恶臭。简述轮病毒的微生检验方⑴标本采集与处理⑵标本直接检查①电镜和免疫电镜检查②抗原检测③病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳分析④核酸检测⑶病毒分离培养2.述乙型肝病毒的态结构。球形,双层衣壳。外衣壳包膜(质双层+白质HBsAg等内衣壳：HBcAg、HBeAg内部：DNA---环状双链、DNA多聚酶简述乙肝炎病毒的因组及功能。不完全双链环状DNA，含4个ORF,编码蛋白S：HBsAg,Pre-s1,Pre-s2C：HBcAg，HBeAgP：polymerase多聚酶X：HBxAg基因简述乙肝炎病毒的原组成其意义。HBV抗原组成⑴、HBsAg表面原：是机体受感染的主要标志之一。具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体，即抗。⑵、HBcAg核心抗原：HBcAg主要定位于感染细胞核内不易从患者血清中检出但也可在肝细胞膜表面表达宿主CTL作用的主要靶抗原HBcAg抗原很强能刺激机体产生抗，但无中和作用。检出高效价抗HBc，特别是抗则表示HBV在肝内处于复制状态⑶、HBeAg核心抗原HBeAg可作为HBV复制及血清具有传染性的标志。急性乙型肝炎进入恢复期时HBeAg消失抗HBe阳性但抗Hbe亦见于携带者及慢性乙型肝炎血清中。抗HBe说明病毒感染性较低（是预后良好的征象）简述乙肝炎病毒抗抗体系检测的用途⑴乙型肝炎的诊断⑵判断传染型⑶判断预后⑷筛选献血员⑸检测乙肝疫苗接种效果⑹流行病学调查3．细胞病感染的病原直接检方法有哪些