冰冻切片知识概述

石蜡切片与冷冻切片的区分是什么简洁的说简洁的说,石蜡切片是标本要这固定后经脱水,浸蜡后才能用于切片,冷冻切片是直接把标本放在切片机上使它即刻冰冻,就可以切片了.再简洁的说一种是要经过很多工序才能用于切片,一种是直接用于切片.简介冰冻切片〔简介冰冻切片〔frozensection〕是一种在低温条件下使组织快速冷却到肯定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片这些方法，随着时代的变迁，科技的进展，很多年前被认为是格外重要的技术，现在也逐步被淘汰了。固然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。冰冻切片的应用〔冰冻切片的应用〔1〕在手术进展中，突然觉察病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。〔2〕了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。〔3〕对于已确定为恶性肿瘤的患者，则需要了解其手术范围是否足够，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。〔4〕在做剖腹探查时所觉察的肿块或者异样的组织。〔5〔5〕显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。〔6〕某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。〔7神经病理学技术中的某些染色法如EagerMarchiCajalHortega氏法和Holzer氏法等。〔8〕对某些物质所进展的免疫荧光的争论。术中为何做冰冻切片术中为何做冰冻切片病理检查首先需要将切下的病变组织器官作一系列技术处理，包括固定、取材、脱水、浸蜡、包埋、切片和染色等，一般需花费24小时方可完成全部制片过程，然后由病理医生石蜡切片病理检查中最常用的方法。但是，这种方法从外科医生将病变组织切下，到做出病理诊断，前后通常需要3天的时间。病理医生切片是目前应用的最广泛的方法。快速冰冻切片是用于手术中病理诊断的一种方法，病理医生在收到手术标本后约l5分病理诊断的正确与否直接关系到手术台上处理患者的下一个步骤乳腺肿块切除后的冰冻报告是良性的纤维腺瘤，则可宣告手术完毕；如冰冻报告是乳腺癌，就需要进一步扩大手术范围有重大帮助和指导意义，诊断要力求正确、快速和牢靠。然而，快速冰冻切片要在如此之短的时间内做出诊断，难度相当高，取材有局限性，制作切片的质量也不如常规石蜡切片常规石蜡切片比照和存档。快速冰冻切片主要用于以下几种状况：〔如甲状旁腺、输卵管或输精管等〔如甲状旁腺、输卵管或输精管等；[1]冰冻切片的制作方法冰冻切片的制作方法低温恒冷箱冷冻切片制作法以ShandonAs620E冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器马上进展工作状态，并可持续10mins。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，并可持续15mins。有照明键一个，启，锁住工作间。除此之外，箱面的左边有四个按键，两个为快速自动进退键，两个为微小进退键，还有一个手动旋钮，调整修组织块时的进退。冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60℃左右，冷冻箱的中间为一台切片机，工作间的温度在0-30℃间可任意调整，并在箱面上的荧屏显示出来。操作方法及步骤为24×24×2mm。可稍为厚切，一般在5～10um间。即可。定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10--15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。冰冻切片时的留意事项方，假设有剩余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。“砍柴看柴势”，切片也是如此，假设胡乱放置，就不能收到很好的效果。组织中，形成了冰晶。刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。另者，调高冰冻点。从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差生了一种吸附力，使切片与载玻片结实地附贴在一起。假设使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度一样，没有发生上述的现象。冰冻切片的快速染色法冰冻切片附贴于载玻片后，马上放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。以往，起来，核染色质清楚，核仁明显，其他物质都完好保存。方法：30秒－1分钟。3－5分钟。⑤于碱水中返蓝⑤于碱水中返蓝20秒。⑦脱水，透亮，中性树胶封固。冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，阐述。优缺点优点优缺点优点1．简便，可以不需要对组织固定、脱水、透亮、包埋等手续即可进展切片，削减了一些中间环节。2．快速，用时短。3．组织变化不大。4．能很好保存脂肪，类脂等成分。5．能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类，特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受力量较差的细胞膜外表抗原和水解酶保存较好。缺点1．不简洁做连续切片。2．切取的组织不能过大，组织过大不简洁冻结或者组织冻结不均，影响切片及染色效果。3．不简洁制作较薄的切片。4．组织块在冻结过程中简洁产生水的结晶而影响细胞的形态构造及抗原物质的定位，并且组织构造也不如石蜡切片清楚。操作中的留意事项操作中的留意事项颖的组织制备CO2〔－78℃〕〔－80℃〕〔－190℃〕④烷〔19。液氮适用于组织化学，较安全。缺点：组织块易发生龟裂。固定组织的制备为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。但对很多脱氢酶和转移酶能灭活。故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定〔10分钟左右〕固定，可显示琥珀酸脱氢酶。电镜消灭后，需要保存细胞的超微构造，以4%缓冲戊二醛〔25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸pH84m8〕氧化复原酶和转移酶。恒冷箱温度一般在冷冻后10分钟，到接近冷室温度时再切，一般组织在－15～－20℃切片最易成Pearse及Bancroft的阅历如下：组织刀温度组织温度恒冷箱温度肝-18-10-5肾-15-8-5皮肤-35-10-5脑-18-5-5固定组织一般高3-5度切片机的使用抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离，使切片平滑通过。抗卷板略高于刀面的最高点。可凭阅历调整刀对组织的角度，一般刀为20゜。操作程序：先接通电源，调定恒冷箱温推动器上。即可切片。恒冷箱视使用状况每周或每月清洁一次冰霜。刀切片满足，旧刀用自动磨刀机磨刀较好。假设切片刀与抗卷板的位置，角度符合要求，又有一把锐利的刀，就能获得抱负的切片。其他其他冰冻枯燥冰冻枯燥原理为冰冻组织保持高度真空，直到去除组织中的水分。过程小块组织骤冷→马上在真空枯燥脱水〔－30～－40℃〕冰升华，水气去除，不会发生酶的弥散→材料干后，升到室温浸于石蜡或碳蜡包埋。特点能精彩地保存组织的酶活性，