微生物检验质量控制

微生物检验的质量控制实验室的质量管理体系

微生物检测实验室的质量控制不仅仅是对检测过程本身简单的控制，而是贯穿于实验室全部质量活动的始终。要获得可靠的检测结果，实验室必须建立一套全面的质量管理体系。实验室建立质量管理体系的依据食品微生物检测实验室质量控制规范

CNALAC23-2003食品微生物检测实验室认可准则GB19489-2004实验室生物安全通用要求GB/T15481—2000检测和校准实验室能力的通用要求全国疾病预防控制机构工作规范2001版省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见

县级：血清学检测实验室，食源性病原菌及肠道菌分离鉴定实验室，HIV初筛实验室，结核病实验室，地方病实验室，寄生虫病实验室，食品、化妆品、水质、涉水产品等健康相关产品微生物实验室，职业卫生和放射防护检测室，理化实验室，生化实验室。

省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见

县级：开展免疫学、生物化学实验，细菌培养分离鉴定，常见中毒事件微生物培养初步分离，食品、水、空气、涉水产品、化妆品等的微生物检测，寄生虫病原学检测，寄生虫病中间宿主的种群鉴定和密度测定，作业场所、公共场所、生活居住环境有毒有害因素的相关实验，饮用水和水源水质分析，常见毒物和化学污染因素的初步分析。

县级疾控机构涉水微生物

主要仪器装备标准空气微生物采样器1+2生化培养箱1+2水微生物膜过滤装置1恒温水浴箱4+5超净工作台2+3纯水处理器1生物安全柜1+2紫外线强度分析仪1+1生物显微镜2+5恒温培养箱5+10概念质量控制（Qualitycontrol）

实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。食品微生物检测实验室

foodmicrobiologicallaboratory以质量管理、卫生以及监控HACCP计划的有效性进行评价为目的，进行检测、鉴定或描述食品中致病微生物存在与否的实验室。实验室可以提供其检查范围内的咨询性和技术性服务，包括结果解释和为进一步适当检查提供建议以及相应的措施。

微生物实验室质控的重要性

产品微生物检验，在预防疾病及研究工作中发挥越来越重要的作用，为了保障检验结果的准确性和可靠性，日常工作中应注意开展质量控制。微生物检验的质控

微生物学检验的质量控制也分为室内质量控制和室间质量评价两个组成部分。

微生物学检验的质量控制是保证微生物检验的直接涂片染色、培养、鉴定、药敏试验及血清学分析等的准确性，避免因操作变化导致检验结果错误，造成经济损失。内容室内质量控制实验室内部质量保证的核心和基础。室间质量控制评价外部组织或机构质量评价。实验室质量控制

实验室内质控自我控制发现随机误差和新出现的系统误差评价检验质量的稳定性是检验的基础、必需、常规

实验室间质控外部质控发现系统误差和实验室间数据的可比性评价实验室的测试系统和分析能力有效的校核是参加与标准实验室的比对实验室质量控制示意图内部质量控制外部质量评估能力验证实验室间比对计量认证/审查认可（验收）评审表

2007年12月31日废止-人员-设施和环境-设备和标准物质

-量值溯源和校准

-校准和检测方法-样品管理-记录-证书和报告-校准或检测的分包

-外部供给验收实验室资质认定评审准则

2007年1月1日实施-人员-设施和环境条件-校准和检测方法-设备和标准物质

-量值溯源-抽样和样品处置-结果质量控制-结果报告第一部分内部质量控制（IQC）

实验室内为达到质量要求的操作技术和活动。其目的在于监测实验室分析测试过程，以评价检验结果是否可靠，并查找和排除质量环节中所有阶段中导致不满意的原因。实验室的内部质量控制适用于整个检测过程的所有活动，包括收集样品、检测直至报告检测结果。室内质量控制

做好室内质控直接关系到日常检验工作的质量。室内质控主要包括几个方面：实验前的质量控制（主要是操作人员、常用仪器设备、实验材料如培养基、试剂、诊断血清、染色液、标准菌株等）、样本检验过程的质量控制（主要是环境条件和监督），及发报告前的质量控制。都要保证量值溯源。内部质量体系包括以下所有的环节：选择样本；收集样本；将样本送到试验室；试验室接受样本；试验室测试样本；样本测试报告 解释样本的报告结果。从第一步到第三步，必须按照将样本送到试验室的正确步骤进行操作。从第四步到第七步，为了保证好的有效结果，必须按照良好的、规范的试验室操作！

人员

良好的管理完整、有效、适应的质量体系训练有素遵守规程,职责分工明确使实验室的质量活动处于受控具有与从事工作相关部门衔接协调状态，而不是随意而为相符合的素质和技能

设备校准和检定

实验室质量控制的目的设备、量具、标准物质常年处于受控状态是获得有把握的可靠结果溯源到国家基准

设施和环境校准和检测方法文件化符合检测要求处于完全受控状态样品管理保证样品数据处理、记录、外部服务质量的完整性和安全性证书、报告正确采购物品的质量质量手册的规定各级人员的职责和权限实验室生物安全措施样品采集和处理指南微生物学检验项目培养基和试剂的配制方法室内和室间质量控制参考数据室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制对微生物检验人员的要求特别强调高度的主观判断力

个人的技能、经验微生物学的专业水平培训班专业实验室进修学术会议交流专业期刊检验人员的培养

检验质量可以通过正确的操作来体现，例如革兰氏染色，可以通过对标准菌株的染色来反映操作和试剂的质量，这是有形的、看得见的。检验人员的培养

然而，质量保证更依赖检验者的认知能力。一个能够严谨地分析实验结果的检验者，不仅仅忠实地记录实验数据，而是可以实施更加严格的标准。配有一名经严格训练并长期从事于微生物检验的技术人员，全面负责实验室的工作。检验人员的培养

当遇到一些不常见检验结果或一些散发的错误，例如，试验中发现的少见菌、从未见过的药敏表型、污染率的增加等，往往通过一些质控方法难以检查出来，但具有质量意识的微生物技术人员能对这些现象质疑，及时纠正，保证结果的准确可靠。

检验人员的培养1.定期进行新理论、新技术和新方法的业务学习。尤其是对于最新的检验方法标准的培训。2.定期进行理论考核和操作技能考核。3.相互监督检验工作。4.编写原始记录表格、操作规程、作业指导书的过程，就是一次重新学习的过程。检验人员能力的确认

检验人员应考核后按检验项目上岗。上岗证上面应该写明具体项目，而非“微生物检验”。校核者应为从事该工作五年以上的同科室检验人员。保密原则。室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制参考资料GB/T4789－2003食品卫生微生物学检验GB/T8538－1995饮用天然矿泉水检验方法生活饮用水卫生规范2001年版消毒技术规范2002年版化妆品卫生规范2002年版伯杰氏细菌学手册……操作规程、作业指导书国家标准、规范中没有明确说明的步骤，或者不够明确的判断指标。国家标准、规范中出现错误的部分。本实验室改进的、独特的处理方法。比如新仪器的应用，其实这是一种偏离。不过，通过验证，完全可以使用。没有标准、规范可以参照的。新的检验方法的确认

开展一项新的检验项目，必须进行相应的确认。全部参加该检验项目的人员共同仔细学习试验步骤，统一操作程序和实验结果的判断指标。按要求的步骤进行实验，详细记录每一步结果，同时用已知阳性对照进行参比。实验结果综合分析，组织专家评价。室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存生物安全的质量控制常用仪器质量控制

通常包括对冰箱、恒温培养箱、生化培养箱、电热恒温水浴箱、厌氧培养箱等基本设备温度的监控记录。每日（多少次？）观测记录温度，可绘制温度曲线图。如超出规定范围马上找原因，及时纠正。在仪器的旁边置一记录本，每次使用、保养、维修都要记录，便于出现故障时寻找原因。这些仪器设备都必须检定并进行期间核查。常用仪器质量控制

为避免偶然发生的交叉污染，实验室的仪器不应频繁移动。

已经移动了仪器，应记录。常用仪器质量控制

对于箱式设备还要定期清理消毒，冰箱定期化霜。厌氧培养箱或厌氧罐必须进行厌氧环境监控。可以使用美兰指示条或者刃天青指示剂（化学法）。也可以使用铜绿假单胞菌培养（生物法）。如果是CO2培养箱，还需要每天检查、记录箱内的CO2含量。仪器设备的质量控制标准

设备

控制标准

允许范围高压灭菌器121℃

≥121℃培养箱

36℃

±1℃水浴箱

46℃

±0.5℃冰箱

4℃

±2℃低温冰箱－20℃

±5℃CO2培养箱5%～10%＜10%高压灭菌锅的质量控制

对于消毒灭菌器械，首先要求检定。对于日常的灭菌效果定期监测（每月一次）或者期间核查，可以使用化学指示剂胶带或者嗜热脂肪芽胞杆菌生物指示菌片，选择较低的灭菌温度时，采用枯草杆菌芽胞指示菌片。这些产品，除了美国3M公司，还有一些国产货。高压灭菌锅的质量控制高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并做好每一次的作业记录。应包含以下信息：高压灭菌的材料、开始时间、压力/温度、取出时间、高压灭菌指示胶带的颜色变化（常用无菌培养代替）。高压灭菌锅温度波动范围：110，115和121±2℃。高压灭菌锅校准周期一般在半年。干热灭菌器的质量控制干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息：开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的时间（或关闭时间）。干燥灭菌箱的温度校准；用参考温度计进行温度测试。干燥灭菌箱温度要求与精确度：160±5℃灭菌2h。干燥灭菌箱校准时间一般为一年。培养基配制用纯净水的控制对于纯净水器来说：按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子交换材料。检测要求：按照国家标准饮用纯净水GB17323－1998电导率为≤

10ms/cm。检测频率：每次出水。购买定点供应蒸馏水，应做好相应的质量控制，记录检测结果。天平的管理天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。天平要有使用及运行检查记录。天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般1次/年进行检定。运行检查频率按运行计划或按产品（天平生产厂家）给出的标准重量单位进行对照。pH计pH计使用前应用标准液进行校准。缓冲液使用有效期：pH4.00约1年。pH7.00，约6个月。pH9.00，约6个月。pH计的维护：电极外表的定期清洗；电极敏感性检测及极性恢复。专用仪器设备的质量控制

专用微生物生化鉴定仪等仪器的使用、保养、维修也都必须记录。使用细菌鉴定仪要注意维持环境清洁，制作悬浊液、从鉴定仪中取、放鉴定条都要小心，以免打翻溢出。专用仪器的质量控制举例全自动微生物生化鉴定仪：

a.及时更新系统操作软件。

b.定期请工程师对仪器的探测部位进行清洁。c.校对比色、比浊系统，也可用标准菌株对每批号的鉴定卡、条和板作质控对照。为了保证鉴定结果准确，可在全自动细菌鉴定仪自动鉴定后，再用肉眼核对一次每个比色反应结果。专用仪器的质量控制

目测看看鉴定板上各个生化反应的判断是否妥当。比如单核细胞增生李斯特菌在API鉴定条上的生化反应结果多半是相同的，区别主要在第1组，所以，我们要特别留意这3组生化反应的判断。室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制卫生检验中常用的培养基水质检测用培养基：7种化妆品检验用培养基：8种食品检验用培养基：常用的有37种，110种被列入了GB/T4789中，其中生化试验培养基23种，一般和专用培养基89种。食品、化妆品及涉水产品等产品微生物检验常规项目中所用的增菌分离培养基有所不同。对于菌种鉴定所用的培养基，各类产品分离的菌种其鉴定所用的培养基基本相同。培养基质量控制培养基质量控制包括三方面。

一是原料选择；

二是配制方法；

三是质量检查。培养基质量控制

原料选择：

基础培养基一定要挑选优质品牌，如Oxoid、Difco

、生物梅里埃产品等。即使在国内的产品中，也有明显的差异。可以用好的产品作为比对材料。培养基质量控制

配制方法：每次配制均按生产厂家提供的说明书上的方法与分量，记录品名、干粉的批号、称取份量、加水量、配制规格、使用的天平、高压锅、灭菌时间、pH计与最初最终的pH、操作者、操作日期，并于包装上标明品名、使用期限。培养基质量控制实验室要确保所有的试剂（包括储存溶液）、培养基、稀释剂和其它的悬浮液都贴上标签，标明其适用性、特性、浓度、储存条件、准备日期、有效期和（或）推荐的储存时期。负责微生物检验准备的试验人员可以从记录中确认。

培养基质量控制制作过程必须固定统一。不得随意变化。严格遵守并执行产品说明书上标明的培养基或添加剂的剂量、pH值、灭菌处理时间及温度。培养基名称、批号、配制量、规格、配方、配制日期和配制人员姓名都必须详细记录。培养基外观检查新配制或新购入的培养基必须先以肉眼检查其外观，颜色、透明度等等，无开裂和皱褶。培养基应测pH值，不得超过所预期值的±0.2。平板培养基最易脱水，应放在严密的有盖容器内或塑料袋内。这样平板内培养基可在4℃冰箱内避光保存两周左右，试管内培养基可保存1～2个月。我们使用橡胶塞的生理盐水瓶包装的琼脂，可以维持更长的时间。培养基的使用量平板培养基厚度一般3mm（90mm平皿＋15～20mL培养基）。药敏试验用2mm（90mm平皿＋10mL培养基）斜面不超过试管的2/3。以免产气的时候涌出试管。培养基的有效性试验的判断指针

检查实验室内制备的培养基、稀释剂和其它悬浮液的性质是否合适，可参照以下几项进行：

a)目标微生物的恢复或生活力的维持；

b)非目标微生物的抑制；

c)生化（区别的和诊断的）性质；

d)理化性质（例如pH，体积）。

培养基的有效性试验

每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的标准菌株试验是否能支持，区分或选择某类细菌的生长。常用培养基的质量控制生长率测试适用于液体培养基：将菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，取合适稀释度进行平板计数，同时以按相关的培养基配方新鲜配制的培养基进行对照。不低于10%。常用培养基的质量控制菌落大小测试：划线分离测试菌，取10个菌落测量直径大小，其直径均值与新鲜配制的培养基无统计学差异。培养基的有效性试验

培养基的试验结果需要加以记录，项目包括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。此记录本需便于检验室人员的查看，以便能随时解决任何发生的难题。培养基的有效期

配制好的培养基有效期的长短，应参考相应的书籍。若购买现用的培养基，均应注意有效期的标示是否正确。如血平板的有效期为3星期，厌氧菌分离培养基为1～2星期等。培养基的无菌试验

每批配好的培养基须进行无菌试验。可结合空白检验进行。随机选取5～10%的量，如果配制大量的培养基，则任意选取10个平板或管装培养基，35℃过夜培养，证明无菌生长为合格。培养基质量控制1.日常检验时进行的空白对照，可以证明培养基已经达到灭菌效果。2.用标准菌株接种，以保证各种培养基能培养分离出相应的致病菌，提高分离率。3.玻璃器具：注意残留消毒剂或者其他抑菌物质对微生物生长的影响。培养基质量控制a.基础培养基：要求微生物生长良好，并表现其典型的特征。如血琼脂平板接种金黄色葡萄球菌和溶血链球菌。b.选择性培养基：要求被抑制的细菌不生长或生长较弱，而被选择生长的细菌生长良好。同时看其长势是否符合规定，如SS平板接种沙门氏菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌。c.生化反应培养基：要求用标准阳性和阴性菌株进行质量控制。培养基质量控制

可以按照卫生部的WS/T232－2002《商品性微生物培养基质量检验规程》进行培养基的质量控制。

如果有条件可参照国际食品微生物与食品卫生委员会（ICFMH）提供的关于培养基质控方法进行质控。培养基名称菌株名称预期结果普通琼脂大肠埃希氏菌生长表皮葡萄球菌生长血琼脂平板乙型溶血性链球菌生长、乙型溶血甲型溶血性链球菌生长、甲型溶血伊红美蓝琼脂大肠埃希氏菌生长、发酵乳糖鼠伤寒沙门氏菌生长、不发酵乳糖金黄色葡萄球菌不生长SS琼脂大肠埃希氏菌生长不良鼠伤寒沙门氏菌生长金黄色葡萄球菌不生长尿素培养基普通变形杆菌阳性（红色）志贺氏菌阴性（不变色）培养基的质量控制没有列在WS/T232－2002《商品性微生物培养基质量检验规程》中的培养基，必须自行制定质量控制作业指导书。注意必须区分定性培养基或者定量培养基的质控要求不同。培养基的质量控制

购置培养基时，要求供应商提供产品质控证书，选择通过ISO9001的生产厂家。培养基使用前必须用对照菌株进行评估。按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件保存。培养基的质量控制

Oxoid出产质量控制标准菌株Quanti-Cult，含有指定数目的微生物，用于质量控制工作。在定义的程序和生长条件下，形成指定数目的菌落单位；如果在其它条件下，或者培养基含有更多的抑制剂（选择剂），或者培养基的营养不良，则不能保证形成指定数目的菌落单位。培养基的质量控制

2006年，国家质检总局批准49种国家标准物质，其中包括用作食品微生物菌落总数标准物质。

培养基的质量控制

此次批准的食品微生物菌落总数标准物质，一种是以模拟食品实物，添加芽胞杆菌、肠杆菌、沙雷氏菌等菌株经冷冻干燥制成，另一种是以鱼粉为基质与细菌混合经冷冻干燥制成。这类标准物质在控制食品中细菌总数的测量中起着测量标准的作用，有利于食品中细菌数量测量方法的核准和量值统一，更有利于保证检验质量。

室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制试剂的质量控制注意有效期。监控贮存条件，并定时记录。用阳性和阴性标准菌株进行核查。血浆凝固酶—金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌氧化酶试剂—铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌靛基质试剂—大肠埃希氏菌、产气肠杆菌常用试剂的阳性、阴性对照菌株常用试剂阳性对照菌株阴性对照菌株血浆凝固酶试剂金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌触酶试验用试剂金黄色葡萄球菌化脓链球菌V-P试验用试剂阴沟肠杆菌大肠埃希氏菌靛基质试剂大肠埃希氏菌阴沟肠杆菌氧化酶试剂铜绿假单胞菌大肠埃希氏菌

试剂的质量控制各类试剂，在配制或购入后均应进行“有效”试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验。试剂须根据标示的配制要领或制造者的要求适当的储存。对较稳定的试剂，如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测核对，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测，合格后才能使用。染色液质量控制

染色液必须按标准方法与分量配制，过滤后使用，每次记录并且标明配制量、操作者以及购入或者配制日期。染色方法质量控制

染色方法也必须进行染色步骤质控。如革兰氏染色在一张玻片上同时涂有金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌等等，每次质控与检品同步进行，以保证染色性判断准确无误。购买现成的试剂盒，则使用标准菌株作为参照。各种常用染色液的质控菌株——————————————————————————染色液阳性对照菌阴性对照菌监控频度——————————————————————————革兰氏染色液金黄色葡萄球菌大肠埃希氏菌每批荚膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通变形杆菌福氏志贺氏菌每次——————————————————————————诊断血清的质控

对待诊断血清，因为容易变质，所以需要经常进行质量控制。原理与培养基的质量控制相同。在购入新的批号或者期间核查的时候，必须记录日期、观察澄清度、颜色和是否有沉淀物，然后置4℃冰箱保存。诊断血清的质控

使用标准菌株来核查血清的凝集情况，测试其敏感性和特异性。注意有效期和效价的变化，尤其是接近保质期的时候。每次使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染所致，不能再继续使用。微生物实验室诊断血清质控记录表

名称检测频率质控物质控鉴定记录日期操作者沙门氏菌属诊断血清每月伤寒沙门氏菌大肠埃希氏菌（ATCC25922）鼠伤寒沙门氏菌无菌盐水

伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌ATCC25922无菌盐水

A-F多价（）（）（）（）Vi（）（）（）（）Hd（）（）（）（）

Hi（）（）（）（）O4（）（）（）（）O9（）（）（）（）

志贺氏菌属诊断血清

每月福氏志贺菌宋内志贺菌大肠埃希氏菌（ATCC25922）无菌盐水

福氏志贺菌宋内志贺菌ATCC25922无菌盐水

多价血清（）（）（）（）福氏志贺氏菌血清（）（）（）（）宋内志贺氏菌血清（）（）（）（）

致病性大肠埃希氏菌诊断血清每月EPECO126B16大肠埃希氏菌（ATCC25922）

EPECO126B16ATCC25922OK1（）（）OK2（）（）OK3（）（）

室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制样本检验过程的质量控制培养前选择合理的检验项目。样本采集、运送（早期采集、无菌采集、即时送检）。样本的合理保存。送检样本的登记：三查、三对。不符合检验要求的样本登记：注明原因退回。样本检验过程的质量控制培养中：直接诊断：直接涂片非常必要和重要。分离培养：使用多种适合于可疑病原菌生长的培养基和培养条件。鉴定：按鉴定程序执行，正确引导下一步鉴定。样本检验过程的质量控制

在检验过程中还要注意三点：（1）做平行样，以保证结果的可比性；（2）设立空白对照，以防止其他污染而导致的结果不准确；（3）设计合适的质控频率，进行质控试验。将质控菌株与常规工作一起进行，不能为质控菌株设计单独操作程序，更不能专人专做。当质控标准菌株的内在敏感性发生改变时，要更换新的菌种。

样本检验过程的质量控制培养后：结果复核：计算是否正确。确定病原菌的证据是否充足。报告单的原始信息复核。阳性结果及时通知受检单位。特别结果提示。重视样品的运输

样品采集后，应尽量减少运输和储存时间，尽快处理并检测，时间耽搁得越少，检验结果的可靠性就越高。因为标本储存时，微生物的各种代谢活动均直接影响标本的质量。因此，检测非定型包装产品时，应在采样后立刻送到微生物实验室，检验工作在4h内完成。重视样品的储存

短期内置于室温不影响细菌检出，无需冷藏。如果不能及时检测，在送往实验室之前不得已需放置一段时间，应置于2～8℃冰箱中保存。室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制标准菌株的来源标准菌株要求必须是形态、染色反应、生理生化及血清学特性典型而稳定的菌株。实验结果重复性好，极少发生变异。国际社会认可。来源于专门的菌种保藏机构。标准菌株的来源标准菌株的主要来源：美国典型菌种保藏中心ATCC（AmericanTypeCultureCollection）中科院微生物研究所卫生部药品生物制品检定所标准菌株的保存法之冷冻干燥法

最理想的保存方法，不改变菌种性状，保存时间长。手续繁琐，需专门的冷冻干燥设备。再放在液氮罐或－80度低温冰箱。菌种保存中心均采用此法。标准菌株保存法之冰冻保存法

此法较简单，将细菌混悬于脱纤维羊血或脱脂牛奶中，置液氮或－20℃冰箱保存。但细菌最终经多次转种，性状可能发生变异。标准菌株保存法之培养基保存法简便易行的方法，适用于一般实验室。（1）普通琼脂斜面保存法：适于一般细菌的保存，置4℃冰箱可保存1～3个月。（2）血琼脂斜面保存法：适于链球菌，可半月转种一次。脑膜炎奈瑟氏菌应用巧克力斜面，若加液体石蜡，可延长保存期。（3）半固体穿刺法：配合液体石蜡，置4℃冰箱可保存3～6个月，适用于肠杆菌科细菌。标准菌株的应用用于实验室的内部控制用于实验室间的质量控制（外部质量评价）用于评价检测方法的准确度实施合作项目时使用标准物质用于评价和仲裁用于制备实验室的内质控样品实验室必备质控菌株大肠埃希氏菌ATCC25922铜绿假单胞菌ATCC27853金黄色葡萄球菌ATCC25923粪肠球菌ATCC29212肠炎沙门氏菌志贺氏菌溶血性链球菌室内质量控制对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制检验环境的质量控制

微生物检验实验室重点控制的是空气污染。实际上，光照、风速等等也有限制。近年对于清洁区、污染区的标识也有明确的要求。检验环境的质量控制

由于受经济和技术条件限制，目前不少微生物实验室仍将实验用房分隔成操作间和缓冲间，操作间又分隔成许多小隔离区，并依靠数盏紫外灯，以达到隔离的目的。这种实验室格局在大部分检验单位还在使用，并以沉降菌数参数为控制指标。在检验标准没有明确限制的时候，仍可以使用。检验环境的质量控制

较完善的微生物实验室具备无菌实验室、净化实验室、生物安全实验室等，净化实验室应采用封闭过滤除菌，通风方式、吊顶、隔墙、围护全部采用彩钢板，地面作环氧树脂自流平处理，并设置非净化区、更衣区、净化区。净化实验室应定期进行风速监测和及时更换过滤层罩。

环境设施的相关技术指标净化室、净化工作区域、洁净环境按国家及部颁标准进行检测。空气洁净度指标：检测频率及方法。2次/月；空气细菌检测（沉降法）。有条件的，增加浮游菌。级别≥0.5mm尘粒(个/L)≥5mm尘粒(个/L)活菌颗粒平均数(cfu/平板)100≤3.5≤0.0≤1.010000≤350.0≤2.5≤3.0检验环境的质量控制

条件有限的实验室可使用超净工作台；无菌室应配臭氧/紫外线消毒装置，在使用前后都应开启紫外线灯消毒，并定期进行紫外线强度和空气质量监测；生物安全实验室除了正常管理、维护之外，要注意空气过滤的质量和工作人员的隔离防护。

净化工作台的控制水平流净化工作台工作区域，要求洁净度为100级。空气沉降30min，沉降菌数＜1cfu/皿。垂直流净化工作台，沉降菌数＜0.49cfu/皿.净化工作台运行检查频次：2次/月，主要是细菌沉降检测。净化工作台高效过滤膜一般为一年更换一次，并同时进行粒子与细菌沉降检测。实验室环境的控制

1.防尘源性污染措施：定期进行实验室的熏蒸消毒，工作前后消毒液喷雾降尘，擦拭工作台面。超净工作台、生物安全柜应根据其功能定期检测其工作能力，清洗更换滤网。紫外灯的控制仪器测试法：紫外线灯每三月检查紫外线强度。通过专用仪器检测紫外灯管发射的紫外光强度。消毒技术规范中规定在距离1m处，要求其强度为90。生物测试法：杀菌效果的检查采用大肠杆菌培养物，经一定比例稀释，菌量控制在200～250个/0.5mL，涂布平板在紫外灯下照射2min，同时设置普通光源的对照组，培养48h，计算其杀灭率。要求杀灭率达99%。实验室环境的控制

2.防人源性污染措施：换鞋、带口罩、帽子、手套，穿隔离衣。这些材料的消毒措施。3.防实验动物和实验材料自身的污染：注意无菌操作，要防止动物体表和体内正常存在的微生物污染样本，干扰病原微生物的检出。实验室内部质量控制措施

系统使用一式双份的细菌总数测定；系统使用接种了某种培养物(标准菌株)的样品，用于定性测定，用于培养基、配套试剂、血清的性能确认；同时使用阳性对照、阴性对照、基质对照、空白对照；由同几个检验人员同时平行地进行一次以上的平板计数；系统使用盲样。菌落总数测定质控方法菌落计数精密度控制直接计数选择同一标本，要求多名检验人员进行菌落计数。将大肠杆菌ATCC25922或经检定标化的菌片，通过合适的梯度稀释，选择合适的稀释度进行菌落计数实验操作。36±1℃培养24h进行菌落计数。菌落总数测定质控方法计数精密度控制重复计数法选择十个平板，每个平板具有合适的菌落数（100以内）。将平板编号，由实验人员进行计数并记录结果。去掉平板编号，将平板置冰箱保存过夜，次日取出，重新给予编号，由实验人员重复计数并记录。计算每位实验人员每对结果的平均数（X）。菌种、毒种的管理生物安全管理制度定期核查——相当于标准物质。病原微生物危害等级及对应防护水平级别病原微生物危害等级操作准则安全防护(一级屏障)设施(二级屏障)1（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子标准微生物学操作不要求要求有开放的实验台面和洗手池2（中等个体危害，有限群体危害)能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。生物安全1级加限制进入、生物危险警示标志；“锐器”安全操作策略；有关废弃物净化处理及医学监测政策的生物安全手册一级屏障：Ⅰ型或Ⅱ型BSCs或其它用于操作可能产生感染性气溶胶或飞溅物的个人防护装备或物理防护设施；个人防护装置：实验服、手套、面罩生物安全1级加高压灭菌设备生物安全水平分级

根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平（biosafetylevel，BSL）分为4级，I级防护水平最低，IV级防护水平最高。以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示医学或生物实验室的相应生物安全防护水平；以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示动物实验室的相应生物安全防护水平。一级生物安全防护水平（BSL－1）

BSL－1适合于已知其特征的、在健康成人中不引起疾病的、对实验室工作人员和环境危害性最小的生物因子（对应于我国的第四类危害的微生物）的工作。BSL－1不需要特殊的一级和二级屏障、除需要洗手池外，依靠标准的微生物操作即可获得基本的防护水平。BSL－1实验室无需特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处（？）。在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。实验室中的厨柜和实验台应牢固。厨柜、实验台彼此之间应保持一定距离，以便于清洁。实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。应有适当的消毒设备（高压、浸泡或煮沸）。BSL－1实验室设施(二级屏障)BSL-1个人防护二级生物安全防护水平（BSL－2）二级生物安全防护水平是指实验室的操作、安全设备、和设施适用于操作我国的第三类（少量二类）危害的致病微生物。二级生物安全防护水平适合于从未知病原的人身上取血、体液和组织的检测和研究（可能含有高致病微生物）。BSL-2实验室设施要求满足BSL-1的要求，如有缓冲区更好。实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。在实验室的工作区域外应有存放个人衣物的条件。应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。有可靠的电力供应和应急照明。实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。BSL-2实验室设备要求实验室内必须配备生物安全柜（一级或二级）。根据需要（切片或离心）设置负压罩。应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。有紫外消毒设备。在实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器。BSL－2：实验室设施(二级屏障)生物安全柜（BSC）生物安全柜作用：①样品的保护；②操作者保护；③环境保护。II级生物安全柜设备、器材的布置BSL-2必要时加面部防护BSL－3：实验室设施(二级屏障)BSL-3特殊防护BSL－4实验室（正压型）BSL－4正压防护服实验室安全防护培训与告知实验室管理人员及实验人员必须了解相关工作有关的危险。对招收新职工、工作开始发生变化或使用新方法，启用新的设备时，这点尤为重要。所有工作人员，包括清洁和服务人员都要知道。需要进行口头和书面两种方式的通知。有关仪器必须要有字迹清楚的其安全使用的书面说明。实验室安全防护标志在进行致病性微生物工作的房间人口处必须要有警示标志。实验室的房间必须以使与微生物有关的危险得以过免的方式装置，以使微生物的传播得到限制，房间还应便于清洁和消除污染．工作台必须由光滑的、耐消毒剂的材料制成。难以清洁的角落、弯头及管道应尽可能地避免污染。检验质量失控后的处理1.分析原始数据及初步估计失控原因。2.对具体检测过程进行回顾性分析。3.通过选择性复查，进一步分析判断失控原因和决定处理方法。分析原始数据及推测失控原因

原始数据指未经计算或换算的检测数据。这些数据是最直接、最真实地反映检测情况的第一手资料。当发生失控时，对同批实验检测的全部原始数据结合近期室内质量控制情况和平时经验进行分析，往往有助于推测失控原因的大体方向，提示误差类型和失控原因，使查找原因的工作更有重点。回顾分析具体检测过程

发现检验质量失控后，应对该次实验的全过程进行迅速、仔细的回顾，分析有无特殊情况出现。当暴露问题后，检验责任人往往急于出具“正确”的结论，早早结束调查，但这时更应该控制进度，避免矫枉过正。失控原因的分析实验室有无新的变化如仪器和试剂有无针对性检查这些变化对检测的影响重测同一质控样品开一瓶新的质控重测重测原因找到没找到检查仪器状态和试剂是否过期进行选择性复查

选择性复查时应包括下述材料，以便快速找出原因，及时进入正常的检验。监督员的重要性。

⑴失控时使用的全部培养材料。

⑵重新开启相同批号的检验材料。

⑶包括已知阳性、阴性菌株，近期曾做过该项目检测的阳性、阴性样本。进一步分析判断，决定处理方法

通过对复查结果的分析，查明失控原因，制订相应解决方案，使实验室工作重新在控。并将失控情况、具体原因和解决方案在记录表格中作详细记录。室内质控失控报告单日期：年月日编号：□□□□项目：仪器型号：质控依据：质控菌株：ATCC25923ATCC25922ATCC27853失控原因：1）试剂□2）诊断血清□3）环境条件□4）仪器□5）检验标准6）人员操作过程7）8）其它（请详述）：失控判断及处理建议：失控前测定数据：处理后测定数据：操作者：监督员：质量负责人：实验室外部质量评估（EQA）实验室外部质量评估(EQA)：由第三方机构采取一系列的方式连续地、客观地评价各实验室的检验结果，并发现实验室本身不易发现的不准确性；了解实验室之间结果的差异，帮助其校正，使其结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。室间质量控制

室间质量控制是各地实验室之间进行质量控制的一种方式，也是上一级实验室对下级各实验室进行质量管理的手段。参加室间质控，常常会遇见一些平时罕见或未见过的菌株，对它们的生长条件、菌落形态、染色、显微形态等有了较深的感性认识。以后倘若再遇见这些微生物，就会心中有数。各级实验室可同时接受国内、国际多个质量控制机构或参考实验室的质量评价。室间质量控制目的

按照全国疾病预防控制工作规范（微生物学检验）进行实验室间的质量控制的目的，就是使各实验室之间能达到一致的质量水平，保证各实验室间的微生物检验质量，获得具有可比性的检验结果。室间质量控制的内容

按照全国疾病预防控制工作规范（微生物学检验）进行实验室间质量控制的内容：a．逐级对检验人员进行培训，统一检验方法和操作规程，培训结束时进行考核。b．各实验室所使用的各种试剂、培养基以及各种诊断用品等应标准化。c．建立质量控制考核制度。各级疾病预防控制机构每年对下级机构的微生物检验工作进行考核。d．每年进行一次质量控制样品的考核，评定实验室间的偏差、寻找原因，加以纠正。室间质量控制的内容

按照全国疾病预防控制工作规范（微生物学检验）进行实验室间的质量控制的结果与评价：

a．培训及其考核的资料；

b．质量控制样品考核的结果和评价；

c．检查中发现的问题及整改措施。

按照预先规定的条件，由两个或多个实验室对相同或类似检测物品进行检测的组织、实施和评价。

实验室间比对的概念实验室间比对目的A、确定某各实验室进行某项特定检测的能力，以及监测实验室的持续能力；B、识别实验室的问题并制定相应的纠正措施，可能与人员的能力或一起的校准有关；C、向实验室的客户提供根高的可信度；D、确定和监控新方法的有效性和可比性；E、确定某种方法的性能特征，通常成为共同试验；F、为标准物质赋值，并评估其适用性；G、鉴别实验室间的差异。

能力验证的概念

能力验证是为确定某个实验室进行某项特定检测的能力而进行的实验室间比对，以及监控实验室的持续能力的实验室间比对。

GB/T15483－1999利用实验室间比对的能力验证第1部分：能力验证计划的建立和运作和第2部分：实验室认可机构对能力验证计划的选择和使用

CNAL规定：获得其认可前参加一次能力验证活动；已认可实验室在其认可范围内的每个主要领域每4年至少参加一次能力验证活动；当认可实验室的关键技术人员或认可范围发生变化时，认可委员会将缩短实验室参加能力验证的时间间隔。能力验证类型a)定性计划：如要求实验室识别检测物品的某个组分；

b)数据转换演练：如提供给实验室多组数据要求进行处理，以获得进一步的信息；c)单件物品检测：一件物品按顺序送往若干个实验室，并按时返还组织者；d)单项演练：就单一事件向实验室发送一个检测物品：e