标准解读

《GB/T 28068-2011 柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法》是一项国家标准，旨在提供一种快速、准确地检测柑桔溃疡病菌的方法。该标准详细描述了使用实时荧光聚合酶链反应（Real-time PCR）技术来识别和量化存在于柑桔植物样本中的柑桔溃疡病菌DNA的具体步骤和技术要求。

首先，在准备阶段，需要收集疑似感染的柑桔植株组织作为样品，并按照规定的方法进行处理，包括但不限于清洗、研磨等预处理步骤，以便于后续的DNA提取。接着，通过特定的试剂盒或手工方法从处理过的样品中提取总DNA，这是确保实验成功的关键一步。

之后，根据标准提供的特异性引物序列设计合成用于扩增目标区域的引物对以及探针。这些引物和探针是针对柑桔溃疡病菌特有的基因序列设计的，能够帮助在复杂的植物DNA背景中特异性地识别出病原体的存在。

进入实际操作环节时，将含有模板DNA、引物、探针以及其他必要成分如dNTPs、缓冲液等混合液加入到专用的PCR管或者板孔内，然后放置于具备荧光信号采集功能的热循环仪上运行程序。随着每个循环过程中温度的变化，如果样品中含有目标病原体DNA，则会在特定条件下被复制并产生荧光信号；反之，则不会出现明显的荧光增强现象。

最后，依据仪器软件生成的数据分析结果判断是否存在柑桔溃疡病菌感染情况。通常情况下，阳性结果表现为明显的S型曲线增长趋势，而阴性对照则保持平直状态。

整个过程需严格遵守实验室安全规范及生物安全等级要求，以防止交叉污染或其他潜在风险。此外，对于新建立的实验室或首次尝试此方法的研究人员来说，可能还需要经过一定的培训和实践才能熟练掌握相关技术和操作流程。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-12-30 颁布
  • 2012-06-01 实施
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GB/T 28068-2011柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法_第1页
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GB/T 28068-2011柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法-免费下载试读页

文档简介

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T28068—2011

柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法

DetectionofXanthomonascitrisubspcitriusingthereal-time

.

fluorescentPCR

2011-12-30发布2012-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T28068—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位重庆大学农业部农业技术推广服务中心中华人民共和国北京出入境检验检

:、、

疫局

。

本标准主要起草人王中康殷幼平王福祥高文娜夏玉先李正国曹月青

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28068—2011

柑桔溃疡病菌实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了柑桔溃疡病菌Xanthomonascitricitri的实时荧光检测的样品制

(subsp.,Xcc)PCR

备检测技术操作方法及结果判定标准

、、。

本标准适用于柑桔植物材料中柑桔溃疡病菌的实时荧光检测和病害鉴定

PCR。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

柑桔苗木产地检疫规程

GB5040

转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19495.2

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

柑桔溃疡病citruscankerdisease

由柑桔溃疡病菌引起的国内外柑桔检疫性细菌病害症状特征表现为柑桔叶片枝条和果实表面

。、

出现隆起的木栓化溃疡病斑造成柑桔落叶落果树势衰弱严重影响柑桔产量与果品外观质量

,、,。

32

.

柑桔溃疡病菌Xanthomonascitrisubspcitri

.

指引起亚洲型柑桔溃疡病的病原细菌为黄单胞菌属的柑桔黄单胞柑桔亚种新组合

,(Schaad2006;

Young2008)。

33

.

实时荧光PCRreal-timefluorescentPCR

实时荧光聚合酶链式反应一种在体外扩增微量的特殊片段的方法在扩增过程中由于荧光

,DNA,

物质的释放并被实时检测而能够快速灵敏地检出模板的存在

、DNA。

34

.

扩增引物primer

人工合成的寡核苷酸序列其序列与待扩增的目标序列中的一段相同用于引导体外

,DNA,DNA

扩增

。

35

.

扩增模板templet

体外扩增中所用的待扩增的靶标序列

DNA。

36

.

Ct值cyclethresholdvalue

实时荧光反

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