人教版高级高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳

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用课一微物实室养·培养基：们按照微物对营养质的不同需求，配制出供其生繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基。·培养基按物性可分为体培基半体养和体养基在液体养基中加入固剂琼脂是从红藻中提取的一种糖，在配培养基中作凝固剂后，制成琼脂固体培养基。微生物固体培养基表生长，可形成肉眼见的菌落。根据菌落的特征可以判是哪一种。体养用于工业或生生产，固培基用于微物的分离和定，固培基则常用观察微生的运动及菌种保藏。按照分养基可为工成培基和天培基合培基用成分已的化学物配制而成，其中成分的类比例明，常用于生物的分离鉴定。天培基用化学分不明的天物质配制成，常用于际工业生。·按照培养的用，可将培基分为择养基定养。择培基是指培养基中入某种化学物质以制不需要微生物生促进需要的微生物的生长鉴培基是据微生物的特点，在培养基中入某种指剂或化学品配制而成的，用以鉴别不同类别微生物。·培养基的学成分包、无机、碳源氮、长子。·碳源：能微生物的谢提供碳素的物质。如CO等无机碳；糖类、油、花生饼等有23机碳源。异微生物只利用有机源。单碳能为源。·氮源：能微生物的谢提供氮素的物质。如N、NH、NO-、NH+（无机氮源蛋白质、氨基酸、尿2334素、牛肉膏蛋白胨（机氮源）。只固微物能用N。2·培养基还满足微生生长对pH、特营养物质及氧气的求。例如，培酸菌需要在培基中添加维素，培菌时须培养基的pH调至酸，培养菌需要将pH调至性微性，养氧微物是则需要供无的条件·无菌技术获得纯净养物的关是防止外来杂菌的入侵，要注意以几个方面对实验操作空间、操者的衣着手，进行清洁和消毒。将用于微生培养的器、接种用和培养基等器具进行灭菌。为避免周围境中微生的污染，验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时避免已经菌处理的料用具与周围的物品相接触。无菌技术除用来防止验室的培物被其他外来微生物污染外，还有么目的？答：无菌技还能有效免操作者身被微生物感染。·消毒与灭的区别消指使较为温和的理或化学法仅杀死体表面或部一部分对人体有害的微生物（不括芽孢和孢子。消毒方常用煮沸毒，巴消法对于一些耐高温的体）还有学剂（如酒精、氯气石炭酸等消毒、紫线毒。灭则是使用强烈的化因素杀物体内外有的微生，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼灭菌热灭、高蒸灭。灭菌方法：接种环、接针、试管等使用灼灭菌法；玻璃器皿、属用具等用干热灭法，所用器械是干热灭菌箱；培养基、无水等使用压蒸汽灭法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。表面灭菌和气灭菌等用紫外线菌法，所用器械是紫外灯。比较项消毒灭菌

理化因素的用强度较为温和强烈

消灭微生物数量部分生活状的微生物全部微生物

芽孢和孢子否被消灭不能能制作牛肉膏白胨固体养基方法步骤：算、称量溶化、灭、倒平板。倒平板操作步骤：将灭过菌的养皿放在焰旁的桌上，右手拿装有培养基的锥形瓶，手拔出棉。右手拿锥形，将瓶口速通过火。用左手的拇和食指将养皿打开条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形中的培养（约10～20mL）倒入培养皿左手立即上培养皿皿盖。等待平板冷凝固，大需5～10min。后，将平板倒过来放置，使培养皿在下、皿在上。·倒平板操的讨论1.培养灭菌后，要冷却到50左右时，能用来倒板。你用么办法来估计培养基的温度？提示：可以手触摸盛培养基的形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚不烫手时就可以进倒平板了。2.为什需要使锥形瓶的瓶口过火焰？答：通过灼灭菌，防瓶口的微物污染培养基。3.平板凝后，为么要将平倒置？答：平板冷后，皿盖会凝结水，凝固后的培养基表面的湿度也比高，将平倒置，既以使培养基表面的分更好地发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造污染。4.在倒板的过程，如果不心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个板还能用培养微生吗？为什么答：空气中微生物可在皿盖与底之间的培养基上滋生，因此最好要用这个板培养微物。纯大杆微生物接种方法最常的是平划法和稀涂布板平板划线法通过接种在琼脂固培养基表面连续划线的操作将聚集的菌逐步释散到培养基的表面在数次划后培养，以分离到由一个细胞繁殖而来的肉可见的子胞群体，就是菌落。稀释涂布平法是将菌进行一系的梯度稀释然将不同稀释度的菌液分涂布到琼固体培养基的表面进行培养分为系列稀操和涂布板作两。用平板划线和稀释涂平板法接的目是使聚集一起的微生物分散成单细胞从能在培养基表面成单个的落，以便纯化菌种。平板划线法作步骤：将接种环放火焰上灼，直到接环烧红。在火焰旁冷接种环，打开棉塞将试管口通火焰。将已冷却的种环伸入液中蘸取环菌液。将试管通过焰，并塞棉塞。⑥手将皿盖打开一条缝隙，手将沾有菌的接种环速伸入平内，划三至条平行线盖上皿盖注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种，待其冷后，从第区域划线的末端开往第二区内划线。复以上操作，在三、四、五区域内线。注意要将最后区的划线与第一区连。⑧将板倒置放培养箱中培养。·平板划线作的讨论1.为什在操作的一步以及次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束，仍然需灼烧接种吗？为什么答：操作的一步灼烧种环是为避免接种环上可能存在的微生物污培养物；次划线前烧接种环是为了杀上次划线束后，接环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上菌种直接源于上次划线的末，从而通划线次数增加，使每次划线时菌种的数目逐减少，以得到菌落划线结束后灼烧接环，能及杀死接种上残留的菌种，避免细菌污染环境感染操作。2.在灼接种环之，为什么等其冷却后再进行划线？答：以免接环温度太，杀死菌。3.在作二次以及后的划线作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划？答：划线后线条末端菌的数目线条起始处要少，每次从上一次划的末端开，能使细的数目随着划线次的增加而步减少，终能得到由单个细菌繁殖而来的菌。（6涂布平板作的步骤将涂布器浸盛有酒精烧杯中。取少量菌液滴加到培基表面。将沾有少量精的涂布在火焰上燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。用涂布器将液均匀地布在培养表面。涂布平板操的讨论涂布平板的有操作都在火焰附进行。结合平板划线与系列稀释的菌操作要，想一想第2步应如何行无菌操？提示：应从作的各个节保证“菌”。例如，酒精灯与培养皿的距要合适、管头不要触任何其他物、吸管要酒精灯火周围；等等。菌种的保存（1对于频繁用的菌种可以采用临保的方法①临时保藏法将菌种接种试管的固斜面培养上，在合适的温度下培养。当菌落成后，将管放入4℃的冰箱中保藏以后每3～6个月，要重新将菌种从旧的培养基上转移新鲜的培基上。②点这种方保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异（2对于需要期保存的种，可以用甘管的方法在3mL的甘油中入1mL甘油后灭菌将1mL培养的液转移到油瓶中与油充分混匀后，放在－20℃的冻箱中保。疑难解答（1生物的营营养是指生摄取、利营养物质过程。营养物质是指维持机体生命动，保证育、生殖需的外源物质。人及动物的养物质：、无机盐糖类、脂质、蛋白质、维生素六类植物的营养质：矿质素、水、氧化碳等三类。微生物的营物质：水无机盐、源、氮源及特殊营养物质五类。（2确定培养制作是否格的方法将未接种的养基在恒箱中保温天，无菌落长，说明养基的制备是成功的，否则要重新制备。课二土中解素细的离计尿素是一种要的农业肥，尿素不能直接被农作物吸收。只有当土中的细菌尿素分解氨之后，能被植利用。土壤中的细菌之以能分解素，是因他们能合成脲酶。尿素最初是从人的尿液中发现筛选菌株（1实验室中生物的筛应用的原人为提供有于目的菌生长的条（包括营养、温度、等），同时抑或阻止其微生物生。（2选择性培基在微生物学，将允许定种类的生物生长，同时抑制或阻止其他种微生物生的培养基称作择养。（3配制选择养基的依根据选择培的菌种的理代谢特加入某种物质以达到选择的目的。如，培养中不加入机物可以选择养自养微物；培养中不加入氮元素，以选择培能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培金黄色葡球菌等。统计菌落数测定微生物量的常用法有稀涂平法和显镜接计。稀释涂布平法统计样中活菌的目的原理当样品的稀度足够高，培养基面生长的一个菌落，来源于样品稀液中的一活菌。通统计平板上的落数能推测出样中大约含有多少活细菌了保证结准确般设置～5个平板，选择菌落数30～300的平板进计数，平值统计的落数往往比活菌的实际数目低，因，统计结果一用菌落数不是活菌来表示。采用此方法注意事项般选取菌落在30~300之间平板进行计2.了防止菌落蔓延，影响计数，可在养基中加3.本仅限于成菌落的微生物设置对照设置对照的要目的是除实验组非测试因素对实验结果的影响，提实验结果可信度。照实验是指除被测试的件以外，他条件都相同的实验，其作用是比试验组，除任何其可能原因的干扰，明确实是测试的条引起相应的结果。实验设计实验设计包实验方案所需仪器材料、用具和药品，具体的实施步以及时间排等的综考虑和安排。（1土壤取样同其他生环境相比土壤中的微生物，数量最大，种类多。在富有机质的壤表层有更多微生物生从含有机物潮湿土壤中取样去表层土在距地约3的土壤层取。（2样品的稀：样品的稀释程度将接影响平上生长的落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的品液进行养，以保获得菌落数在到300之、适于计数的平板。测定土壤中菌的数量一般选用

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6测定放线菌数量，一选用

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104105测定真菌的量，一般用1021010

4（3微生物的养与观察不同种类的生物，往需要不同培养温度和培养时间。细菌30~37℃1~2天放线菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天每隔24小时统计一菌落数目选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可防止因培时间不足而导致楼菌落的目。一般说，在一定的培养条件下（相同的养基、唯及培养时），同种微生物表出稳定的落特征。状、大小、隆起程度、颜色。疑难解答（1如何从板上的菌数推测出克样品中的菌落数？统计某一稀度下平板的菌落数最好能统计3个平板，计出平板菌落数的平均值每克样品中菌落数=（C/V）*M其中，C代某一稀释度下平板上生的平均菌数，V代涂布平板时所用稀释液的积（ml），M表稀释倍课三分纤素微物分纤维素，一由葡萄糖尾相连而的高分子化合物，是地球上含量最富的多糖物质。纤维素与纤素酶棉花是自然中纤维素量最高的然产物，木材、作物秸秆等也富含维素。纤维素酶是种复合酶一般认为至少包括三种组分，即C酶C酶和葡萄糖酶，前两酶使1X纤维素分解纤维二糖第三种酶纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最被水解成萄糖，为生物的生长提供营。纤维素分解的筛选筛选方法：果红染色。能够通颜色反应直接对微生物进行筛选。刚果红染色筛选纤维分解菌的理刚果红是一染料，它以与像纤素这样的多糖物质形成红色复合物但并不和解后的纤二糖和葡萄糖生这种反。当我们含有纤维素的培养基中加入刚果红时，果红能培养基中纤维素形成红色合物。当维素被纤素酶分解后，刚果红－纤维素的复物就无法成，培养中会出现以纤维素解菌为中的透明圈这样，我们就可以通过是否产生透圈来筛选维素分解。分离分解纤素的微生的实验流土壤取样→择培养（步是否需，应根据样品中目的菌株数量的多来确定）梯度稀释将样品涂布到别纤维素解菌的培基上→挑选产生透明圈的菌落（1土壤采集

选择富含纤素的环境（2刚果红染法分离纤素分解菌步骤（3刚果红染法种类

倒平板操作制备菌悬液、涂布平一种是先培微生物，加入刚果进行颜色反应，另一种是在倒平板就加入刚红。课延对分解纤维的微生物行了初步筛选后，只是分离纯化的第一步，确定得到是纤维素解菌，还需要行发酵产维素酶的验，纤维素酶的发酵方法有体酵体酵两种。纤素酶的测定方法，般是对纤素酶分解纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行量的测定疑难解答（1为什么要富含纤维的环境中找纤维素分解菌？由于生物与境的相互存关系，富含纤维素的环境中，纤维素分解的含量相提高，因从这种土样中得目的微物的几率高于普通环境。（2将滤纸埋土壤中有么作用？认为滤纸应该埋进土壤多深？将滤纸埋在壤中能使维素分解相对聚集，实际上是人工设置纤维分解菌生的适宜环。一般应将纸于深约10cm左腐殖土壤。（3两种刚果染色法的较方法一是传的方法，点是操作琐，加入刚果红溶液会使菌落之间生混杂；优点是这