GB/T 27539-2011动物流感检测A型流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27539—2011

动物流感检测A型流感病毒

通用荧光RT-PCR检测方法

Animalinfluenzadetection—Methodofreal-timeRT-PCRfordetectionof

influenzavirusA

2011-11-21发布2012-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27539—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国北京出入境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫

:、

局深圳匹基生物工程有限公司

、。

本标准主要起草人汪琳林志雄周琦高志强陈茹乔彩霞蒲静杨伟梁成珠

:、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27539—2011

动物流感检测A型流感病毒

通用荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了型流感病毒通用荧光检测的操作方法

ART-PCR。

本标准适用于活动物及其产品中型流感病毒的检测

A。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

实验室生物安全通用要求

GB19489

转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19495.2

实验室质量控制规范动物检疫

GB/T27401

进出口生熟毛皮检验规程

SN/T1330、

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

值每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

Ct:(Ctvalue)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

磷酸盐缓冲液配方见附录

PBS:(A)(phosphatebuffersaline)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反转录聚合酶链式反应

RT-PCR:-(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

4原理

流感病毒属正粘病毒科根据抗原特性及其基因特性的不同流感病毒分为甲

(influenzavirus),,

乙丙型乙型变异性较弱丙型抗原性比较稳定仅感染人类甲型抗原变异性最强

(A)、(B)、(C)。、,;(A),

感染人类和其他动物常引起世界性大流行编码基质蛋白的基因是型流感病毒共有且较保守

,。MA。

采用技术针对基因中特定序列合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针探

Taqman,M,,

针的端标记报告荧光基团端标记淬灭荧光基团在退火阶段一对引物和一条探针

5′(R),3′(Q)。PCR,

同时与目的基因片段结合探针上基团发出的荧光信号被基团所吸收仪器检测不到所发出的

,RQ,R

荧光信号在延伸阶段酶在引物的引导下沿着模板链合成新链当链的延伸进行到探针结合

;PCR,Taq,

部位时受到探针的阻碍而无法继续酶发挥外切核酸酶的功能将探针水解成单核苷酸标

,,Taq5′→3′,,

记在探针上的基团就游离出来所发出的荧光不为所吸收而被检测仪所接收随着反应的