GB/T 27538-2011动物流感检测A型H1N1流感病毒中HA、NA的焦磷酸测序检测方法

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27538—2011

动物流感检测A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸测序检测方法

、

Animalinfluenzadetection—MethodofpyrosequencingforHAandNAin

influenzavirusAH1N1

()

2011-11-21发布2012-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27538—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国山东出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院

:、。

本标准主要起草人徐彪梁成珠凌宗帅张太翔岳志芹高宏伟孙涛方绍庆林祥梅韩雪清

:、、、、、、、、、、

朱来华张鹤晓单虎

、、。

Ⅰ

GB/T27538—2011

动物流感检测A型H1N1流感病毒中

HANA的焦磷酸测序检测方法

、

1范围

本标准规定了焦磷酸测序技术用于型流感病毒及其墨西哥变异株中的和核酸

AH1N1HANA

序列检测方法

。

本标准适用于型流感病毒通用及型流感病毒墨西哥变异株的核酸检测

AH1N1AH1N1。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

出入境动物检疫采样

GB/T18088

实验室生物安全通用要求

GB19489

动物疫病实验室检验采样方法

NY/T541

基因检验实验室技术要求

SN/T1193

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

三磷酸腺苷

ATP:(adenosinetriphosphate)

脱氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

磷酸盐缓冲生理盐水

PBS:(phosphatebelancedsolution)

焦磷酸测序

Pyrosequencing:

反转录聚合酶链式反应

RT-PCR:(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶

:DNA

4原理

焦磷酸测序是通过测序引物和扩增单链模板杂交与聚合酶硫酸化酶荧

PCRDNA,DNA、ATP、

光素酶三磷酸腺苷双磷酸酶和底物荧光素孵育逐一加入四种

、(APS)、,dNTPs(dATP,dTTP,dCTP,

如与模板配对此与引物的末端形成共价键释放焦磷酸基团硫酸化酶在

dGTP),,dNTP,(PPi);ATP

存在的情况下催化焦磷酸形成驱动荧光素酶介导的荧光素向氧化荧光素转化氧化荧

APSATP,ATP,

光素发出与量成正比的可见光信号光信号由电荷耦合检测器收集并由软件转化为峰

ATP;(CCD)。

每个光信号的峰高与反应中掺入的核苷酸数目成正比和未掺入的由三磷酸腺苷双磷酸