激素和外植体对亚麻愈伤组织形成的影响

激素和外植体对亚麻愈伤组织形成的影响AffectionofHormonesandExplantstoCallusFormationofFlax

天津农学院学生姓名：侯铁军系别：园艺系

专业班级：06级园林2班contents1.前言2.实验材料与方法3.实验结果与分析4.讨论5.结论1.前言1.1亚麻的科属、形态特征以及生长习性

亚麻的科属及简介

亚麻（Linum

grandiflora）属于亚麻科亚麻属植物，别名花亚麻、大花亚麻。亚麻是古老的韧皮纤维作物和油料作物。亚麻起源于近东、地中海沿岸。早在5000多年前的新石器时代，瑞士湖栖居民和古代埃及人，已经栽培亚麻并用其纤维纺织衣料，埃及各地的“木乃伊”也是用亚麻布包盖的。油用型亚麻又叫做胡麻。胡麻在我国至少有1000年栽培历史。纤维型亚麻是1906年从日本引入的。中国主要分布在黑龙江和吉林两省。亚麻喜凉爽、湿润的气候。亚麻纤维具有拉力强、柔软、细度好、导电弱、吸水散水快、膨胀率大等特点，可纺高支纱，制高级衣料。1.1亚麻的科属、形态特征以及生长习性

亚麻的形态特征

亚麻为一年生草本；高30－l00厘米。直根较细，淡黄色。茎直立，圆柱形，上部分枝，无毛。叶互生，条形或条状披针形，长1．8—4厘米，宽2—5毫米，先端锐尖，基部渐狭，全缘，有3脉，无叶柄。花生于茎顶端或上部叶腋处，成疏松聚伞花序；萼片5，卵形或卵状披针形，长5—7毫米，先端突尖，具3条脉，边缘膜质，无腺点；花瓣5，卵形或卵状披针形，长1一1．5厘米，蓝色或蓝紫色，稀有白色或红紫色，早落；雄蕊5，花丝基部合生，退化雄蕊5，仅留齿状痕迹，与雄蕊互生；子房上位5室，花柱5，分离，柱头条形。蒴果球形，直径6－8毫米，淡黄色，顶端5瓣裂；种子通常l0，褐色，光滑，呈矩圆形，扁平。

1.1亚麻的科属、形态特征以及生长习性

亚麻的生态特性亚麻喜凉爽湿润气候。耐寒，怕高温。种子发芽最低温度1-3℃，最适宜温度20-25℃；营养生长适宜温度11-18℃。土壤含水量达到田间最大持水量的70％-80％。生育期70-80d。以土层深厚、疏松肥沃、排水良好的微酸性或中性土壤栽培为宜，含盐量在0.2%以下的碱性土壤亦能栽培。1.2亚麻的应用价值

亚麻纤维亚麻种子亚麻种植1.3研究目的和意义

通过对亚麻的不同外植体在相同条件下进行处理，观察亚麻外植体形成愈伤组织的情况。同时在MS培养基上采用不同浓度比例的植物激素对选择的外植体进行诱导生根发芽，观察外植体在何种激素浓度、激素比例下愈伤组织的分化最好，选择最佳的亚麻愈伤组织培养配方。为大量的组培生产，通过愈伤组织进行的再生体系的建立奠定基础。

2.实验方法与材料

供试亚麻种子是由天津农学院园艺系园林植物试验室提供。亚麻种子2.1实验材料2.2方法

无菌苗培养

不同激素处理和不同外植体愈伤组织的诱导

取亚麻种子，经自来水冲洗后,用75%乙醇浸泡30S,0.1%HgCl2溶液或次氯酸表面灭菌,无菌水冲洗浸泡3～5次。然后接种在1/2MS培养基上萌发,培养条件是:温度25℃,光照12h/d,光照光强为1600～2000lx,取8日龄无菌苗进行各种不同处理的组培试验。取预培养8日龄亚麻无菌苗的子叶、下胚轴等组织部位，用剪刀剪成1到3厘米小块。分别接种到含有不同激素浓度（6-BA,IAA）的分化培养基上。附加3％蔗糖、0.7％琼脂，调至pH5.8。将接种了的培养基放入培养室，培养温度控制在25±2℃，光照时间12h／d，光照强度2000Ix。观察不同部位外植体诱导愈伤组织及形成。每处理5瓶（5次重复），每瓶接种外植体8块。处理过程处理过程下一步3.1亚麻种子的消毒和污染率

获得无菌苗是建立亚麻再生和转化体系的第一步。结果表明，用HgCl2消毒种子5min时，污染率可控制在10%以下；消毒6min以上时虽然污染率降低，但亚麻的胚根及子叶随着升汞浓度的增加而呈现出明显的毒害现象。用2%的次氯酸钠消毒亚麻种子20min污染率为20%。因而确定消毒亚麻种子的适宜时间为0.1%HgCl25min。

3.实验结果与分析3.实验结果与分析3.2不同外植体对愈伤组织形成的影响

外植体种类愈伤组织质地颜色愈伤块大小子叶紧密绿较小下胚轴疏松浅绿较大表1不同外植体对亚麻愈伤组织形成的影响从表1可以看出子叶形成的愈伤组织质地紧密，颜色为绿色，愈伤块较小，愈伤组织数量较少。而下胚轴形成的愈伤组织质地疏松，颜色为浅绿色，愈伤组织块较大，愈伤组织数量较多。由于浅绿色和疏松的愈伤组织容易形成芽，所以，应选择下胚轴为亚麻愈伤组织形成的外植体。3.3不同激素浓度对亚麻愈伤组织形成的影响3.实验结果与分析处理培养基配方愈伤组织形成百分率%子叶下胚轴1MS+1mg/L6-BA+0.05mg/LIAA401002MS+2mg/L6-BA+0.05mg/LIAA68.887.83MS+3mg/L6-BA+0.05mg/LIAA67.11004MS+4mg/L6-BA+0.05mg/LIAA87.590表2不同激素浓度对亚麻愈伤组织形成的影响

3.3不同激素浓度对亚麻愈伤组织形成的影响3.实验结果与分析图1不同细胞分裂素浓度对亚麻子叶愈伤组织形成的影响3.3不同激素浓度对亚麻愈伤组织形成的影响3.实验结果与分析

表2和图1显示，细胞分裂素浓度明显影响子叶的愈伤组织形成。在6-BA浓度为1mg/L时，子叶愈伤组织形成百分率为40%；随着激素浓度的增高，愈伤组织形成百分率也增加。当在6-BA浓度为4mg/L时，子叶愈伤组织形成百分率达到最大，为87.5%。细胞分裂素浓度对下胚轴的愈伤组织形成影响较小。各浓度条件下，下胚轴形成的愈伤组织百分率均在88%以上（图2）。所以，子叶为外植体时，诱导愈伤组织的最佳配方为MS+4mg/L6-BA+0.05mg/LIAA。以下胚轴为外植体时，1-4mg/L的6-BA均可用于诱导亚麻的愈伤组织分化。3.3不同激素浓度对亚麻愈伤组织形成的影响3.实验结果与分析图2不同细胞分裂素浓度对亚麻下胚轴愈伤组织形成的影响

4.讨论4.1亚麻外植体的无菌处理

实验中发现不同材料对不同种类的消毒剂敏感度不同。亚麻种子对升汞比较敏感而有的处理则对次氯酸敏感。

4.2诱导亚麻外植体的生长与分化

本实验经过多次尝试未能得到芽。主要是愈伤组织再生系统在离体培养中外植体的一部分细胞经过脱分化和再分化的过程，加大了再生的难度。也可能是生长素激素浓度偏低。

4.3亚麻的生根

本实验未能通过愈伤组织分化出根系。生根困难的可能原因是：①不同植物种生根难易对基因型有很强的依赖性。②培养基中的盐离子浓度、糖浓度、植物生长调节剂等都影响无菌苗生根。

③不同植物种适宜的光照、温度等培养条件不同。5.结论

5.1最佳的亚麻种子灭菌方法是用75%酒精浸泡30s后，再用0.1%HgCl2处理5min，无菌水冲洗3-5次。5.2下胚轴为亚麻愈伤组织形成的适宜外植体。5.34mg/L浓度的6-BA有利于子叶愈伤组织的形成，愈伤组织形成百分率达到最大，为87.5%。子叶为外植体时，诱导愈伤组织的最佳配