地中海贫血基因检测

地中海贫血基因检测二、

发病机理三、

结果解读一、

地中海贫血简介一、地中海贫血简介地贫患儿什么是地中海贫血？地中海贫血，又称海洋性贫血，是由于血红蛋白的珠蛋白肽链基因突变或缺失，使某种珠蛋白肽链合成障碍而致的一种遗传性慢性溶血性贫血。一种常染色体隐性遗传病。其中α珠蛋白基因位于16号染色体上；β珠蛋白基因位于11号染色体上。地中海贫血地域分布

全球约有4.5%的人携带有血红蛋白病致病基因。中国南方高发地区人群携带率最高，可达到24%。地中海贫血的危害

贫血骨骼畸形多脏器损伤

组织供氧不足，功能衰退，危机生命

促进机体造血组织缺氧损伤

消化系统过度吸收铁

铁过度沉淀引起这些器官功能衰竭而死亡

骨髓过度造血骨板变薄，骨质疏松

骨骼畸形，特殊面容地中海贫血分类地中海贫血α点突变/缺失β地中海贫血基因轻型β－地中海贫血、中间型β－地中海贫血、重型β－海贫血遗传性胎儿血红蛋白持续症α地中海贫血基因静止型、标准型、HbH病、Bart’s胎儿水肿综合征β点突变地中海贫血遗传模式图二、

地中海贫血发病机理血红蛋白（Hb）组成HbA(a2β2)：出生后逐渐升高至96.5-97.5%；HbA2(a2δ2)：出生后逐渐升高至2.5-3.5%；HbF(a2γ2)：是新生儿主要血红蛋白（55%-85%），以后慢慢降低，2周岁＜2%，成人＜1%。α地贫发病机理α地贫1.重型α地中海贫血是α0地中海贫血的纯合子状态，其4个α珠蛋白基因均缺失或缺陷，以致完全无α链生成，因而含有α链的HbA、HbA2和HbF的合成均减少。患者在胎儿期即发生大量γ链合成γ4(HbBart's)。HbBart's对氧的亲合力极高，造成组织缺氧而引起胎儿水肿综合征。中间型α地中海贫血是α0和α+地中海贫血的杂合子状态，是由3个α珠蛋白基因缺失或缺陷所造成，患者仅能合成少量α链，其多余的β链即合成HbH(β4)。HbH对氧亲合力较高，又是一种不稳定血红蛋白，容易在红细胞内变性沉淀而形成包涵体，造成红细胞膜僵硬而使红细胞寿命缩短。2.轻型α地中海贫血是α+地中海贫血纯合子或α0地中海贫血杂合子状态，它仅有2个α珠蛋白基因缺失或缺陷，故有相当数量的α链合成，病理生理改变轻微。3.静止型α地中海贫血是α+地中海贫血杂合子状态，它仅有一个α基因缺失或缺陷，α链的合成略为减少，病理生理改变非常轻微。β地贫发病机理β地贫β地中海贫血的发生主要是由于基因的点突变，少数为基因缺失。基因缺失和有些点突变可致β链的生成完全受抑制，称为β0地中海贫血;有些点突变使β链的生成部分受抑制，则称为β+地中海贫血。1.重型β地中海贫血是β0或β+地中海贫血的纯合子或β0与β+地中海贫血双重杂合子，因为β链生成完全或几乎完全受到抑制，以致含有β链的HbA合成减少或消失，而多余的α链则与γ链结合而成为HbF(a2γ2)，使HbF明显增加。由于HbF的氧亲合力高，致患者组织缺氧。过剩的α链沉积于幼红细胞和红细胞中，形成α链包涵体附着于红细胞膜上而使其变僵硬，在骨髓内大多被破坏而导致“无效造血”。部分含有包涵体的红细胞虽能成熟并被释放至外周血，但当它们通过微循环时就容易被破坏;这种包涵体还影响红细胞膜的通透性，从而导致红细胞的寿命缩短。由于以上原因，患儿在临床上呈慢性溶血性贫血。贫血和缺氧刺激红细胞生成素的分泌量增加，促使骨髓增加造血，因而引起骨骼的改变。贫血使肠道对铁的吸收增加，加上在治疗过程中的反复输血，使铁在组织中大量贮存，导致含铁血黄素沉着症。2.轻型地中海贫血是β0或β+地中海贫血的杂合子状态，β链的合成仅轻度减少，所以病理生理改变极轻微。3.中间型β地中海贫血是一些β+地中海贫血的双重杂合子和某些地中海贫血的变异型的纯合子，或两种不同变异型珠蛋白生成障碍性贫血的双重杂合子状态，其病理生理改变介于重型和轻型之间。三、结果解读地中海贫血筛查和检测一线筛查指标血液学表型分析

血常规

血红蛋白电泳红细胞渗透脆性试验确诊指标基于DNA分析

地贫基因分型

地贫基因测序地中海贫血血液学分析指标-地贫-地贫/-地贫-地贫MCV(80~100fL)<80<8080

80MCH(27~32pg)<27<27

2727HbA2(2.5~3.5%)<2.5>3.5>3.5<3.0HbF(<1.0%)<1.01-3~15-35HbVariantsHbCS,HbQSHbE──亨氏小体偶见~++++─偶见─α-地贫基因检测a11﹒-a3.7-a4.2--SEAa2a1a2CS

CD142TAACAA(终止密码子Gln谷氨酰胺)QSCD125CTGCCG(LeuPro)

WS

CD122CACCAG(HisGln）﹒-α3.7

、-a4.2、--SEA三种缺失类型覆盖了中国人群缺失型的95%；CS

、QS

、WS三种点突变覆盖了中国人群点突变类型的98%。α-地贫基因检测电泳条带与基因型的对应关系基因型条带大小αα1.7kb-α3.72.0kb-α4.21.4kb--SEA1.2kbα-地贫基因型β-地中海贫血主要是基因点变突为主。两种基因型：β0：β珠蛋白基因发生突变后，完全不能合成β珠蛋白肽链。包括CD41-42，CD31，CD14-15，CD17，CD71-72，IVS-I-1，CD43，CD27/28等β+

：β珠蛋白基因发生突变后，还能部分合成β珠蛋白肽链。包括IVS-II-654,-28，-29，-30，-32，CAP，IVS-I-5,βE等β-地贫基因检测β-地贫基因型异常结果分析与处理DNA不纯或者太少,电泳验证;肝素抗凝;PCR程序设置有误;凝胶未加染料。1.α-地贫未跑出条带？没有PCR产物或者产物较少;配备试剂称量有误或者溶液定量差别较大;溶液A.B.CPH调错;杂交温度过高或者洗膜温度过高(>43℃);显色时间不够或显色过程未避光;H2O2失效。2.β-地贫未显色或者显色较弱？异常结果分析与处理α地贫点突变（CS/QS/WS）其突变位点在3.7和4.2和SEA交界位置，所以α地贫结果为-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2、-α4.2/-α4.2、-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA时，α地贫点突变的膜条为空白。3.α地贫点突变的膜条为空白？4.α地贫点突变结果为纯合子能不能直接报告？不能，要加做α确定是否有缺失。如果α结果为缺失（包括sea、3.7、4.2）那么结果则报告为点突变杂合子；如果α

结果为正常，则报告为点突变纯合子。异常结果分析与处理重新检测并送血液室做Hb电泳，若结果一样，考虑为点突变型HbH病。5.α地贫结果为SEA杂合子，Hb电泳提示为