实验一普通生物显微镜的使用

实验一普通生物显微镜的使用第一页，共三十页，2022年，8月28日一、实验目的：

1.了解普通光学显微镜和体视显微镜的基本构造及功用，并正确掌握使用和维护方法。

2.观察一些真核细胞的结构，学习基本生物绘图方法。3.学习临时装片的制作方法。第二页，共三十页，2022年，8月28日二、实验原理：（一）、显微镜概述：

显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。第三页，共三十页，2022年，8月28日（二）、显微镜的发明：

1.最早由荷兰眼镜商在1600年前后制造的，它的结构简单，放大倍数只有10～30倍，可以观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有人称它为“跳蚤镜”。这种显微镜是用光线照明的，属于光学显微镜。第四页，共三十页，2022年，8月28日2.英国物理学家罗伯特·虎克（RobertHooke，

1635—1703）研制出能够放大140倍的光学显微

镜，并用它来观察软木薄片，发现了细胞。第五页，共三十页，2022年，8月28日3.1673年有个名叫列文.虎克（AntonivanLeeuwenhoek）的荷兰人用自己制造的显微镜观察到了被他称为“小动物”的微生物世界。他也被称为微生物的开山祖。第六页，共三十页，2022年，8月28日4.1938年，德国工程师鲁斯卡（ErnestRuska,

1906-1988)

制造出世界第一台透射电子显微镜

（TEM）。1952年，英国工程师CharlesOatley

制造出第一台扫描电子显微镜（SEM）第七页，共三十页，2022年，8月28日（三）、显微镜的分辨率:

分辨率：也称为分辨力，它是指能把两个物点分辨清楚的最小距离。分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示的。其计算公式为:D=0.61入/N·AN·A·=n·sina/2

式中D为分辨率，A为光波波长，N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。

第八页，共三十页，2022年，8月28日

在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高。各物镜的镜口率如下表：

物镜镜口率(N.A.)工作距离(mm)10×0.255.4040×0.650.39100×1.300.11显微镜的总放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数

公式为:M=K1×

K2

第九页，共三十页，2022年，8月28日焦点深度:

显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的上下两侧也能看清楚的厚度叫做焦点深度。要看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。第十页，共三十页，2022年，8月28日三、材料和仪器：仪器：普通光学显微镜、体视镜（附显微用品：擦镜纸、香柏油、二甲苯、载玻片、盖玻片）材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培养皿、标本盒（内有各种装片）第十一页，共三十页，2022年，8月28日四、实验步骤：（一）普通显微镜的使用及维护：I.光学显微镜的构造普通生物显微镜由2部分构成：①：光学部分：包括物镜、目镜、光源、聚光器，是显微镜的主体。②：机械部分：包括镜筒、镜臂、镜座、镜台(载物台）、调节旋钮、物镜转换器等，用于固定材料和观察方便。第十二页，共三十页，2022年，8月28日II.显微镜的使用

1.

观察前的准备工作

①

.显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行调节。

②

.观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。

③

.观察时所用的材料、药品和各种器具要预先备好第十三页，共三十页，2022年，8月28日2.使用方法：（1）低倍镜的使用：观察任何标本，均需从低倍镜开始。①检查：检查显微镜是否完好。②准备：将显微镜放于前方略偏左，转动粗调旋钮将载物台下降，旋转物镜转换器使低倍镜正对通光孔。③对光：④放标本片：

⑤调节焦距⑥计算放大倍数：第十四页，共三十页，2022年，8月28日错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因：A.转动调节太快，超过焦点，需重新调节。B.物镜未对准通光孔。C.标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察对象。D.光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标本时，应将光线调稍暗些，有利观察。第十五页，共三十页，2022年，8月28日（2）高倍镜的使用：①依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物象，②将需要观察的部分移到视野中央，③眼睛从侧面注视物镜，移动转换器，换高倍镜，④看目镜，微调细调旋钮，至看到清晰物象。

第十六页，共三十页，2022年，8月28日错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因：A.观察的标本不在视野内。应在低倍镜下找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。B.标本放反了。C.焦距未调好。第十七页，共三十页，2022年，8月28日（3）油镜的使用：

①先用低倍镜观察标本情况。②换高倍镜，把需观察的部分移至视野中央。

③将聚光器升至最高位置，光圈开至最大。④在盖玻片所要观察的位置滴一小滴香柏油，放于载物台。⑤把油镜移至工作位置。第十八页，共三十页，2022年，8月28日⑥慢慢调节粗细调节旋钮，使载物台缓慢上升，同时细心从侧面观察物镜前端与标本之间的距离。先使物镜前端与油滴接触，再慢慢上升载物台，至物镜前端接近而没有碰触到盖玻片为止。（小心损伤油镜或装片）⑦眼睛从目镜观察，缓慢调节细调旋钮至看清标本（注意只能下降载物台）第十九页，共三十页，2022年，8月28日⑧观察完毕，下降载物台，使油镜离开光轴，及时做好油镜的清洁工作（先用干净的擦镜纸擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦拭两次，最后用干的擦镜纸擦拭一次）。玻片上的油可用“拉纸法”擦去：把一小张擦镜纸盖在载玻片的油滴上，其上滴一两滴二甲苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净（注意不要使用过多的二甲苯，并及时擦干净上面的香柏油，以免使装片受损）。第二十页，共三十页，2022年，8月28日注意：如果不出现物象或者目标不理想要重找，A.在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。

B.在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

第二十一页，共三十页，2022年，8月28日3.显微镜使用后的复原：（1）下降聚光器约1cm，（2）使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中间，提升载物台至原来位置，（3）把载物台上的标本移动器移至适当位置，（4）关闭电源。第二十二页，共三十页，2022年，8月28日4、显微镜使用的注意事项（1）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。（2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。（3）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台如果沾污应立即擦净。第二十三页，共三十页，2022年，8月28日（5）放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。（6）要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野右眼用以绘图。（7）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。（8）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。第二十四页，共三十页，2022年，8月28日（二）、体视镜的使用

体视显微镜又称实体显微镜，它在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像清晰和宽阔，又具有长工作距离，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规显微镜。

第二十五页，共三十页，2022年，8月28日（三）、标本的观察“5”字片：低倍人血涂片：低倍高倍油镜兔精虫涂片：低倍高倍单层扁平上皮：低倍高倍动、植物细胞有丝分裂切片：低倍高倍日本血吸虫雌雄合抱装片：肉眼低倍第二十六页，共三十页，2022年，8月28日（四）、酵母临时装片的制作1.滴一滴鲜酵母液于干净的载玻片上，2.轻轻盖上盖玻片，注意不要产生气泡，3.低倍、高倍镜下观察。注意：观察时注意光线不要太强，以免影响观察效果。第二十七页，共三十页，2022年，8月28日（五）生物学绘图方法：1.用2H铅笔绘轮廓，用HB铅笔描深，线条要光滑，2.图及文字部分全部用铅笔，文字用中文楷书，3.绘图纸上端写清实验名称，中部画图，下部写清所绘图名称、放大倍数，4.标明图中各部分名称，用直线引线并标在图的右侧，名称较多时，可先标在右侧，再标在左侧，5.可用光滑黑点表示明暗不同，不可大面积涂黑。第二十八页，共三十页，2022年，8月28日五、作业：1.绘图：绘出你用油镜所观察到的人红细胞视野图。2.思考题：（1）总结使用显微镜应特别注意的几个问题。（2）从低倍物镜转高倍物镜时应注意哪几点？（3）接物镜上各铭文有何意义？（4）用油镜观察和嗣后的操作步骤。为什么要用