宠物医学-实验室四大基础检验

实验室四大基础检验一、血液学1.如何制备血涂片2.犬猫正常红细胞形态及异常形态的认知3.犬猫正常白细胞的形态4.显微镜下白细胞的计数制备染色良好的血涂片，是精确分析血象的先决条件。以便于观察血液细胞的形态及血液原虫，同时用于制备血涂片的载玻片上杂质直接影响着血涂片的质量。涂片前准备：1.玻片的杂质处理2.染色液的准备（瑞氏或瑞氏-姬姆萨染色液或者diff-quic染色液）3.采集血液（全血或EDTA抗凝血）血涂片的制备涂片前的准备：1.新玻片的清洁:20%的洁厕灵泡一天（至少4-24小时）-清水冲洗-毛巾擦干（纱布）-无水乙醇浸泡24小时(需要封口)-真丝布擦干-晾干或烘干，装好备用。涂片前的准备2.旧玻片的清洁：洗衣粉水煮开15分钟，放凉后，清水冲洗干净，用一块略湿润的纱布拧干，内含少许洗衣粉，擦洗玻片，然后清水冲洗干净，接着重复新玻片清洁法。血涂片的推制1：载玻片的左手持法左手拇指和中指持载玻片血涂片的推制2：滴加血样：用棉签（或者盖玻片、滴管）沾取少量抗凝全血，轻触载玻片右1/4处，使载玻片上沾上半滴血液.血涂片的推制3：盖玻片持法右手拇指，中指夹持盖玻片两缘，食指轻压玻片表面，将选好的盖玻片平滑边压在载玻片上血液的前方，两玻片夹角30°左右，向后拉盖玻片至接触血液，待血液扩散成直线。血液粘稠时角度适当减小，否则制备的血片短而厚，贫血时角度稍大。血涂片的推制4：推片右手拇指，食指在夹持盖玻片的同时，也夹持了载玻片的两条边，并以之为轨道前推盖玻片，直至载玻片的尽头。血涂片染色制备良好的血涂片应分布均匀，血膜长而薄，呈火焰状。每个患病动物应制备多个血涂片。红细胞的正常形态形状：两面双凹的圆盘状，中央区域呈灰白色，猫中央灰白区域很小，犬：大小：6.0—7.0um；猫：大小5.5-6.0um.多染性红细胞（蓝红色的未成熟红细胞）：犬：约占红细胞总数的1%(附图片）；猫：约占红细胞总数的1.5%--2.0%。红细胞多染性红细胞（大红细胞）豪-乔氏小体豪-乔氏小体（howell-jollybodies)是红细胞内深染的核残体，正常犬红细胞内很少含有这些包涵体。多见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、脾切除后以及缺铁性贫血等的骨髓及血片猫偶尔可见，比犬多见。红细胞异常形态1.红细胞大小不等症—红细胞大小不一致（大红细胞---红细胞变大；小红细胞—红细胞变小）2.多染性红细胞症—血涂片上多染性红细胞的数量增加3.低色素血症---血红蛋白含量减少，低色素红细胞呈现较大的中央灰白区域（附图）低色素性红细胞4.棘型红细胞---红细胞表面有2—10个钝长的指状突起（注意与锯齿状红细胞区分）5.球型红细胞—小而圆的红细胞，深染，没有中央灰白区域。（附图）6.口型红细胞---呈杯状的红细胞（附图）

7.海因茨小体---被氧化的血红蛋白沉淀，通常在红细胞表面呈鼻状突起（附图）棘型红细胞口型红细胞球形红细胞8.偏心红细胞---血红蛋白集中与细胞的一极，另一极为未着色区域9.裂红细胞----形状不规则，通常成不规则的三角形，为红细胞碎片.红细胞碎片，包括盔形红细胞等，多见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血和心源性溶血性贫血等红细胞破碎综合症；其它常见于化学中毒、肾功能衰竭、血栓性血小板减少性紫癜。（附图）10.锯齿状红细胞---边缘皱褶，拉长的红细胞（也称锯齿状卵红细胞）11.靶形红细胞—形状似射击的靶形（附图）裂红细胞血涂片中靶形红细胞出现较多时可能表明存在慢性疾病，包括肝脏疾病和堵塞性黄疸、某些内分泌疾病、铁缺乏、脾脏切除后以及罕见的卵磷脂-胆固醇酰基转移酶先天性缺乏。不过，血样风干过程中处理不当也可产生靶形红细胞。有核红细胞——犬猫血液中存在有核红细胞代表了贫血时未成熟细胞的释放，偶尔也见于未贫血的动物。（附图）溶血性疾病：犬巴贝西虫病这是一种由蜱传播的犬血液原虫病。巴贝西虫病可引起真正的血管内溶血性贫血，通常以血红蛋白血症和血红蛋白尿为特征。在外周血液血涂片中，巴贝西虫以泪滴状存在于红细胞内，长约3um,被寄生在红细胞的巴贝西虫可达4条之多，其在外周血液中出现也是有周期性的。（附图）嗜中性粒细胞形态：大小——直径12-15um，或者是红细胞直径的2-2.5倍。细胞核——分叶或者部分分叶，染色质浓密，深紫。细胞质——淡粉色或者浅蓝色，含小颗粒，均匀。正常动物的大部分循环嗜中性粒细胞（95%-100%）都是分叶嗜中性粒细胞。杆状中性粒细胞很少见嗜中性粒细胞嗜中性粒细胞嗜中性粒细胞的功能:主要是防御微生物入侵组织，嗜中性粒细胞可杀死细菌，还能破坏或参与破坏霉菌，藻类以及病毒通过定向转移或者趋化作用，在炎症部位或者细菌感染部位聚集犬嗜酸性粒细胞：形态：大小——直径12-20um与嗜中性粒细胞相似或者稍大。细胞核——分叶或者部分分叶，染色质浓密，深紫细胞质——含有大小和数量不等的圆形橙红色颗粒，犬嗜酸性粒细胞偶尔也可能含有较大的圆形颗粒，其大小和颜色与红细胞相似。嗜酸性粒细胞猫嗜酸性粒细胞：大小——直径12-20um，与嗜中性粒细胞相似或稍大。细胞核——分叶或部分分叶，染色质深紫细胞质——含有大量淡粉色的棒状颗粒嗜酸性粒细胞功能：是全身过敏反应的一个主要组成部分具有有限的吞噬作用和杀菌活性，在破坏肿瘤细胞中可能起一定作用嗜酸性粒细胞在杀死表面含有lgG或补体的吸虫和线虫的过程中也起着重要作用嗜碱性粒细胞犬：大小——直径12-20m与嗜中粒细胞相似或稍大。细胞核——分叶核细胞质——呈淡紫色或者灰色，含少量散在的深色颗粒，有些细胞颗粒可能非常少，甚至完全没有。猫嗜碱性粒细胞大小——直径12-20um，比嗜中性粒细胞稍大。细胞核——分叶核，染色质淡染，均质，与单核细胞的细胞核极为相似。细胞质——含有大量圆形，淡紫色的颗粒肥大细胞大小——与犬猫的嗜碱性粒细胞相似细胞核——圆形至椭圆形，位于细胞质的中央或者一侧细胞质——含有大量圆形、深紫色小颗粒，部分颗粒可能部分遮蔽细胞核外周血液中很难见到肥大细胞单核细胞：犬猫单核细胞形态相似大小——15-20um细胞核——形状不规则，花边状网状染色质细胞质——大量，呈灰色或蓝灰色功能——单核细胞/巨噬细胞连续体是循环吞噬系统的第二大分支（嗜中性粒细胞是第一大分支）特异的巨噬细胞功能包括：单核细胞吞噬作用通过释放炎性介质来调节炎症反应进行抗原处理以提呈给淋巴细胞；参与激活免疫应答参与调节机体的铁存储犬单核细胞淋巴细胞犬猫正常淋巴细胞形态相似大小——9-12um细胞核——圆形，偏于一侧，染色质成块细胞质——缺乏边缘，淡蓝色反应性（抗原刺激性）淋巴细胞受抗原刺激的淋巴细胞也称为反应性淋巴细胞，免疫细胞或者转化淋巴母细胞反应性淋巴细胞代表机体对抗原刺激产生了适当反应犬猫反应性淋巴细胞相似反应淋巴细胞之间形态存在很大的差异，但共同点包括：大小——15-20um细胞核——大，网状染色质，可能存在核仁细胞质——丰富，淡蓝至深蓝，可能存在苍白的核周区形状：盘状，椭圆形，稍微拉长，两面稍凹或者是扁平的，边缘平滑大小：直径2.2-3.7um，厚0.5um（约是红细胞大小的1/1o）幼稚血小板通常是巨型血小板，单个血小板是最常见的，也可以观察到血小板群。血小板猫血小板在形态上与其他动物的血小板相似形状：小球体，有时会稍显拉长，容易结成团块，形成一些无定型的团块巨型血小板可与红细胞大小一样，常见于正常猫血液单个血小板及血小板凝集群（附图）显微镜下的计数镜检，分类计数：由于各种白细胞的物理性质稍有不同，他们在血涂片上的分布不均匀，一般在涂片的边缘和尾部较集中，在中部较稀疏，计数时血涂片应按固定的方向曲折推进（附图），用白细胞分类计数器计数最少100个白细胞，则各类白细胞的计数值就是其各自的百分含量。粪便的显微镜检消化产物体细胞寄生虫植物细胞菌类粪便的检查方法

1.直接涂片法（适合于虫卵密度较大时）2.悬浮法（a.饱和盐水浮集b.硫酸锌溶液）3.沉淀法（适合于比重较大的虫卵）直接涂片

直接涂片的优势在于准备时间短，操作过程需要的设备少，其缺点在于少量的粪便可能不足以检出携带量低的寄生虫，同时载玻片上大量无关的粪便碎片可能与寄生虫混在一起。直接涂片粪便样品可通过棉签沾取或测肛温的体温计（在检测动物体温后）获得，无论哪种方法需要很少的粪便。方法：1.在载玻片上滴一滴饱和盐水或水，再放上等量的粪便。2.用棉签将粪便和盐水或水充分混匀，使之成为均与的乳液3.在载玻片上进行涂片，涂层要薄到透过片子看到报纸上的字。4.去掉大块的粪便，如果需要再加入水，然后盖上盖玻片。5.在10倍物镜下检查虫卵和幼虫或在40倍的物镜下检查移动的成虫。悬浮法1.饱和盐水悬浮法（较常见）2.硫酸锌悬浮法原虫变性性最小，饱和盐水易腐蚀实验仪器，形成结晶，并使寄生虫卵严重脱水变形，其能达到的最大比重1.200.使得偏重些的卵沉在下面。

硫酸锌溶液配制在1L水中边搅拌边加入约386g的硫酸锌，无需加热，但加热可快速溶解。悬浮法检测方法：1.将约2g的粪便放入杯中，加入适量已配制的硫酸锌溶液，用棉签搅拌均与，再加满溶液至杯满，盖上盖玻片，静置约15分钟，待检。2.迅速拿开盖玻片放在一块新载玻片上注意防止气泡过多，至于显微镜下10倍镜检，同直接涂片法操作。沉淀法这种方法用于检查重的在悬浮液中不能漂浮的虫卵或是在悬浮液中容易脱水变形的虫卵，吸虫卵很重，不适用漂浮法，一般用沉淀法。方法：1.在杯中将2g粪便与自来水混合，将混合液通过纱布过滤并注入到离心管中至半管。2.用水调节离心管的平衡，离心3-5min,1300-1500rpm。3.慢慢将表面的液体倒出或用吸管吸出丢弃，不能搅乱下层的沉淀。4.用吸管吸取少量细小沉淀置于载玻片上，盖上盖玻片在显微镜下检查，检查方法同直接涂片检查法。用于常规检验的粪便样品越新鲜越好，在几个小时内不能检验样品应该放在冰箱内或加入等体积的10%的福尔马林。粪便样品要新鲜是由于卵、卵囊和生活周期的其他阶段随时可能因为生长发育而发生改变使诊断变的十分困难。粪便的肉眼检查：粘稠度：根据动物种类的不同新鲜粪便也具有一定的形态。腹泻和便秘都可能是寄生虫感染造成的颜色：粪便颜色受到所吃的食物的影响吸收不良和感染寄生虫也可能改变粪便的颜色。血液：粪便中存在血液可呈深红棕色或条纹状的鲜红色。出现上述任何一种血便都说明存在严重的寄生虫感染或其他严重的肠道疾病。便血是重要的临床症状，代谢后的血液呈深色、焦油状。消化产物：1、脂肪无色透明或呈淡黄色因表面张力作用通常呈球形。应与气泡相鉴别。动物摄入普通饮食时粪便不见或少见脂肪滴，如见大量脂滴多属病态。动物摄入脂肪过多消化吸收不完全粪便也可见较多脂滴。2、肌肉纤维在低倍镜下呈蜡样，较鲜明的黄色，形状不定，消化较充分时，内部结构较均匀，消化不充分时，在高倍镜下可见内部未消化的肌丝和横纹。肉食兽类便中有时可见。摄入过多或消化不良时，可大量出现。3、淀粉。颗粒细小，呈球形，有时数个淀粉球聚成团。经碘酒染色呈棕黑色或蓝紫色。摄入过多或消化不良时大量出现。部分细胞内也含大量淀粉成分，经碘染色后呈蓝紫色。肌纤维体细胞1、红细胞。红细胞抵抗力弱，在肠道已被消化、腐败而破坏。粪便中正常形态的红细胞可见于后部肠道近期出血，如异物损伤、感染性大肠炎导致的出血等。前部肠道出血，粪便中红细胞形态常变形，破坏严重。2、白细胞。粪便中的白细胞或脓细胞来自肠壁的渗出，常混杂于大量黏液中，聚集成团。低倍镜观察又未经碘染色，有时不易被发现。大量白细胞或脓细胞的存在，提示剧烈的肠炎。3、上皮细胞，大而扁平，来自肠壁，肠炎时常与白细胞，脓细胞同时大量存在。寄生虫寄生虫可感染动物的口腔，食管，胃，小肠，大肠及其他内部器官，对于这些寄生虫，可进行粪便采集和显微镜检查，通常在粪便中找到寄生虫生活周期某个阶段的虫体便可确诊。包括：虫卵、卵囊、幼虫、节片（绦虫）和成虫。1、球虫原虫，卵囊呈卵圆型，无色，壁薄而光滑，单层，内有两个到多个孢子囊；大小为：35~42um-27~33um，寄生在肠道粘膜上皮内。2、滴虫原虫，虫体呈立体的纺锤型或梨型，常有4至6根鞭毛，分别向头尾两侧伸出。长：9~20um，宽：5~10um，通常没有包囊阶段。在生理盐水稀释的样品中运动活跃，但由于折射率与背景的折射率相似，观察发现较难，需在高倍镜下鉴别。3、蛔虫蛔虫卵呈球形或椭圆形卵壳厚，多层，外层粗糙，表面凹凸不平，原无色，常被粪便内胆色素染成黄色至棕绿色，卵壳内为球形细颗粒的胚细胞，极少含有粗大颗粒，有时因卵壳厚而不易辨认其内部构造。有时见吐出或随粪便排出虫体，虫长5~18mm，白色线状。4、钩虫卵呈椭圆型，卵壳呈明显的一层，极薄而透明，无色，内含有多个卵胞，卵壳与卵胞间清晰透明。虫体白色线状。5、绦虫卵囊体积较大，形态特征明显，易于鉴别。成熟的孕节常随粪便排出体外，白色乳一小段扁的面条；孕节干燥后状如白芝麻，常挂于肛门周围。6、吸虫吸虫卵是肠道寄生虫中最小的虫卵之一，形状似椭球形，但一段稍细另一端钝圆，较细的一段有卵盖；卵壳较厚，淡棕黄色，外表不很光滑。吸虫的虫体半透明，形似蚂蝗，两端均有吸盘。犬球虫犬弓首蛔虫“吸金虫”—华枝睾吸虫图1奶牛粪便中的吸虫卵钩虫卵线虫卵（视频）绦虫卵鞭虫卵植物细胞1、纤毛：存在植物叶片表面，呈线状中空，基部钝，末梢尖；表面光滑或有凸起。注意避免误认为线虫虫体。2、木栓细胞：常呈蜂窝状排列，亦有个别脱落的单个细胞。细胞常呈多边形，比较厚，内有颗粒。注意与寄生虫卵相区别。3、植物导管：植物的导管系统多呈螺旋形盘曲，脱落后状似弹簧，断裂的导管有时呈环状。4、花粉：外观多呈光滑的球形，颜色多样，其形状最易与寄生虫卵混淆，花粉平均直径比虫卵小。植物细胞菌类正常的粪便中含有大量的细菌。粪便中的细菌形态、种类多样，不能单从形态上鉴别。粪便中常含有少量的真菌。消化道内有害真菌数量过多时也可引起肠炎。兔等草食动物由于消化需要含有较大量真菌属正常。另外动物服用酵母片等微生物制剂后，肠道也可见相应的真菌。链格孢霉大肠杆菌病三、尿液检验尿液检验包括尿常规和尿沉渣。尿沉渣显微镜检查的主要对象有上皮细胞，红细胞，白细胞，管型，菌类，各种结晶等等，尿沉渣镜检中红细胞，白细胞，肾小管上皮细胞意义较重要。尿液的采集：清洁的容器收集自然排出、尚未落地的尿液，必要时采取导尿管导尿或膀胱穿刺采尿。尿沉渣的制备：取10ML左右的尿液，置离心管中，以1000-2000R/分离心3-5分钟，用滴管吸出上清液，轻轻晃动离心管，使沉渣均匀混悬于少量剩余尿液中，用滴管吸出滴于载玻片上，加盖玻片镜检。可用碘染液染色。1.红细胞新鲜尿液中红细胞的正常形态多为淡黄色圆盘状，在弱酸性尿中，其形态和颜色可较长时间无改变，在碱性尿中，红细胞破坏很快。尿红细胞的出现常并非由于肾小球通透性增加而来，尿路的任何部位（如膀胱、尿道）由于感染，结石等发生损伤，导致局部微血管破裂，均可造成尿中红细胞的出现。尿红细胞大量破坏时，血红蛋白逸出，造成尿蛋白检测呈阳性，其次，雌性动物发情时，尿中可能带有从生殖道来的红细胞。红细胞2.白细胞正常尿中白细胞多是分叶核粒细胞，一般数量极少，呈散在分布，直径稍大于红细胞。脓细胞为白细胞吞噬大量异物后形成，主要为变形的嗜中性细胞。如尿中有大量白细胞或脓细胞，眼观尿液混浊，静置后有大量沉淀，表示尿路有剧烈炎症。在尿中有大量白细胞，蛋白尿增多和肾小管上皮细胞的情况，则为肾炎的象征，下泌尿道发炎时，尿中仅有少来那个白细胞和蛋白质而无肾小管上皮细胞。3.上皮细胞1.肾小管上皮细胞（也称小圆上皮细胞）来自肾小管，多呈圆形或多角形，比白细胞稍大，含一大而圆的胞核，核位于细胞的中央，细胞浆有颗粒。小圆上皮细胞大量出现，表示肾实质有严重疾患，常见于肾小球肾炎，其他能引起肾脏损伤的疾病尿中也可出现肾小管上皮细胞。2.变移上皮细胞也称大圆上皮细胞，约为白细胞的2-4倍大小，形态不一，可似梨形，梭形，圆形或带尾形，核呈圆形或卵圆形，来自膀胱、尿道、输尿管、肾盂、前列腺或精囊腺，在正常尿中不易见到，在发生肾盂、输尿管、膀胱等的炎症时刻成片脱落。变移上皮细胞肾小管上皮细胞3.鳞状上皮细胞（也称扁平上皮细胞）尿中形态最大的细胞，呈扁平的片状，似鱼鳞，含有小而明显的圆形或椭圆形核，来自膀胱、尿道及阴道渐层。正常尿中少量存在，膀胱炎时，尿中科出现大量的鳞状上皮细胞。4.精子正常的精子能活动，外形似蝌蚪，雄性动物及配种后的雌性动物尿液中均可发现。（附图）鳞状上皮细胞精子5.管型1.透明管型正常尿中偶见，典型结构为质地均匀，边缘光滑，呈明显的圆柱几乎无色透明，长短不一。2.颗粒管型泌尿系统疾病导致出现的管型中最常见，为透明管型中含有多量颗粒，色泽较透明管型暗，较透明管型短而粗，起颗粒主要由变性蛋白，脂肪微粒构成，均为肾上皮细胞变形的产物。透明管型颗粒管型3.上皮管型为管型中含有肾小管上皮皮细胞4.红细胞管型为管型中含有红细胞，说明肾小球或肾小管出血。5.蜡样管型为肾小管内停留时间久的透明管型所形成。颗粒管型肾上皮管型肾上皮细胞（瑞姬氏染色）6.结晶物尿液中出现结晶称为结晶尿。结晶尿布一定都有意义。肾功能正常时，可将形成结晶的某些成分排入尿液，从而形成结晶，一些结晶是代谢性疾病的产物，引起尿结晶行成的因素也可引起尿结石的形成，形成结晶的类型取决于尿液的PH值、浓度和温度，以及尿液成分的溶解度。如果样品在检测前放置、冷藏，样品中的结晶两将因组成的物质在低温下溶解度较低而增加，冷藏样