第五讲猪口蹄疫诊断与防疫1

第五讲猪口蹄疫诊断与防疫一、概况

Foot-and–MouthDisease由口蹄疫病毒引起偶蹄兽的急性、热性、高度传染性的动物疫病。OIE规定为A类传染病，我国定为动物1类传染病。曾造成全球流行,17-19世纪,德国、法国、奥地利等有报道，至20世纪，欧洲仍广泛流行；亚洲更严重。迄今为止，仅新西兰未报道口蹄疫。

澳大利亚1872年、日本1933年、美国1929年、加拿大1952年、墨西哥1954年宣布消灭口蹄疫。后采取严格检疫等防范措施、并因为有良好的天然屏障，未再传入口蹄疫，属于长期无口蹄疫国家。

因该病传播快，加上现代交通发达，口蹄疫一直是隐患，随时有爆发危险。如1997年台湾猪口蹄疫，400多万头猪被扑杀、销毁，各种损失达80亿美元。2001年，英国口蹄疫，有2300个点发病，扑杀牛等450万头，直接和间接损失超过90亿英镑。中国：自1990年爆发以来，我国流行严重。主要是O型，但新疆等牛羊有A型，特别是2004年以来，发生Asia-1口蹄疫，并传播至内地。中国边境国家口蹄疫流行亦严重，特别是南亚和西亚国家。二、世界口蹄疫流行新动态1病毒特性发生改变，出现优势毒株

口蹄疫7个主型在世界的分布不均匀，其中O型占76%。1999年，世界口蹄疫参考实验室检测512份病料（40个国家），49.4%分离到O型病毒。1997年台湾、2000年韩国及日本、2001年英国均为O型口蹄疫。病毒对宿主易嗜性发生变化：1997年台湾口蹄疫猪易感，但牛不出现临床症状2000年韩国口蹄疫仅牛发病，2002年时仅猪发病。隐性带毒对难以防控，可能成为以后新的传染源O型毒株泛亚株的出现：该毒株具有较强的传播能力和入侵能力，其宿主有牛、水牛、猪、绵羊、山羊、骆驼、鹿等。1990年在印度首次发现，1994年传入沙特，1996年传入欧洲，1998年在不丹，1999年在台湾和东南亚，2001年在英国（英国历史上首次流行泛亚株）。另外，泛亚毒株在不同动物表现不同的临床致病特点，如在伊朗引起羔羊很高的致死率，在台湾和日本引起牛亚临床感染，且对猪的潜伏期可由通常的2-10d缩短为36h。目前，泛亚毒株已经成为世界口蹄疫的优势毒株。但是2010年中国广泛流行缅A株。2病毒传播速度更快，造成的危害更大因为病毒变易，竞争优势毒株具备更强的入侵能力和更好的适应环境变化的能力，从而实现跨国传播。2003年3月，韩国、日本爆发口蹄疫，1个月后，病毒就进入俄罗斯、蒙古；2001年英国爆发口蹄疫，1月后，就扩散到爱尔兰、法国、荷兰，造成欧洲和世界口蹄疫的爆发。3非口蹄疫国家从新爆发口蹄疫14-15世纪，阿拉伯就有口蹄疫相关的报道；17-18世纪，德国、法国等欧洲大部分国家爆发口蹄疫；1845-1894年，欧洲严重流行口蹄疫，并扩散至南美；亚洲口蹄疫流行仅次于非洲，居世界第2位，2000年前除韩国、日本、文莱、新加坡等岛国，均有流行

2000年5月24日，OIE通过54个国家为非免疫无口蹄疫国家，其中欧洲占32个，美洲12个，亚洲4个，大洋洲4个，非洲2个。1997年台湾，2000年韩国、日本，以及2001年英国是口蹄疫变异株在原为无口蹄疫国家爆发的例证。其中日本1908年，韩国1933年就已经消灭了口蹄疫。三、我国口蹄疫流行历史及现状主要分为以下三个阶段：上世纪50-60年代主要感染牛羊，猪占0.95%。第一次1950-1953年爆发，首次在新疆，1951年西北5省流行，后至华北、华中、华东、东北，共19省市；1952年四川阿坝流行；发病牲畜数百万60年代起，口蹄疫疫情发生变化，猪感染比例迅速上升，70-80年代牛羊比例急剧下降，90年代猪的发病率达到历史高峰，占总数的98%。1963年，由苏联、蒙古传入O型口蹄疫（呼伦贝尔）1964年夏，苏联传入A型口蹄疫（新疆、蒙古）同年，由新疆向内地调运耕牛，沿途从新疆、甘肃、陕西、河南、安徽、山东等在21省市流行，数百万头发病近年来，又呈新特点（1）1999-2001年，我国爆发，以牛羊为主，由泛亚株引起，由印度及东南亚传入我国边境地区（2）2001-2002，我国口蹄疫回归90年代“猪群毒”为主，泛亚株减少（3）2003年起，“猪群毒”和泛亚株并存（4）2005年6月和12月，江苏、山东发生Asia-1口蹄疫，但被控制，没有爆发四、诊断

由口蹄疫病毒引起偶蹄兽的急性、热性、高度传染性的动物疫病。OIE规定为A类传染病，我国定为动物1类传染病。1、病毒分离（1）病料采集家畜感染5天后，病畜食欲减退，体温升至40℃，同时舌面水疱已形成，开始出现流延，此时是采集病料的最好时间。水疱皮、水疱液、食道及咽部分泌物。屠宰后的心脏、血液、肝、脾、肺等均可用于病毒分离。（2）样品处理水疱液及血液样品可直接用于分离，水疱皮及组织样品要洗去甘油，磨碎，以PBS制成悬液（1：10），10000g离心，上清过滤即可接种。（3）分离病毒细胞分离FMV能感染的细胞有牛舌上皮、犊牛肾、甲状腺、仓鼠肾、仔猪肾等细胞。PK、BHK等细胞系亦常用。动物分离小鼠和豚鼠常用于分离FMV。3~4日龄的乳鼠十分敏感。颈部皮下接种0.2ml，15h后出现口蹄疫的症状，如麻痹、呼吸紧张、心肌麻痹等。病毒滴度可达（LD50）可达107左右。

豚鼠选500g以上，病料处理后0.4ml接种后肢底部，48~72h后形成水疱。（LD50）可达106左右。2、血清学诊断Neutraliazationtest(NT)FMV与相应抗体作用后，可失去感染力。可用已知抗体检测待检病原。FMV的检测一般在乳鼠或细胞上进行。NT还可用于FMV的分型。（1）固定血清稀释病毒法（2）固定病毒稀释血清法（3）乳鼠中和试验（4）细胞中和试验（5）空斑减少中和试验反向间接血凝试验以抗FMV抗体致敏红细胞，再以之检测相应FMV。可用于病毒的分型。乳胶凝集试验琼扩试验主要用于测定抗体。酶联免疫吸附试验以不同血清型的纯化FMV免疫豚鼠制备抗血清，经纯化后包被ELISA板，用以检测相应病毒，可用于FMV的分型。常用方法有间接法、夹心法等。夹心法以多抗包被，单抗夹心，效果良好。3、分子生物学诊断核酸杂交先制备特异FMV的核酸探针，以同位素或地高辛等标记，利用碱基互补配对的原理进行检测。常用PCR方法扩增FMDV的VP2或VP3基因的cDNA作为探针。PCR用于扩增两个已知序列间的DNA片段。FMV聚合酶基因中有454个基因是绝对保守的，选保守区两端的序列分别作为引物。上游引物5-AGGACAAAGCGCTGTTCCGC-3下游引物5-TCAGGGTTGCAACCGACCGC-3另外，VP2、VP3基因具有型特异性，可用于病毒的分型。PCR检测FMDV敏感、特异，理论上可检测单拷贝基因。寡核苷酸指纹图谱分析是核酸或核酸片段经T1酶酶切后，经电泳，少数大分子量片段在PAGE上分布的特点进行比较。

T1酶的特点是在3-末端遇G就切开，故可将核算切成不同大小的片段。

优点是比较简便，敏感性高，能显示出毒株之间的差异。常用于研究：毒株变异关系；大流行时病毒的起源、扩散的去向和小流行时毒株的首发地，蔓延途径；野毒株和疫苗毒株的比较等。五、口蹄疫的防制

（一）口蹄疫的预防措施防止国外传入（1）禁止从有该病的国家输入易感动物或产品。（2）进口动物产品，必须经过出口国家的政府兽医机关检疫，出具非疫区产品证明。（3）近3年内。边境地区发生口蹄疫，应在边境50~100公里的地带，对易感的家畜普遍实施疫苗注射。（4）在国家规定的出入境口岸，设立动物检疫机关，对出入境动物及产品进行检疫。（5）当邻国边境发生口蹄疫时，实行边境封锁。（6）同邻国签定兽医工作互助协定，沟通信息，共同扑灭疫情。国内非疫区的预防（1）当邻近地区发生口蹄疫，应对疫点周围的易感动物进行免疫预防。（2）关闭动物交易市场。（3）在交通要道设立检查站，禁止从疫区运进易感动物及产品。（4）受威胁的地区要管好畜群，不使其与病畜接触。（5）防止各种媒介和传播渠道传入疫情。（6）建立疫病检测网络，有利于早、快、严、小消灭疫情。（二）扑灭口蹄疫的措施1扑杀全部病畜和同群牲畜。2紧急屠宰疫区病畜，但不销毁，无害化处理后使用，在疫区周围实施免疫注射。该方法在落后地区使用较多。3第三种办法是对疫区实行严格的封锁政策。这是常用的方法，特别是疫情扩散后，采用该法。我国采用的是综合防制的方法。（三）免疫预防预防接种是防制口蹄疫的有效方法。目前使用的是O+A型的油乳剂灭活疫苗。家畜断奶后免疫，一月后加强免疫，可保护半年。但新疆已出现亚洲1型口蹄疫，且有扩散趋势。（三）免疫预防预防接种是防制口蹄疫的有效方法。目前使用的是O+A型的油乳剂灭活疫苗。家畜断奶后免疫，一月后加强免疫，可保护半年。但新疆已出现亚洲1型口蹄疫，且有扩散趋势。

在国内目前生产口蹄疫灭活疫苗的生产企业有六家，分别是中牧股份兰州生物药品厂、兰州兽医研究所中农威特公司、金宇保灵生物药品有限公司、新疆天康畜牧科技有限公司、乾元浩保山疫苗厂及上海申联生物制品有限公司。其中上海申联生物制品有限公司目前仅生产猪口蹄疫合成肽疫苗。已注册用于生产猪口蹄疫灭活疫苗毒种主要有：