植物制片技术研究生课件

植物解剖与制片技术PlantAnatomyandSectioningTechnology学时分配：理论课4学时；实验课24学时。教学目的：通过对植物制片技术的掌握，为研究植物胚胎学、植物解剖学、作物栽培、遗传育种等教学、科研提供必备的技术。主要参考书目：1植物显微技术，王灶安主编，农业出版社；2植物制片技术，李正理编著，科学出版社；3《西北植物学报》，《植物研究》，《武汉植物学研究》，《植物分类学报》等学术杂志。考核方式：撰写实验报告：对所观察的器官结构进行详细的描述并作进一步的讨论，附上植物器官显微结构图。植物显微制片技术

植物制片的类型和方法切片法：徒手切片法

石蜡切片法滑走切片机切片法半薄切片法超薄切片法非切片法：离析法压片法整体封存法石蜡法制片原理与方法

一、材料的选择与分割

1.新鲜、健康、有代表性的材料；

2.生长发育的不同阶段;3.大小适当，0.5cm左右.

二、杀生、固定与保存

杀生：固定：

1根据固定目的物本身的结构性质；

2分割大的材料；

3抽气；

4标记.(整染）

固定液的配置及使用：

FAA固定液：适用范围：根、茎、叶、花药、子房固定时间：24h低温配方：福尔马林5ml

冰醋酸5ml70%酒精90ml

卡诺固定液：适用范围：根尖、花药、子房固定时间：小于24h，15-30分钟配方：ab

纯酒精15ml30ml

氯仿5ml

冰醋酸5ml1ml

保存：

70%酒精三、脱水

作用：1

除去组织内的水分；

2使石蜡顺利进入细胞内脱水剂：

1酒精：50%--70%--85%--95%--100%（梯度脱水）

2二氧杂环己烷

3正丁醇

4叔丁醇

5丙酮

四、透明作用：1

使材料透明、干净；

2便于包埋剂及封固剂的进入透明剂：

1二甲苯：1/2纯酒精+1/2二甲苯——二甲苯

2甲苯或苯；

3氯仿

4丁香油、香柏油等五、浸蜡

1低温浸蜡：40℃左右（1夜）

2高温浸蜡：58℃左右（6小时以内）六、包埋

1选取合适熔点的石蜡；

2包埋用具的准备要点：动作迅速

七、切片

1修块;2切片:厚度在8-14µma切片有裂纹

b蜡带弯曲

c材料破碎

d切片卷成圆筒

e蜡带皱缩八、粘片与展片

粘片剂:

明胶1g

石炭酸2g

甘油15ml

蒸馏水100ml

方法:a38℃左右

b涂抹粘片剂

c将蜡片置于玻片中央

d材料呈透明质感

e38℃烘烤至干燥

f标记

九、脱蜡

方法:二甲苯Ⅰ30分钟(40℃温箱中)

二甲苯Ⅱ10分钟

十、染色

（一）染料的分类

a来源：天然人工

b化学性质：碱性：番红酸性：固绿中性：

c性能：核染料：苏木精、番红细胞质染料：固绿、苯胺蓝细胞壁染料：番红组织化学染料；苏丹Ⅲ

荧光染料：

（二）几种常用染料的性质及配制

a苏木精：溶于酒精、甘油和热水中。

b番红：溶于酒精、水中。

c固绿：易溶于酒精。

d碱性品红：作为组化试剂，用于检验DNA、多糖物质等

（三）一般的染色方法

1材料是否完整:整体染色切片染色

2染料的种类:单染二重染色三重(多重)染色

（四）染色时注意的事项

1根据观察目的、样品的结构性质；

2溶液和染液的浓度相同；

3碱性染液先染，酸性染液后染；

4染色可深不可浅；

5染色的时间；

十一、封藏与封藏剂目的：1长期保存

2使材料可以清楚的显现出来封藏剂种类：

1树脂性封藏剂：香柏油、合成树脂、加拿大树胶：溶于二甲苯、氯仿等溶剂，熔点为61℃，不能加热，折光率近似玻璃，1.547。

2水溶性封藏剂：阿拉伯树胶、甘油、明胶、糖浆等。十二显微观察与照相石蜡法制片流程

步骤一：（整染）

取材——固定——脱水(70%酒精—85%酒精—95%酒精—100%酒精—100%酒精,每步2-4h)——透明（1/2二甲苯+1/2酒精，2h；纯二甲苯，2h）——低温浸蜡（加碎蜡至饱和，40℃，过夜）（一天）步骤二：继续低温浸蜡（40℃，过夜）——高温浸蜡（58℃，换纯蜡，每2h换蜡一次，不超过6h）——包埋（一个蜡船放3-4个材料）（一天）步骤三：修块——切片——粘片——展片——烘片（一天）

步骤四：脱蜡与染色：二甲苯Ⅰ（30分钟，40度温箱）——二甲苯Ⅱ（10分钟）——复水（1/2二甲苯+