【课件】2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件高二下学期生物人教版选择性必修3

植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新

运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同种植物之间生殖隔离的屏障，实现远缘杂交育种，培育出新的作物类型。

那么，有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞优势于一身的动物细胞呢？动物细胞融合技术二、动物细胞融合技术与单克隆抗体（一）动物细胞融合技术1.概念：2.原理：3.融合方法：4.意义：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。细胞膜的流动性PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。（化学法、

物理法、

生物法

）突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，特别是杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。与诱导植物原生质体融合的方法一样：P37动物细胞融合特有杂交细胞：具有原来两个或多个细胞的遗传信息相关信息：P48

灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，并不破坏它们的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理是：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合二、动物细胞融合技术与单克隆抗体（二）单克隆抗体及其应用1.早期获得抗体的方法：

向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。选择性必修1P68抗原不纯抗体不纯缺点：产量低、纯度低，特异性差。为解决这一难题，科学家进行了多年的研究和探索。2.科学家发现哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞，这些细胞能分泌抗体，抗体识别并特异性结合病原体，从而抑制病原体的增殖等。动物体内产生的特异性抗体种类超过百万种，但每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。因此，要想获得大量单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。

遗憾的是，在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的。如何解决这一难题？1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案：一种B淋巴细胞（只产生一种特定抗体）能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞融合杂交瘤细胞产生足够数量的特定抗体米尔斯坦科勒由于发明了单克隆抗体的制备技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖大量增殖单克隆抗体单克隆抗体：由单个B淋巴细胞经过克隆（无限增殖），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。注射特定的抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合（1）未融合的细胞（2）多种杂交细胞：①B-B细胞、②瘤-瘤细胞、③杂交瘤细胞动物细胞融合（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程：P48~49图2-16*不是为了得到抗体！第一次筛选：获得杂交瘤细胞原理细胞膜的流动性（1）未融合的细胞（2）多种杂交细胞（3种）杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）用特定的选择培养基第一次筛选克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）注射到小鼠腹腔内体外培养获取单克隆抗体从小鼠腹水中从细胞培养液中动物细胞培养✱杂交瘤细胞的特点:第二次筛选：获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞优点：能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备原理细胞增殖（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程：动物细胞融合（原理：细胞膜的流动性）

*不是为了得到抗体！第一次筛选：获得杂交瘤细胞

动物细胞培养（原理：细胞增殖）第二次筛选：获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞杂交瘤细胞的特点:优点：能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备未融合的亲本细胞两两融合的细胞融合的具有同种核的细胞融合的杂交瘤细胞B-B细胞瘤-瘤细胞只考虑两两融合，诱导融合之后，一定会得到所需杂交瘤细胞吗？思考1（二）单克隆抗体及其应用3.制备单克隆抗体的过程不一定第二次筛选的目的是获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞,那么如何筛选？思考2用96孔板培养和筛选杂交瘤细胞，（每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞），进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选就可获得。思考3选择抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞，抗体检测原理是什么？抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）阳性孔在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔多孔细胞培养板抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞补充内容：抗体检测方法（抗原-抗体杂交法）单克隆抗体筛选二杂交细胞杂交瘤细胞体外或体内培养筛选一骨髓瘤细胞

诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取已免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术小结：单克隆抗体的制备既能大量繁殖又能产生专一抗体特异性强灵敏度高可大量制备注射抗原现学现用：请用箭头把以下部分步骤的字母按正确顺序连接起来BAECGDHF4.单克隆抗体的应用抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。ADC的抗体和药物各具有什么作用？讨论14.单克隆抗体的应用可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗。除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？讨论24.单克隆抗体的应用单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高；生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？讨论34.单克隆抗体的应用（1）、广泛用作诊断试剂抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体4.