【课件】1.2微生物的培养技术及应用（第1课时）课件高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.1微生物的基本培养技术本节聚焦：1.什么是培养基？如何配制？2.什么是无菌技术?3.怎样进行酵母菌的纯培养?微生物:细菌原生生物

(草履虫、变形虫、衣藻等)真菌

(酵母菌、霉菌等)酵母菌青霉菌病毒（无细胞结构）禽流感病毒SARS病毒难以用肉眼观察的微小生物的统称。——原核生物——真核生物——真核生物草履虫衣藻球菌杆菌蓝细菌

向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？酸奶

应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。微生物的培养技术！！从社会中来在实验室培养微生物：①为微生物提供合适的营养和环境条件——培养基②确保其它微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。——无菌技术、微生物的纯培养一

微生物的培养技术

防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。培养基的配制人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。3.培养基类型：固体培养基液体培养基

（分离、计数、鉴定、保藏菌种等）（扩大培养、工业生产）2.培养基作用：培养、分离、鉴定、保存微生物或积累代谢物。长有菌落的固体培养基液体培养基一1.培养基概念：是否含凝固剂

（如琼脂）无有补充资料：培养基的类型及用途划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基培养基的配制一4.培养基的营养构成:（1）基本成分：水、碳源、氮源、无机盐。碳源无机碳源：有机碳源：氮源NH4＋、NO3-、NH3等。牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。CO2、CO32-、HCO3-葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等无机氮源：有机氮源：无机盐Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo等大量元素：微量元素：K、Ca、Mg等牛肉膏、蛋白胨：来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质——自养微生物——异养微生物为什么培养基需要氮源？

微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。培养基的配制一（2）特殊需求：满足微生物对

______________________的需求④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；③培养细菌时，需要将培养基调至___________；维生素酸性中性或弱碱性无氧

1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水pH、特殊营养物质、氧气培养基的配制一获得纯净的微生物培养物的关键：消毒灭菌定义常用方法对象使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。煮沸消毒法巴氏消毒法湿热灭菌干热灭菌法灼烧灭菌法无菌技术二防止杂菌污染（化学药剂消毒法、紫外线消毒法）对操作的空间、操作者的衣着和手微生物培养的器皿、接种工具、培养基芽孢:有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。如有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。孢子:细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞,能直接发育成新个体。消毒的方法：①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：不耐高温的液体：

62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min

（杀死牛奶中绝大多数微生物，且基本不会破坏牛奶的营养成分）

③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。④紫外线消毒法：接种室、接种箱、超净工作台，在使用前可用紫外线照射30min（杀死物体表面或空气中的微生物）阅读教材P11，回答以下问题无菌技术二超净工作台原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热

某些微生物的休眠体，基本保持培养基的营养成分不被破坏。

①湿热灭菌——高压蒸汽灭菌（效果最好）

高压蒸汽灭菌锅内，以水蒸气为介质，在压力为100kPa、

温度为121℃下维持15-30min高压蒸汽灭菌锅灭菌的方法：阅读教材P11，回答以下问题无菌技术二（理解）对象：培养基等干热灭菌箱对象：耐高温、需保持干燥的物品，如

玻璃器皿(如试管、培养皿、吸管、注射器)

金属器具(如镊子、剪刀、针头等)原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等②干热灭菌：干热灭菌箱，在160-170℃的热空气中维持2-3h

③灼烧灭菌：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对象：接种工具，如：涂布器、接种环、接种针或其他金属工具

接种过程中，试管口、瓶口等易被污染的部位无菌技术二涂布器接种环类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化生方法，杀死部分微生物强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂消毒生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线消毒紫外线照射30min灼烧灭菌接种工具、接种过程中的试管口、瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿、金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,以水蒸气为介质，在压力为100kPa、温度为121℃下维持15-30min接种室、接种箱、超净工作台无菌技术二小结还要注意：操作时：①避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触；②为了避免周围环境微生物污染，许多操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。无菌技术二由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。1.概念：2.步骤：①配制培养基②灭菌③接种④分离⑤培养微生物的纯培养三

在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体，成为培养物。分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。菌落：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。微生物群分散单个细胞单个菌落繁殖

酵母菌的纯培养原理：不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。探究·实践1．制备培养基配制培养基灭菌倒平板培养基：高压蒸汽灭菌:100kPa、121℃，15-30min培养皿：干热灭菌:160~170℃

，灭菌2h探究

·

实践

酵母菌的纯培养步骤：（酵母菌计算→称量→溶化→定容待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。将配好的培养基，转移到锥形瓶灭菌。——马铃薯琼脂培养基）防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；防止培养基中的水分过快蒸发。注意事项：①温度：50℃左右②操作：在超净工作台上，酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置

酵母菌的纯培养倒平板探究·实践通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离得到单个菌落（即由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体）。——平板划线法2．接种和分离酵母菌步骤：

酵母菌的纯培养12345探究·实践

酵母菌的纯培养平板划线法注意：接种环灼烧的次数和时机。探究·实践

酵母菌的纯培养平板划线法探究·实践2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？第一步灼烧接种环：每次划线前灼烧：划线操作结束时灼烧：杀死接种环上残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和感染操作者。避免接种环上可能存在的杂菌污染培养物。思考：

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？避免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条末端细菌的数目比起始处要少，从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落。①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次②每次划线都是从上一次划线的末端开始划线③最后一次划线不能与第一次划线相连④每次划线前接种环进行灭菌平板划线法注意事项:思考：若完成图示操作，接种环需灼烧灭菌了几次？完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h。结果分析与评价：1.未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？2.在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？3．培养酵母菌步骤：没有。

如果有，说明培养基被杂菌污染。原因：接种的菌种不纯、无菌操作不规范。

酵母菌的纯培养探究·实践思维训练评估论点的可信程度评估“水果酵素”的功效是否真实？P14阅读讨论【提示】所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质,食用后可能会危害人体健康。因此,“吃水果‘酵素’可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。一、概念检测1.微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（）

（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。（）（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（）2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？

×√×练习与应用干制腌制低温储存——可以降低食品的水分含量——通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖——通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖二、拓展应用1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。（1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有

。（2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？（3）从实验结果来看,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？练习与应用培养皿和培养基接种通过实验结果可以看到，洗手后手上还有