【课件】1.2微生物的培养技术和应用-微生物的基本培养技术-课件（人教版2019选择性必修3）

（第1课时）第2节微生物的培养技术和应用一、微生物的基本培养技术特点：个体微小,结构简单；繁殖快，适应性强；易变异微生物病毒细菌放线菌真菌原生动物

原核生物界

原生生物界真菌界病毒界一、微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称．图1-1常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌细菌自养菌:异养菌:腐生菌、寄生菌腐生菌以动植物尸体、腐败食物等作为营养物；寄生菌寄生于活体内，从宿主的有机物获得营养。所有的病原菌都是异养菌，大部分属寄生菌。光合自养型:光合细菌化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌细菌的同化作用类型细菌的异化作用类型需氧型：醋酸杆菌厌氧型：乳酸菌菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体.细菌的菌落特征因种而异菌落是鉴定菌种的重要依据

思考：我们曾经学过根据菌落来辨别细菌的例子！S型R型1.何为培养基？3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养构成？有何作用？请举例说明。阅读教材P9~10相关内容，回答以下问题：2.按照不同的划分标准，培养基有哪些类型及用途？（1）按物理性质分：固体培养基用于菌种分离、鉴定、计数液体培养基用于工业生产、连续培养半固体培养基用于菌种保存（2）按化学组成分：天然培养基用于工业生产合成培养基用于菌种分离、鉴定（3）按目的用途分：

选择培养基添加或缺少某种化学成分用于菌种分离

鉴别培养基添加某指示剂或化学药剂用于菌种鉴别2、培养基的类型及用途二、培养基及配制人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。1、概念选择培养基应用加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌不加氮源分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物只加尿素为唯一氮源的培养基分离尿素分解菌只加纤维素为唯一碳源的培养基分离纤维素分解菌大肠杆菌在伊红美蓝培养基（EMB培养基）：黑色光亮金属光泽鉴别培养四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈加了酚红指示剂的培养基，指示剂变红培养的基本配方（P83附录3

）不管哪种培养基，一般都含有_____、_____、____和____等营养物质,另外还需要满足微生物生长对

、

(例如:生长因子)以及

的要求。碳源氮源水无机盐pH特殊营养物质氧气分析营养构成？1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成凝固剂基本成分：3.培养基的营养成分碳源、氮源、水、无机盐特殊成分：生长因子营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等自养微生物异养微生物营养物质

定义

作用主要来源氮源生长因子凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等培养乳酸杆菌时在培养基中添加维生素4.配制原则⑴目的要明确：⑵营养要协调：⑶pH要适宜：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源细菌偏中性或微碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研培养基中各营养物质的浓度和比例要适宜。（第2课时）1.获得纯净培养物的关键？其保证是？2.什么是无菌技术？无菌技术包括哪些方面？其目的？3.什么是消毒和灭菌？两者有何区别？4.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？5.说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤？三、无菌技术阅读教材P10~11相关内容，回答以下问题：2.无菌技术的概念

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。1.获得纯净培养物的关键是，防止外来杂菌入侵的保证是。防止外来杂菌的入侵无菌技术无菌技术包括：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具、器皿、培养基灭菌实验操作过程，酒精灯火焰附近进行无菌技术目的：防止实验室的培养物被其它外来微生物污染；避免操作者被微生物感染。超净工作台实验操作时，避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。（1）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）3.消毒与灭菌的概念及两者的区别

（2）灭菌的定义：

使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。

芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。孢子细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：62-65℃下煮30min

或80-90℃处理30s-1min3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮

肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)消毒的方法：4.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧(2)灭菌的方法：2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。灭菌时保证热空气流通。常用方法：高压蒸汽灭菌3、湿热灭菌：利用沸水、流通蒸汽、高压蒸汽灭菌。

最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，100kPa、121℃下维持15-30min.它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。做好消毒或灭菌后，避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。为避免周围环境中微生物的污染，许多操作都应在

并在

附近进行。超净工作台酒精灯火焰判断以下需要哪种消毒或灭菌方法1.日常生活常用

。

2.对不耐高温的液体，用

。3.接种室、接种箱、超净工作台喷洒石炭酸或煤酚皂以增强

效果。4.操作者双手用酒精

。5.饮用水源用氯气等化学药物

。6.表面灭菌和空气灭菌用

。7.接种环、接种针、试管口用

。8.玻璃器皿、金属用具用

。9.培养基、无菌水用

。10.培养皿能否用高压蒸汽灭菌？11.实验结束后，使用后的培养基应进行

处理，才能扔掉。思考煮沸消毒法巴氏消毒法消毒消毒化学药剂消毒法紫外线消毒灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。灭菌（第3课时）四、微生物的纯培养

培养物：

将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体称为培养物。

纯培养物及纯培养：由单一个体繁殖所得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程称为纯培养。

纯培养步骤：配制培养基、灭菌、接种、分离、培养阅读教材P11相关内容，回答以下问题：探究实践：酵母菌的纯培养

阅读教材P12相关内容，回答以下问题：一、实验原理1.菌落：2.方法：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，即菌落。平板划线法和稀释涂布平板法采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。3.培养基：马铃薯琼脂培养基二、目的要求三、材料用具四、方法步骤1.制备培养基

配制培养基灭菌加琼脂的目的是什么?作为凝固剂调pHpH7.6（用0.1%的氢氧化钠或盐酸溶液把培养基调节到所要求的值）分装分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。倒平板

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。如果有菌落生长，说明培养基

。已被污染1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论

答：用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。31原理：2.接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。接种方法：平板划线法划3个平板1个不划线（重复实验）（空白对照）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。平板划线的操作方法讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。3.培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24-48h，分别观察记录结果。2.在接种酵母菌的培