完整微生物标本的正确采集运送

完整微生物标本的正确采集运送第一页，共七十页，2022年，8月28日临床细菌学检验流程标本

涂片培养

鉴定

药敏试验

发报告第二页，共七十页，2022年，8月28日细菌鉴定如何认识细菌？

形态学检查生物化学检查法免疫学检查法分子生物学检查法生物学检查法第三页，共七十页，2022年，8月28日细菌分类涂片镜检第四页，共七十页，2022年，8月28日临床标本的规范采集与处理是细菌学检验标准化的开始第五页，共七十页，2022年，8月28日标本采集原则

发现感染及时采集微生物标本作病原学检查采集的时间应在疾病早期、急性期和症状典型时，尽量在抗菌药物使用前采集标本标本采集时应严格执行无菌操作，必须从实际感染部位得到临床标本，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染必须取得足够量的标本，以满足培养的要求第六页，共七十页，2022年，8月28日标本采集原则

标本采集后立即送检，床旁接种可提高病原菌检出率盛标本的容器须用商品无菌盒或经灭菌处理，但不得使用消毒剂送检标本必须注明姓名、年龄、性别、取材部位、临床诊断和检验项目，以便实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物第七页，共七十页，2022年，8月28日血培养的范围（美国CUMITECH规定）病人体温：≥38℃≤36℃

WBC计数：≥10000≤1000以上四条任意一条符合，送血培养标本血液细菌培养（血培养）第八页，共七十页，2022年，8月28日血培养的范围（国内）不明原因的发热（大于38℃）或低温（小于36℃）寒战、休克、僵直严重的局部感染（脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染等）白细胞增多（特别有“核左移”,未成熟的或杆状核的白细胞）粒细胞减少血小板减少皮肤粘膜出血多器官衰竭CRP/PCT升高心率异常加快，低血压或者高血压，呼吸频率加快等第九页，共七十页，2022年，8月28日何时采集

抗菌药物治疗前开始出现寒战（寒战前或后）

当怀疑心内膜炎(出现低热)

严重的局部感染

第十页，共七十页，2022年，8月28日03060Time(min)Temp体温Chills寒战BloodCultures血培养BACTEREMIALEVEL菌血症的水平第十一页，共七十页，2022年，8月28日采血次数与间隔(1)急性感染患者:

立即分别从两臂采2份血样(2)感染性心内膜炎患者:24h内采血3次（6次），每次间隔不少于30分钟(3)发热原因不明患者:24h内再采血2（3）次，间隔不少于60分钟，如阴性应继续送检第十二页，共七十页，2022年，8月28日血循环中的细菌有“暂时性”、“持续性”一过性的菌血症，细菌仅在外周血中持续数秒共生菌、复数菌提高检出率、减少漏检，判断病原为何要多次采血？第十三页，共七十页，2022年，8月28日采血部位多次采血时，应在不同部位进行切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本避免由插管或导管取标本极易由表皮葡萄球菌造成污染消毒剂的作用时间！第十四页，共七十页，2022年，8月28日标本采集步骤第十五页，共七十页，2022年，8月28日第十六页，共七十页，2022年，8月28日第十七页，共七十页，2022年，8月28日血培养标本的运送要求和拒收标准第十八页，共七十页，2022年，8月28日采血量成年人采血量为10～20ml,婴幼儿为1～2ml，儿童3～5ml血液标本与培养基之比1:5-1:10为宜成人血液中含有的菌量<=10cfu/ml儿童血液中含有的菌量100～1000cfu/ml第十九页，共七十页，2022年，8月28日需氧瓶和厌氧瓶对常规血培养，建议采需氧和厌氧的一套血培养瓶当采血量不能满足推荐的血量时，需氧培养优先先注入哪个瓶？第二十页，共七十页，2022年，8月28日影响阳性标本检测的因素

绝对需氧菌苛养菌？1.细菌兼性厌氧菌生长因子X，V

微需氧菌维生素B6，K3

绝对厌氧菌第二十一页，共七十页，2022年，8月28日影响阳性标本检测的因素

高？２.血中细菌的浓度低？-成人：血中细菌1～30CFU/ml-儿童：血中细菌高于成人（100～1000CFU/ml或更高）第二十二页，共七十页，2022年，8月28日只含有1CFU/ml的菌血症的情况金黄色葡萄球菌：27%大肠埃希菌：62%铜绿假单胞菌：55%理论上讲，只要标本中有一个细菌系统就应该能检测出来，但实际上是很难做到的第二十三页，共七十页，2022年，8月28日影响阳性标本检测的因素

持续性3.血中细菌的存在情况周期性85%的败血症病人血液中细菌为周期性存在第二十四页，共七十页，2022年，8月28日影响阳性标本检测的因素4.标本的采集次数和采集量每增加1毫升血=增加3%的敏感度（由0.6%至4.7%)采血量与检出率的关系第二十五页，共七十页，2022年，8月28日每天1、2、或3次血培养对敏感度的影响

所以一般要求血培养一天做3次第二十六页，共七十页，2022年，8月28日血培养的阳性检出率低原因：A：抗菌药物抑菌B：采血时机、采血量C：细菌变异（L型细菌）D：培养基、培养环境不适合某些苛养菌的生长E：没有同时进行需氧和厌氧培养第二十七页，共七十页，2022年，8月28日血培养结果的解释

阳性

一次数次致病菌腐生菌相同细菌不同细菌金葡/β溶血链球菌丙酸杆菌/表葡菌/(免疫抑制/损伤)/布鲁菌/沙门菌/棒状杆菌/芽孢杆菌大肠/铜绿/嗜血/李斯特等

(脑膜炎,心内膜炎)（器官移植，硬化症）

(肺炎，肠炎等）（AIDS，严重烧伤）

菌血症

可能为污染

菌血症菌血症第二十八页，共七十页，2022年，8月28日阳性血培养结果的解释

阳性血培养标本中最常出现的致病菌(>90%)金黄色葡萄球菌大肠埃希菌其他肠杆菌科细菌铜绿假单胞菌肺炎链球菌白假丝酵母菌阳性血培养标本中罕见的病原菌(<5%)棒状杆菌芽孢杆菌疮疱丙酸杆菌第二十九页，共七十页，2022年，8月28日污染（皮肤污染菌）棒状杆菌属丙酸杆菌属芽孢杆菌凝固酶阴性葡萄球菌血培养中仅12%～15%的凝固酶阴性葡萄球菌具有临床意义第三十页，共七十页，2022年，8月28日血培养结果的解释

阴性

无菌血症临床症状

局部感染苛养菌标本采集抗生素治疗

周期性菌血症衣原体时间不对无效？

L-型菌

恢复重新采集标本第三十一页，共七十页，2022年，8月28日作好血培养的几点建议掌握采血时机严防标本污染采血足量保温、及时送检每次采血应同时做需氧和厌氧培养第三十二页，共七十页，2022年，8月28日菌血症的来源第三十三页，共七十页，2022年，8月28日血培养系统实用的其它标本腹膜透析液腹水胸水关节液骨髓羊水正常情况下无菌的体液……第三十四页，共七十页，2022年，8月28日导管相关性血流感染中心静脉导管、经外周中心静脉导管细菌比例：中心静脉导管：外周静脉血>5：1阳性出现时间：中心静脉导管所取血样培养出现阳性的时间比外周血早2小时以上第三十五页，共七十页，2022年，8月28日污染问题可接受的污染概率在2%以下，即便是最佳的标本采集流程也不能完全避免污染常见的污染细菌也可能是引起感染的病原菌很多情况下，可能的污染会来自一个或一套血培养瓶如果没有第二套血培养，要给出有疑问的培养结果的临床意义是几乎不可能的药敏试验对于污染菌是无需做的第三十六页，共七十页，2022年，8月28日第三十七页，共七十页，2022年，8月28日标准需氧瓶259789蓝色血和无菌体液10mlBacT/ALERTSA

BacT/ALERT3D120

血培养仪各种血瓶简介血瓶名称货号瓶盖颜色标本名称最佳标本量标准厌氧瓶259790紫色血和无菌体液10mlBacT/ALERTSN中和抗生素瓶259791浅绿色血和无菌体液10mlBacT/ALERTFA中和抗生素瓶259793橙色血和无菌体液10mlBacT/ALERTFA儿童培养瓶259794黄色血新生儿0.5—1ml2岁以下1----3mlBacT/ALERTPF2岁以上4ml痰结核培养瓶259797红色痰和无菌体液0.5mlBacT/ALERTMP血结核培养瓶251011黑色血和无菌体液3～5mlBacT/ALERTMB（259799）第三十八页，共七十页，2022年，8月28日浆膜腔积液包括胸水腹水心包液关节液鞘膜液等严格的无菌操作置无菌容器送检注意：对易自凝的标本可添加抗凝剂浆膜腔积液脑脊液标本的采集第三十九页，共七十页，2022年，8月28日严格无菌操作于无菌容器送检立即送检15min内自溶脑脊液疑似脑膜炎奈瑟菌时注意保温不可置冰箱第四十页，共七十页，2022年，8月28日尿液标本

应在用药前或停药3～5天后留取标本，并使尿液在膀胱内停留6～8h以上，早晨起床后第一次尿阳性率较高（睡前少饮水）

尿液是良好的培养基，尿液标本必须在2个小时内送检，于4℃中可保存18小时泌尿道感染、尿道感染：膀胱炎、（肾盂）肾炎、肾/膀胱结核第四十一页，共七十页，2022年，8月28日中段尿女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口男性必须翻转包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干后收集尿液第四十二页，共七十页，2022年，8月28日导尿管导尿优点减少污染留置导尿者用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿、留取无污染的膀胱内尿液数毫升送检不可从集尿袋的下端管口留取标本第四十三页，共七十页，2022年，8月28日送检标本以晨起第一次尿液为佳不能立即送检者，可暂存4℃冰箱室温耽搁稍久尿内细菌明显增多

影响病原菌与污染菌的区别第四十四页，共七十页，2022年，8月28日结果解释正常情况下从肾脏排泌至膀胱的尿液是无菌的，但膀胱中的尿液经尿道排出体外时可受到尿道中细菌污染，而出现细菌清洁中段尿标本中革兰阴性杆菌菌落计数>105CFU/ml革兰阳性球菌>104CFU/ml有诊断意义第四十五页，共七十页，2022年，8月28日标本来源菌落数CFU/ml结果评价清洁中段尿﹤1×1041～10×104(104-105)﹥105无意义，仅报告菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是混合菌生长。纯培养有意义（尤其是革兰阳性球菌生长），需进行细菌鉴定和药敏试验；混合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检。纯培养或混合菌生长都有意义，需进行细菌鉴定和药敏试验；4种以上细菌生长无意义，报告标本污染。导尿>1033种以内细菌生长都有意义，需进行细菌鉴定和药敏试验；4种以上细菌生长无意义，报告标本污染。耻骨上膀胱穿刺任意数目都有意义，所有细菌均需做细菌鉴定和药敏试验。不同方法采集的尿标本培养结果评价第四十六页，共七十页，2022年，8月28日痰标本留取质量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断，导致抗菌治疗失败，以及造成耐药菌的出现痰液标本的采集痰液是临床细菌学检验最常见的标本但不是下呼吸感染诊断的最佳标本第四十七页，共七十页，2022年，8月28日清水反复漱口，用力咳出呼吸道深部痰液置无菌容器痰量少者用雾化吸入导痰咳痰对于小儿可轻压胸骨柄上正方以诱导咯痰第四十八页，共七十页，2022年，8月28日咳痰乏力或昏迷的病人吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液纤维支气管镜直接在病灶部位采集但不可完全避免咽喉部正常菌群的

污染第四十九页，共七十页，2022年，8月28日双侧肺部感染伴人工气道（气管切开或气管插管）患者吸痰管经人工气道估插至肺支气管水平吸引第五十页，共七十页，2022年，8月28日重症、难治、或伴免疫抑制、或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染环甲膜经气管吸引经胸壁穿刺肺吸引经纤维支气管镜人工气道作防污染双套管毛刷人工气道防污染支气管肺泡灌洗第五十一页，共七十页，2022年，8月28日不能及时送检者暂存4℃冰箱室温搁置数小时定植菌呈过度生长第五十二页，共七十页，2022年，8月28日根据不同感染种类和病变特征采集不同标本尿道标本用生理盐水局部清洗，以无菌棉签插入尿道口1-2cm停留十余秒钟，轻轻旋转拭子推出，置无菌容器送检阴道糜烂溃疡者生理盐水清洗后用棉拭子擦取病灶边缘的分泌物生殖道标本的采集第五十三页，共七十页，2022年，8月28日阴道和宫颈口的分泌物须在窥阴器下用长棉拭采集子宫内分泌物须用无菌导管抽取，导管外套一层保护膜，插入子宫后再刺穿该膜予负压吸引，可减少阴道菌群污染女性盆腔脓肿应在阴道局部消毒后，由直肠子宫凹陷处进针抽取第五十四页，共七十页，2022年，8月28日无菌生理盐水擦洗病灶表面

用无菌棉拭取病灶深部的脓液和分泌物置无菌容器或运送培养基内送检对已破溃的脓肿瘘管则以无菌方法采取组织碎片伤口创面脓液的采集第五十五页，共七十页，2022年，8月28日用碘酒酒精消毒皮肤后无菌注射器抽取脓液送检也可于切开排脓时用无菌棉拭采样对未溃破的脓肿第五十六页，共七十页，2022年，8月28日排便后,挑取有脓液、粘液部分的粪便约2-3g（液状粪便则取絮状物）盛于无菌容器送检如为稀便,可直接收集1-2ml于无菌容器中,及时送检自然排便法标本需1小时内送检粪便标本的采集第五十七页，共七十页，2022年，8月28日肛拭采集对不易获取粪便患者将拭子前端用无菌甘油水湿润后插入肛门约4-5cm处，轻轻旋转擦取肠表面粘液后退出置无菌容器或运送培养基送检第五十八页，共七十页，2022年，8月28日病人清水嗽口后，由检查者将其舌外拉，使悬雍垂尽可能向外，棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧，反复擦拭数次，置于运送培养基或无菌容器送检注意：棉拭子应避免触及舌、口腔粘膜和唾液咽拭口腔拭子的采集第五十九页，共七十页，2022年，8月28日对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病用棉拭子在病灶部位擦拭数次即可第六十页，共七十页，2022年，8月28日不能床旁接种者将导管置含少量生理盐水的无菌试管内送检静脉导管的采集从病人体内拔出静脉插管用无菌技术剪去导管体外部分第六十一页，共七十页，2022年，8月28日厌氧菌检查厌氧菌是人体许多部位（如皮肤、口咽部、肠道和泌尿生殖道）正常菌群中的一部分，因此下列材料无需做厌氧培养：

（1）咽、鼻、尿道或直肠拭子（2）咳出的痰，通过支气管镜取的分泌物排出或导出的尿、粪及胃内容物第六十二页，共七十页，2022年，8月28日需厌氧培养的标本

《中华检验医学杂志》2000年第2期深部伤口或软组织脓肿的脓，特别是伴有恶臭或含有硫磺颗粒时可疑为气性坏疽或少见的严重产气或坏死性感染取得的组织粘膜部位的感染灶取得的材料从脑、肺、肝或其他器官的脓肿的材料无菌区感染灶的吸出液，包括血液、脑脊液、腹水、胸水、关节液等人或动物咬伤感染的材料变色的或置于紫外线下发荧光的渗出物可疑引起肉毒杆菌食物中毒的食物第六十三页，共七十页，2022年，8月28日为排除或尽量减少正常菌群中厌氧菌的污

染，用