第18章色层分离法

色层分离法的产生和发展2色层分离的有关术语3概述118色层分离法色层分离过程理论4各类不同分离机制的色层分离法介绍5层析的放大618.1概述色层分离是一组相关技术的总称，又叫色谱法、层离法、层析法等，是一种条件温和、能分离物化性能差别很小的一组化合物的重要分离技术。18.2色层分离法的产生和发展12沿革色层分离中的基本概念及其分类3色谱展开技术18.2.1沿革气相和液相特别是液相色层分离技术，如分配色谱、离子交换色谱、疏水色谱、凝胶色谱、亲和色谱等，已成为有机化学、生物化学、蛋白质等方面的一项重要分离技术。色层分离这一术语，最早应用于有色色素的离析并沿用至今。它是基于当含有被分离物质的料液渗滤通过由吸着剂粒子涂铺的层（薄层层析）或填充的管子（柱层析）时，对混合物各组分产生选择性的阻滞作用。18.2.2色层分离中的基本概念及其分类18.2.2色层分离中的基本概念及其分类18.2.2色层分离中的基本概念及其分类18.2.3色谱展开技术18.2.3色谱展开技术（１）洗脱分析法18.2.3色谱展开技术（２）前流分析法18.2.3色谱展开技术（３）顶替分析法18.2.3色谱展开技术18.3色层分离的有关术语12平衡关系局部平衡定律18.3.1平衡关系在色层分离过程中，所有的溶质都被同一流动速度的移动相运送，并且可逆地向固定相迁移，由于在固定相上面它们所消耗的时间不同，所以其总的迁移速率各不相同。通常溶质在固定相中的浓度是它在流动相中浓度的函数，一般认为：18.3.2局部平衡定律但是在给定温度下，可简化为：18.3.2局部平衡定律18.4色层分离过程理论12塔板理论色层分离的连续描述以下的假设是大多数塔板理论模型所共有的。①吸附过程是热力学上可逆的。②在相间，溶质的质量传递阻力可以忽略不计③洗脱液连续通过板，流出体积为Q④在相邻板之间它们没有返混。⑤平衡等温线是线性的（Kｄ＝常数）：⑥18.4.1塔板理论它的图解表示被称为是穿透曲线（图18.10）。（１）参数的估计———N的判定（２）等理论板高度的概念和效率（３）不平衡和区域扩展18.4.1塔板理论18.4.1塔板理论18.4.2色层分离的连续描述（１）平衡模型（２）速率理论18.4.2色层分离的连续描述18.5各类不同分离机制的色层分离法介绍12吸附色层分离法疏水作用色层分离法34金属螯合色层分离法共价作用色层分离法56聚焦色层分离法离子交换色层分离法18.5各类不同分离机制的色层分离法介绍910聚焦色层分离法离子交换色层分离法1112拟似移动床型色层分离法灌注色层分离法78凝胶过滤色层分离法正相与反相层析吸附色层分离法是利用吸附剂对组分的吸附能力的差别进行分离的，用来填充柱的物质包括无机吸附剂和有机吸附剂。18.5.1吸附色层分离法18.5.2疏水作用色层分离法（１）原理（２）首要条件（３）影响疏水作用的参数（４）在蛋白质分离、纯化上的应用18.5.3金属螯合色层分离法18.5.4共价作用色层分离法（１）简介（２）过程阶段（３）应用情况一是谷胱甘型二硫键层18.5.4共价作用色层分离法二是巯基丙基型二硫键层析剂18.5.5聚焦色层分离法（１）简介（２）过程原理

①蛋白质的等电点

②ｐＨ梯度的形成③聚焦效应18.5.5聚焦色层分离法18.5.5聚焦色层分离法18.5.6离子交换色层分离法（１）原理（２）特点（３）介质（４）洗脱方式（５）影响线性梯度洗脱分离特性的因素（６）应用它们的相态。18.5.6离子交换色层分离法18.5.6离子交换色层分离法18.5.6离子交换色层分离法18.5.7凝胶过滤色层分离法

18.5.7凝胶过滤色层分离法

（１）原理18.5.7凝胶过滤色层分离法

见教材（２）凝胶过滤介质及其选择18.5.7凝胶过滤色层分离法（３）应用18.5.8正相与反相层析（１）简介（２）反相层析对分离物要求①弱酸性、弱碱性化合物可调节ｐＨ使该化合物处于不解离状态。②两性物质可以加入反离子使之成为中性离子对，再进行层析。③有些离子，可以使它们先变成中性配合物，然后再层析，如金属离子。18.5.9亲和色层分离法（１）原理（２）亲和分离介质（３）应用亲和色谱分离介质的种类：①金属螯合介质；②小配体亲和分离介质；③颜料亲和分离介质；④抗体亲和分离介质；⑤外源凝集素亲和分离介质等多种。18.5.9亲和色层分离法18.5.9亲和色层分离法连续环状色谱法可用于蛋白质、氨基酸、糖类等生化物质的分离。18.5.10连续环状色层分离法拟似移动床型色层分离法是克服色层分离处理量小的另一种方法。18.5.11拟似移动床型色层分离法18.5.11拟似移动床型色层分离法18.5.12灌注色层分离法（１）灌注色层分离介质18.5.12灌注色层分离法（１）灌注色层分离介质18.5.12灌注色层分离法（１）灌注色层分离介质18.5.12灌注色层分离法（２）