《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》试题库

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》试题库题组11．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H4O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水[答案]A[解析]根据题意可知，该培养基中必须要有尿素，故可排除B、D；而培养基中必须含有有机物作为碳源，又可排除C，故只有A符合题意。2．某同学在101、102、103倍稀释液的平均菌落数为2760、295、和46，则菌落总数(个/mL)为()A．×104 B．×104C．×104 D．×104[答案]C3．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有()①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③ B．②③④C．①③④ D．①②③④[答案]A4．请选出下列正确的步骤()①土壤取样②称取10g土壤放入盛有90g无菌水的锥形瓶中③吸取进行平板涂布④依次稀释101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①→②→③→④ B．①→③→②→④C．①→④→②→③ D．①→②→④→③[答案]D5．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将他们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：A．制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液B．为了得到更加准确的结果，你选用________(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品C．适宜温度下培养结果分析：(1)测定的大肠杆菌数，再对应稀释倍数的106的培养基，得到以下几种统计结果，正确可信的是A．一个平板，统计的菌落数是23B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24C．三个平板，统计的菌落数是21、5和52，取平均值26D．四个平板，统计的菌落数是21、30、24和25，取平均值25(2)一同学在稀释倍数的106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为，那么每毫升样品中的菌落数是________。(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量比测得的数量________，因为________________________。(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________[答案]步骤B：稀释混合平板法。结果分析：(1)D(2)×108(3)多，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落。(4)不能；因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程。1．关于土壤取样的叙述错误的是()A．土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤[答案]C[解析]在土壤取样过程中，取样用的小铁铲和信封在使用前也要灭菌。2．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找()A．土壤中 B．海水中C．热泉中 D．冷库中[答案]C[解析]热泉中才可能有这种耐高温的酶。3．需要在火焰旁操作的有()①土壤取样②称取土壤③稀释土壤④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤ B．②③④⑤C．③④⑤ D．②③④[答案]D4．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹红Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂[答案]A[解析]以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。5．探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。实验原理农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。材料用具农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿，盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。方法步骤(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在________操作。(2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰________cm处。(3)涂布。按照107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布。每个稀释度下，无氮培养基至少涂布________个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布________个平板。(4)培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3d～4d。一般每隔________小时统计一次，选取________时的记录作为结果，这样可以防止________________________________________________________________。(5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在________的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是________。(稀释度是105)(6)预期结果。相等稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数________(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是_______________________________________________________。[答案](1)酒精灯火焰旁(2)1～2(3)31(4)24菌落数目稳定因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目(5)30～3005×107(6)多于无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存[解析]考查微生物的分离及计数。要分离自生固氮菌，采用选择培养基分离的方法，缺乏氮源的培养基可用来分离自生固氮微生物，而其他微生物因缺乏氮源不能生长。实验步骤一般是：配制无氮培养基→灭菌→倒平板→系列稀释→涂布平板→培养→观察并计数。实验中要注意无菌操作和设计对照等。题组21.将硝化细菌接种到下列培养基中,其中可以长出硝化细菌菌落的是()A.无氮培养基,试管密闭B.无氮培养基,试管口用棉塞塞住C.含氮培养基,试管密闭D.含氮培养基,试管口用棉塞塞住解析:硝化细菌需要氮源,因此培养硝化细菌需要含氮的培养基;硝化细菌是需氧型微生物,因此试管口用棉塞塞住以便于通气。答案:D2.下表资料表明在各种培养基中细菌的生长,S、C、M为简单培养基;U、V、X、Y、Z代表加入培养基的不同物质。该细菌不能合成()培养基生长状态S、C、M-S、C、M+V+Z-S、C、M+U+Y+S、C、M+Z+X-S、C、M+V+Y+S、C、M+U+X-S、C、M+Y+Z+ 解析:该细菌在简单培养基上不能生长,但只要在简单培养基中含有Y物质,细菌就能正常生长,因此该细菌无法合成Y物质。答案:C3.下列方法可以鉴定出分解尿素的细菌的是()A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B.以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂解析:分解尿素的细菌能分解尿素,产生氨,氨能使pH升高,酚红指示剂变红。答案:A4.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234,那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为mL)() 解析:根据计算方法“每克样品中的菌落数=(C÷V)×M”,则(234÷×106=×109。答案:B5.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()A.微生物培养前,需对培养基进行消毒B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析:微生物培养前,需对培养基进行灭菌,而不是消毒;测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法而一般不用活菌计数;分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在30~300的平板进行计数;分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源。答案:A6.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应时,用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触),将平板置于37℃条件下恒温培养3天,结果如图所示。从实验结果分析,下列叙述不正确的是()A.链霉素能阻止结核菌的生长B.链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒解析:由图可知,链霉素对伤寒菌没有抑制作用,因此不能用于治疗伤寒。答案:D7.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是()A.平板上的一个菌落就是一个细菌B.菌落中的细菌数是固定的C.此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D.此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同解析:用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌,但偶尔也能来自两个或多个细菌,所以此方法统计的菌落数可能比活菌的实际数偏小。答案:C8.统计菌落数目的方法有()①稀释涂布平板法②重量法③直接计数法④比浊法⑤生理指标法⑥膜过滤法A.①②③⑥ B.③④⑤⑥C.① D.①③解析:各种方法均可反映细菌数目的多少,但能形成菌落的只有稀释涂布平板法。答案:C9.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是()A.涂布了一个平板,统计的菌落数是230B.涂布了两个平板,统计的菌落数是215和260,取平均值238C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163D.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和250,取平均值233解析:在设计实验时,一定要涂布至少3个平板作为重复组,才能增强实验的说服力与准确性,所以A、B两项不正确。C项虽涂布了3个平板,但是,其中1个平板的计数结果与另两个相差太远,说明在操作过程中可能出现了错误,此时,不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案:D10.下列关于微生物培养和利用的叙述,不正确的是()A.利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数B.接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C.以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D.用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少解析:稀释涂布平板法既可以分离微生物,同时也可以对微生物进行计数。答案:A11.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述,其中错误的()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板B.取104,105,106倍的土壤稀释液和无菌水各mL,分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置,37℃恒温培养24~48hD.确定对照组无菌后,选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析:在细菌计数时,为保证结果准确,一般选择菌落数目在30~300的平板进行计数。答案:D12.幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:(1)在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp含有,它能以尿素为氮源;若有Hp,则菌落周围会出现色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是灭菌。A.高压蒸汽 B.紫外灯照射%酒精浸泡 D.过滤(3)步骤X表示。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液到培养基平面上。菌液稀释的目的是获得菌落。(4)在培养时,需将培养皿倒置并放在中。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将14C标记的分解为NH3和14CO2。解析:(1)幽门螺杆菌含有脲酶,能分解尿素为菌体提供氮源,因此在配制培养基时要加入尿素;加入酚红指示剂的目的是检验是否有Hp存在,若有Hp存在,它会分解尿素,培养基pH会升高,酚红指示剂将变红。(2)由于尿素在高温下会分解,所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。(3)在实验操作过程中要先灭菌、倒平板,再进行接种。接种时先将菌液稀释,以获得单菌落,再涂布到培养基平面上。(4)培养时需将培养皿倒置并放在恒温箱中培养,倒置培养的目的也是获得单一菌落。(5)如果人体感染了Hp,能将尿素分解为NH3和CO2,因而标记尿素中的C,可通过呼吸产物CO2来判断是否感染Hp。答案:(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱(5)尿素13.为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示,实验步骤如下图所示。请分析回答下面的问题。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂ggg1g10g15g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理。。(2)培养基中加入尿素的目的是筛选,这种培养基属于培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和,实验中需要振荡培养,目的是。(4)转为固体培养基时,常采用接种,获得单菌落后继续筛选。(5)实验结束后,使用过的培养基应该进行处理后,才能倒掉。解析:尿素是培养基中的唯一氮源,因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,pH升高,故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成红色;这种培养基属于选择培养基,可筛选目的菌。目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖。振荡培养的目的是提供氧气。固体培养基培养时的接种方法常用稀释涂布平板法或平板划线法。倒掉培养基之前应对其进行灭菌处理。答案:(1)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,pH升高,使酚红指示剂变为红色(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(或平板划线法)(5)灭菌14.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,①为土壤样品。请回答下列问题。(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入作为碳源,②中不同浓度碳源的培养基(A.影响;B.不影响)细菌的数量,如果要测定②中活细菌数量,常采用法。(2)④为对照,微生物在④中不生长,在⑤中生长,④与⑤培养基的主要区别在于;使用法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染?。解析:根据微生物对营养的需求,在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长,抑制或阻止其他杂菌生长的目的,然后再用稀释涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落,再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长,要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则,操作中要严格进行无菌操作。答案:(1)苯酚A稀释涂布平板(2)④的培养基没有加入苯酚作为碳源,⑤的培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板(或平板划线)防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌,接种环灭菌,接种过程无菌操作题组31．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符合。C没有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。2．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有(A)①尿素②有机氮化物③无机盐④有机碳化物⑤水⑥无机碳化物A．①③④⑤B．②③④⑤C．①③⑤⑥D．②③⑤⑥解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。3．关于土壤取样的叙述错误的是(C)A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤4．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是(D)A．活细胞数B．死细胞数C．菌落数D．细胞总数解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。5．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(A)①由于土样不同②由于培养基被污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(C)A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布三个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。7．请选出分离土壤细菌的正确操作步骤(C)①土壤取样②称取10g土壤，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取mL进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③解析：在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。8．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是(D)A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．如果得到了2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30～300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。9．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是(B)①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌A．①②B．①③C．②④D．③④解析：该实验是为了分离出能分解尿素的细菌，根据活菌计数法，计算出的是每克土壤样品中的菌株数。10．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时(D)A．葡萄糖在培养基中含量越多越好B．尿素在培养基中含量越少越好C．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为无机氮D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为有机氮解析：葡萄糖是微生物最常用的碳源，但在培养基中不能加入过多，否则，会使细胞无法吸水而死亡；尿素在培养基中可以作为氮源，要适量加入而非越少越好；同时尿素是分解菌的有机氮源，而不是无机氮源，在分解过程中，尿素会被尿素分解菌分解为氨。11．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到了能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。请分析回答下列问题。(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选__________，这种培养基属于__________培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的__________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量____________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量__________。(4)可采用__________的方法将“目的菌”接种到固体培养基上，通过__________法对“目的菌”的数量进行统计，通常需要对菌落数为__________的平板进行计数。(5)实验结束时，使用过的培养基应该进行__________处理后，才能倒掉。解析：(1)培养基中加入的磷酸盐、镁盐以及微量元素，不能作为碳源和氮源，可推测加入的化合物A提供微生物生存所需的碳源和氮源，这样可以筛选出能够降解化合物A的微生物，这种培养基为选择培养基。(2)化合物A提供氮源和碳源，振荡可以增加培养基中氧气的含量，说明该微生物的代谢类型为异养需氧型。(3)培养若干天应该向消耗化合物A的培养基中加入新的培养液连续培养，使“目的菌”的数量逐渐增多。(4)可采用稀释涂布平板法将“目的菌”接种到固体培养基上，通过计数平板中的菌落数推算出活菌的个数，通常应该对菌落数为30～300的平板进行计数，然后求其平均值作为活菌数。(5)实验结束后对所使用的培养基应该进行灭菌处理，防止污染环境和感染操作者本身。答案：(1)“目的菌”选择(2)化合物A异养需氧型(3)减少增加(4)稀释涂布平板活菌计数30～300(5)灭菌12．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数，请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是____________________________________________________________。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。(4)培养20h后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越____________。(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐________________细菌，这种培养基被称为________________。答案：(1)氮源(碳源不作要求)碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌(3)无菌水(4)多高(5)盐(或NaCl)选择培养基13．为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_________________________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_________________。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过________灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是________________________________________________________________。(3)示意图A和B中，__________________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的__________的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高__________的利用率。解析：(1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数：eq\f(C,V)×Meq\b\lc\(\rc\)(\a\vs4\al\co1(\f(接种计数结果平均值,接种体积)×稀释倍数))＝eq\f(38,mL)×100(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到菌落。(3)由题图可知B图为平板划线法接种的结果(菌落相对均匀分布)。(4)震荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；另外震荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格3．8×107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质题组41．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是()A．活细胞数B．死细胞数C．菌落数D．细胞总数解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。答案：D2．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有()①由于土样不同②由于培养基被污染③由于操作失误④没有设置对照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④答案：A3．关于土壤取样的叙述错误的是()A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤答案：C4．土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做实验()A．街道旁B．花盆中C．农田中D．菜园里解析：因为取样要在肥沃、湿润的土壤，农田土壤较硬且因喷洒农药，导致微生物种类少，而菜园有中落叶烂叶形成腐殖土，富含纤维素。答案：D5．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水答案：A6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是()A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布3个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。答案：C7．将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落(如下图)。某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用，下列哪个实验方案最合适()解析：本题的关键在于设计对照实验，要检验A、B两种抗生素的杀菌作用，则需要设计两个实验组，一个是菌液加抗生素A，另一组是菌液加抗生素B，为了更好观察实验效果，还需设置一个对照组，即只有菌液，不加抗生素。答案：C8．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是()。A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30～300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。答案：D9．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌A．①③B．②④C．①②D．③④解析：从土壤中分离出分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌株数＝(C/V)×M”进行推测。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)、M代表稀释倍数。答案：A10．在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除含尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于()A．空白对照B．自身对照C．相互对照D．条件对照解析：本实验甲组为实验组，乙组为对照组，给实验组某种处理，给对照组另一条件的处理，为条件对照。答案：D11．需要在火焰旁操作的有()A．土壤取样B．稀释土壤溶液C．涂布平板D．微生物的培养答案：BC12．下列关于微生物分离和培养的有关叙述，正确的是()A．微生物培养前，需对培养基进行消毒B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C．分离土壤中不同的微生物，要采用相同的稀释度D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在30～300间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。答案：BD13．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。答案：氮源(碳源不作要求)碳源无机盐水(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是____________________________________________________。答案：高压蒸汽灭菌(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于____________中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。答案：恒温培养箱无菌水(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越____________。答案：多高(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐________________细菌，这种培养基被称为________________。答案：盐(或NaCl)选择培养基14．下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：(注：自生固氮菌能以空气中的氮气为氮源)表1培养基的基本配方组分NaNO3KH2PO4KClMgSO4FeSO4蔗糖琼脂蒸馏水含量2g1gggg30g15g1000mL实验目的：略实验材料和用具：略实验方法和步骤：(1)接种。①接种前，准备好盛有上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。②取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。③将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿，将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环沾取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处。④接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。(2)培养。将接种的培养皿放入恒温箱内，在28～30℃的温度下培养3～4d。(3)观察。3～4d后，取出培养皿，仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液最初为无色透明，之后为乳白色，最后变为褐色。这表明含有自生固氮菌。(4)镜检：略该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出错误并改正。(至少三处)(1)错误：_____________________________________________________，应改为：_______________________________________________________。(2)错误：_________________________________________________________，应改为：__________________________________________________________。(3)错误：__________________________________________________________应改为：_________________________________________________________。解析：该实验在操作过程中，有如下需注意的地方：(1)本实验为自主固氮菌的分离实验，所以培养液中不应当再含有N元素；(2)在本实验操作中，应当严格做好无菌操作，所以应当使用无菌水，培养皿盖也不能放在桌面上；(3)实验步骤中没有标注实验内容，接种人的姓名和接种日期。答案：(1)培养基中含有NaNO3不含氮的钠盐(2)接种②中使用蒸馏水无菌水(3)接种③中将培养皿盖放在桌面上略微打开培养皿盖(4)接种④中未填写实验内容、接种人的姓名和接种日期并在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期(在接种步骤④后面加上)(任选三点填写)题组51.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()。A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B.以尿素为唯一氮源的培养基中加二苯胺试剂C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂解析:细菌合成的脲酶可以催化尿素分解形成氨。氨会使培养基的碱性增强,pH升高。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂变红,则说明该细菌能产生脲酶分解尿素。答案:A2.关于微生物的培养,下列叙述错误的是()。A.细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2dB.放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7dC.霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4dD.不同种类的微生物,一般需要相同的培养温度和培养时间解析:不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和时间。答案:D3.在培养基中加入尿素(唯一氮源),以分离出能分解尿素的细菌,这种加入尿素的培养基在功能上属于()。A.选择培养基 B.固体培养基C.液体培养基 D.半固体培养基解析:题中的培养基能分离出以尿素为唯一氮源的细菌,故从功能上讲是一种选择培养基。答案:A4.需要在火焰旁操作的有()。①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A.①②③④⑤ B.②③④⑤C.③④⑤ D.②③④解析:除了土壤取样和微生物的培养不便于在火焰旁进行外,其他均要在火焰旁进行,以防止杂菌污染。答案:D5.以下关于分解尿素的细菌的说法,正确的是()。A.能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B.以尿素作为唯一的碳源C.环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D.以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红解析:A项:酶具有专一性,分解尿素的细菌之所以能分解尿素是因为能合成分泌脲酶。B项:该菌能以葡萄糖作为碳源。C项:环境中含有大量的尿素对分解尿素的性状起了选择作用而非诱导作用。D项:该菌产生脲酶把尿素分解为氨后,使pH升高,酚红指示剂变红,但添加酸碱缓冲剂后,阻止了pH的升高,因此培养基不再使酚红指示剂变红。答案:D6.稀释涂布平板法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?()A.灭菌、灭菌 B.消毒、消毒C.灭菌、消毒 D.消毒、灭菌解析:消毒和灭菌是不同的。往往消毒比较温和,仅仅消灭危害健康的致病菌;而灭菌就比较强烈,如高压蒸汽、灼烧等,它是杀死一切菌。因此本题前者属消毒,后者属灭菌。答案:D7.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是()。A.菌落 B.细菌形态C.细菌体积 D.细菌结构解析:细菌个体非常小,不易直接观察,而不同细菌菌落的形态特征不同,且可用肉眼观察,常作为鉴定菌种的依据。答案:A8.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()。A.微生物培养前,需对培养基进行消毒B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一氮源解析:微生物培养前,需对培养基进行灭菌处理,要将所有微生物杀死;当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌;土壤中各类微生物的数量是不同的,为获得不同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地提供选择培养条件。答案:A9.测定土壤中不同微生物的数量,要选用不同倍数的稀释液进行平板培养,请选出培养细菌时所用的稀释倍数()。①102②103③104④105⑤106A.①②③ B.②③④C.③④⑤ D.①④⑤解析:土壤中细菌的数量非常多,一般选取的稀释倍数比较高。答案:C10.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应,用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触),将平板置于37℃条件下恒温培养3天,结果如下图所示。从实验结果分析,以下叙述不正确的是()。A.链霉素能阻止结核菌的生长B.链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒病人解析:从图中可以看出,这是含有链霉素的选择培养基,接种的3种细菌中,霍乱菌和结核菌都可以被杀灭,并且链霉素对结核菌杀灭的有效程度大于霍乱菌。而伤寒菌照常生长不受影响,所以选项D错误。答案:D11.下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法,错误的是()。A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以,为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同C.如果得到了3个或3个以上菌落数目在30~300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析:样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落在30~300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量,一般选用104、105和106倍的稀释液;测定放线菌的数量一般选用103、104和105倍的稀释液;测定真菌的数量,一般选用102、103和104倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,从而说明选择培养基的筛选作用。答案:D12.马丁培养基是实验室常用的培养基之一。下表为马丁培养基的化学成分,据此回答下列问题。成分含量成分含量KH2PO4·3H2Og葡萄糖1gMgSO4·7H2Og蛋白胨g%孟加拉红溶液mL琼脂~2g2%去氧胆酸钠溶液2mLH2O100mL链霉素溶液(1×104μ/mL)mL—(1)该培养基中加入了链霉素,能抑制细菌和放线菌,但真菌可以在上面生长,因此培养基是一种培养基。(2)葡萄糖能给微生物生长提供和。(3)蛋白胨能给微生物生长提供和。(4)培养基中KH2PO4·3H2O可给微生物提供含的无机盐。(5)琼脂的作用是作为。解析:链霉素能抑制细菌和放线菌生长,真菌可以在上面生长,因此该培养基是一种选择培养基。葡萄糖是一种含碳的有机物,既可给微生物提供碳源,又可给微生物提供能源。该培养基蛋白胨可以给微生物提供氮源和维生素。答案:(1)选择(2)碳源能源(3)氮源维生素(4)K、P(5)凝固剂13.探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数。实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖。材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。方法步骤:(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在操作。(2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL,转至9mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰cm处。(3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布个平板。(4)培养。放入恒温箱内,在适宜温度条件下培养3~4d。一般每隔h统计一次,选取时的记录作为结果,这样可以防止。(5)细菌的计数。当菌落数目稳定时,选取菌落数在的平板进行计数。如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌株数是。(稀释度是105)(6)预期结果。相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是。解析:要分离自生固氮菌,采用选择培养基分离的方法,缺乏氮源的培养基可用来分离自生固氮微生物,而其他微生物因缺乏氮源不能生长。实验步骤一般是:配制无氮培养基→灭菌→倒平板→系列稀释→涂布平板→培养→观察并计数。实验中要注意无菌操作和设计对照等。答案:(1)酒精灯火焰旁(2)1~2(3)31(4)24菌落数目稳定因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目(5)30~3005×107(6)多于无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存14.某化工厂的污水池中,含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功地筛选到了能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。请分析回答下列问题。(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选,这种培养基属于培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的,实验需要振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是。(3)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量的培养液,接入新的培养液中连续培养,使“目的菌”的数量。(4)可采用的方法将“目的菌”接种到固体培养基上,通过法对“目的菌”的数量进行统计,通常需要对菌落数为的平板进行计数。(5)实验结束时,使用过的培养基应该进行处理后,才能倒掉。解析:(1)培养基中加入的磷酸盐、镁盐以及微量元素,不能作为碳源和氮源,可推测加入的化合物A提供微生物生存所需的碳源和氮源,这样可以筛选出能够降解化合物A的微生物,这种培养基为选择培养基。(2)化合物A提供氮源和碳源,振荡可以增加培养基中氧气的含量,说明该微生物的代谢类型为异养需氧型。(3)培养若干天应该向消耗化合物A的培养基中加入新的培养液连续培养,使“目的菌”的数量逐渐增多。(4)可采用稀释涂布平板法将“目的菌”接种到固体培养基上,通过计数平板中的菌落数推算出活菌的个数,通常应该对菌落数为30~300的平板进行计数,然后求其平均值作为活菌数。(5)实验结束后对所使用的培养基应该进行灭菌处理,防止污染环境和感染操作者本身。答案:(1)“目的菌”选择(2)化合物A异养需氧型(3)减少增加(4)稀释涂布平板活菌计数30~300(5)灭菌题组61.在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用只含尿素作氮源的培养基，乙组实验用另加入硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于（）。A．空白对照B．标准对照C．相互对照D．条件对照2.下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（）A.分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源B.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配置和纯化大肠杆菌两个阶段C．平板划线接种法中划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连D．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养3.若将酵母菌的线粒体DNA进行诱变，使其线粒体DNA不再具有自我复制能力，再将此突变的酵母菌接种在含有葡萄糖的培养基上培养，可观察到的现象是（）A．因为子代中没有线粒体，所以无菌落形成B．酵母菌仍能进行有机物的氧化分解，所以有小菌落形成C．因为线粒体DNA对真核细胞不重要，所以有正常大小的菌落形成D．因为酵母菌对糖类的彻底氧化分解可不依赖线粒体，所以有正常大小的菌落形成4.下列关于生物技术实践的说法正确的是（）A．蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度较慢B．细菌能在液体培养基中以有丝分裂方式扩增C．自养微生物能在缺少有机碳源的培养基上生长D．参与果酒和果醋发酵的微生物都含有多种细胞器5.下列关于微生物的培养和应用的叙述，错误的是（）A．通过消毒不能杀死物体内所有的微生物B．根据培养皿中菌落数可以准确计算样品中含有的活菌实际数目C．平板划线法不可用于微生物的计数D．使用过的培养基及培养物必须经过灭菌后才能丢弃6.鉴定分解纤维素的微生物要用刚果红染色，加入刚果红的操作可在（）①制备培养基时②梯度稀释时③倒平板时④涂布时⑤培养基上长出菌落时A．①③B．②⑤C．③⑤D．④⑤7.测定饮用水中大肠杆菌的数目可用()A.选择培养基B.鉴别培养基C.基础培养基D.加富培养基8.下列几个图形中（数字代表划线区域顺序，箭头代表划线方向），正确的平板划线操作是（）ABCD9.消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀A．①②③⑧⑨B．④⑤⑥⑦⑩C．①②③④⑤⑥⑧D．以上全部10.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，在培养基中加入青霉素可抑制细菌和放线菌的生长，在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分离出()A.大肠杆菌B.霉菌C.放线菌D.固氮细菌11.下表为某微生物培养基的配方，请回答成分含量成分含量NaNO33gFeSO4gK2HPO41g(CH2O)30g琼脂15gH2O1000mLMgSO4·7H2Og青霉素万单位(1)该培养基中的碳源是，依用途划分，该培养基属于培养基。不论何种培养基，各成分在溶化分装前，要进行的是。(2)若用该培养基培养尿素分解菌，应除去的物质是，加入的物质是。(3)为检测尿素分解菌的存在与否，还应加入，将呈反应。(4)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异来源是。12.人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有（答2种）．（2）采用法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养．在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在旁进行操作．接种后的培养皿于37℃的恒温箱中培养．（3）用培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于培养基．若培养基中存在有脲酶的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力．（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数．A．多B．少C．相等D．几乎为零．参考答案1.【答案】D【解析】甲、乙组的自变量为是否仅以尿素作为培养基的氮源，因变量为是否特异性地分离出分解尿素的细菌，甲组为实验组，乙虽然对培养基作了特殊的处理（另加入硝酸盐），但这种处理起对照作用，叫条件对照。2.【答案】B【解析】3.【答案】B【解析】4.【答案】C【解析】5.【答案】B【解析】6.【答案】C【解析】7.【答案】B【解析】将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。伊红美蓝培养基为鉴别培养基。8.【答案】C【解析】9.【答案】A【解析】10.【答案】A【解析】固氮微生物的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身产物。11.【答案】(1)(CH2O)选择调整pH(2)青霉素和NaNO3尿素(3)酚红指示剂红色(4)基因突变【解析】12.【答案】（1）接种工具和培养基高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌（2）稀释涂布平板法酒精灯火焰旁倒置（3）鉴别氨越强（4）B【解析】（1）用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等都必须是无菌的；常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌．（2）采用稀释涂布平板法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养；为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，培养皿需要倒置在恒温培养箱中培养．（3）酚红指示剂可用于鉴别微生物，所以含有酚红指示剂的培养基属于鉴别培养基；尿素被分解成氨可使PH呈碱性，变色区域越大，说明其分解能力越强．（4）以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．题组71．除了高温加热以外，其它灭菌方法还有()。A．紫外线照射 B．真空包装C．用保鲜膜密闭 D．添加防腐剂解析此题考查灭菌的方法。灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。本题中真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用，紫外线照射使细菌的蛋白质变性，核酸受破坏，是灭菌方法。答案A2．可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()。A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂解析尿素在尿素分解菌的作用下分解产生氨和CO2，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，酚红指示剂变红。答案A3．下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是()。A．微生物培养前，需对培养基进行消毒B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落在30～300间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。答案A4．下列说法错误的是()。A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约占70%～90%，其次是放线菌，最少是真菌，所以为获得不同类型的微生物，再按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到两个或两个以上的菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。答案C5．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题。(1)分离培养细菌时必须进行无菌操作，灭菌要求杀死体内外所有微生物，包括________和________。(2)虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、________________________________。(3)要将土壤样品进行________操作，然后再进行接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在________旁进行操作。接种后的培养皿__________于37摄氏度的恒温箱中培养。(4)用____________________培养基筛选出分解尿素细菌，从功能上划分该培养基属于________培养基。(5)与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数________。 A．多 B．少C．相等 D．几乎为零答案(1)芽孢孢子(2)氮源、碳源、无机盐、生长因子(3)系列稀释酒精灯火焰倒置(4)用尿素作为唯一氮源选择(5)B课堂小结题组81．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做()。A．鉴别培养基 B．加富培养基C．选择培养基 D．基础培养基解析选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。答案C2．平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是 ()。A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D．都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。答案D3．本课题以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是()。①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌A．①③B．②④C．①②D．③④解析从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌，用公式“每克样品中菌落数＝(C/V)×M”进行推测，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL，M代表稀释倍数。答案A4．下列关于土壤取样的叙述，错误的是()。A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3～8cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤解析土壤取样过程中，为防止杂菌污染，取样用的小铁铲和信封在使用前必须灭菌。答案C5．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()。A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案D6．(10分)如表所示为分离分解尿素的细菌所用的培养基配方：KH2PO4gNa2HPO4gMgSO4·7H2Og葡萄糖g尿素g琼脂g自来水定容至1000mL请根据以上配方，回答下列问题。(1)该培养基含有微生物所需要的________类营养物质。其中最主要的碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)该培养基按物理性质划分是________培养基；按培养基的作用划分是选择培养基，该培养基具有选择作用的原因是________________________________________________________________________。(3)在该培养基中，可通过检测pH的变化来判断尿素是否被分解，依据的原理是_________________________________________________________________________________________________________________________。(4)若用该培养基来鉴定某种细菌是否能够分解尿素，可在培养基中加入________指示剂，尿素被分解后指示剂变________色。(5)某同学尝试使用罐头瓶在常温下制作果酒，开始时向消过毒的罐头瓶中加入了新鲜的葡萄汁和酵母菌，添加酵母菌的原因是________________________________________________________________________，添加葡萄汁的目的是为酵母菌的生长发育提供_____________________。答案(1)4(2)固体该培养基中唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长和繁殖(3)在细菌分解尿素的过程中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高(4)酚红红(5)酵母菌能分解葡萄糖形成酒精(或酵母菌进行无氧呼吸产生酒精)所需的各种营养物质(或碳源、氮源、水、无机盐和生长因子)7．(10分)急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题。(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为__________________。如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是______。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？______。为什么？______________________________________________________________。(3)如分别取mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为______。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？_____________________________