药学微生物 项目三 镜检技术2

镜检技术——光学显微镜一、显微镜显微镜光学显微镜：可见光作为光源电子显微镜：电子束作为光源显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器，是人类进入原子时代的标志。根据光源不同，显微镜分光学显微镜和电子显微镜暗视野显微镜相位差显微镜视频显微镜荧光显微镜体式显微镜倒置显微镜等投射电子显微镜扫描电子显微镜放大及分辨本领高于光学显微镜房间里的灰尘蝴蝶的翅膀香烟过滤嘴纤维表面的烟雾粒子打结的头发伽利略改良了詹森父子的显微镜英国科学家胡克自制显微镜观察细小物体，1665年出版《显微图谱》引入“细胞”第一架显微镜是荷兰眼镜工匠詹森父子在1590年前后制成的显微镜发展过程1878年德国物理学家阿贝现代光学显微镜，放大2000倍左右20世纪30年代第一架电子显微镜放大200万倍左右。一、光学显微镜构造显微镜机械部分光学部分目镜物镜聚光器反光镜镜臂镜筒转换器调节器载物台镜座光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。1234567810111291、目镜2、粗准焦螺旋3、细准焦螺旋4、镜臂5、物镜6、镜柱7、镜座8、镜筒9、压片夹10、载物台11、遮光器12、反光镜显微镜的光学系统光学系统物镜目镜聚光器光阑放大微小的物体或微细的结构，形成倒立实像把像投射到目镜光阑处放大物镜映来的已放大的倒立实像校正物镜余留下来的像差将物像投射到一定的位置上，便于放映或照相使来自光源的光线放大，聚成光束，透过载片照明样品，射入物镜显微镜的光学系统---物镜显微镜的质量主要取决于物镜/价格昂贵物镜的种类根据前透镜与盖玻片之间介质的不同干燥系物镜水浸系物镜油浸系物镜物镜与盖片之间不加任何液体4，10，20，40水浸物镜刻有“W”或“Water”字样水浸两用物镜刻有“Oil+w”字样油浸物镜刻有“oil或oel或imm”和“HI”字样甘油浸物镜刻有“Glyc”或Glyz”字样物镜镜头低倍镜1一般放大倍数为10倍，空气做光学介质高倍镜2一般放大倍数为100倍，空气做光学介质油镜3香柏油做光学介质，放大倍数最大物镜上数字和符号意义（P25）S40：S--弹簧物镜；40：放大倍数。40倍100倍等高倍物镜工作距离小，成像时离物体表面近，都做成弹簧物镜。A.0.65或N.A.1.65：物镜数值孔径，孔径越大分辨率越强。160：镜筒机械长度（mm）。0.17：所用盖玻片最大厚度（mm）。目镜1.目镜：直插式：长度和放大倍数成

。2.物镜：螺旋式：长度和放大倍数成

。特别说明：放大倍数和物镜与盖玻片之间的距离成

。反比正比反比目镜与物镜的比较镜头镜头长短视野亮度物像大小细胞数目镜低倍高倍物镜低倍高倍长亮小多短暗大少短亮小多长暗大少如图6-4中①、②表示物镜长度，③、④表示目镜长度，⑤、⑥表示物镜与玻片的距离，获得最大物像时正确的组合为()A、①③⑤B、②④⑥C、①④⑥D、②③⑤D二、工作原理1.几个重要的分辨率人眼：0.2mm光学显微镜：0.2um电子显微镜：0.2nm2.工作原理折射和折射率A凸透镜的五种成象规律B显微镜的成像原理C油镜工作原理D2.1凸透镜的五种成象规律当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在象方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实象；

当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在象方二倍焦距上形成同样大小的倒立实象；当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在象方二倍焦距以外形成放大的倒立实象；

当物体位于透镜物方焦点上时，则象方不能成象；当物体位于透镜物方焦点以内时，则象方也无象的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚象。2.2油镜工作原理显微镜使用时加入香柏油充填镜头和标本之间孔隙，香柏油折射率为1.51，大于空气折射1.0，因此使通过折射损失的光线减少，视野明亮，便于观察。显微镜成上下颠倒左右相反的像。

标本放大倍数=物镜放大倍数×目镜放大倍数低倍镜：放大倍数小，通光量多，视野亮；高倍镜：和低倍镜正好相反2.3放大倍数该放大倍数指的是长度或宽度，而不是面积和体积。82644除以扩大的倍数（4）除以扩大的倍数的平方（42）细胞单行排列细胞均匀分布

放大倍数变大视野中细胞数目变少有两种情况：,10x1010x40

扩大4倍2.4相关概念视野：是指一次所能观察的被测标本的范围。镜像亮度：视野里所看到的像的亮暗程度。它与放大倍数成反比，即在光源一定的情况下，放大倍数越大，视野越暗。视野的大小与放大倍数成反比，即放大倍数越大视野越小，看到的标本范围就越小。玻片移，污点移，则污点在玻片上A物镜换，污点移，则污点在物镜上B目镜转，污点移，则污点在目镜上C2.5注意事项

二、显微镜使用(视频观看)取镜和安放打开电源、拿取载玻片观察（从低倍镜到高倍镜到油镜）整理与存放一、取镜和安放右手握住镜臂，左手托住镜座把显微镜放在实验台距边缘5厘米左右处，略偏左，安装好目镜、物镜二、打开电源、放片C1-2滴香柏油D过多会溢出弄脏载物台E损坏镜头A电源和光源是同一个键B放片时避免手指接触中央染色处三、观察粗调时注意调整手势，不要碰到微调旋钮调到最高处不要继续旋转、易毁坏镜头、且香柏油进入镜头内太多难以清洗缓慢旋转注意事项用油镜观察后，取下玻片时，应先使物镜离开油镜后再取出。可用推进器前后左右调整观察对象位置。四、整理与存放观察完毕，先提升镜筒，取下玻片标本;用纱布将显微镜外表擦拭干净;取下目镜镜头清洗（三步：擦镜纸擦、二甲苯清洗、擦镜纸擦），载玻片用擦镜纸擦拭干净;将显微镜放回原处.归纳小结：一、取镜和安放右手握、左手托二、对光（1）低倍物镜对准通光孔。（2）左眼看，右眼睁。（3）转动反光镜，看到明亮的视野。三、观察（1）

标本放在载物台上，压住，正对通光孔。（2）

眼看物镜，镜筒下降，直到接近标本。（3）

左眼注视目镜，镜筒缓缓上升，直到看清物像.巩固练习：1.使用显微镜时，取镜要用一手__________，一手__________，。2.对光时，转动转换器，使____倍镜对准_________，转动遮光器，使一个较大的________也对准__________。用____眼朝_______里注视，____眼睁开，然后用手调节_________，直到看到明亮的视野为止。握镜臂托住镜座通光孔光圈通光孔左目镜右反光镜低3、转动___准焦螺旋，使镜筒_______下降，直到物镜接近玻片标本。4、为什么此时眼睛一定要看着物镜？因为__________________________5、____时针方向转动____准焦螺旋，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止。再略微转动____准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。6、如果物像偏左，你应将标本向_____移，才能使物像居中。粗缓慢要防止物镜碰到玻片标本逆粗细左7.有一台显微镜，它有两个目镜和两个物镜，目镜的放大倍数分别为5×和15×，物镜的放大倍数分别为10×和40×。请问，这台显微镜的最大放大倍数是_______，最小的放大倍数_______。假如现在观察一个标本，需要放大150×，应该选用的目镜为__________，物镜为_______。8.用下列四组镜头看同一块血液的玻片标本，其中可以看到血细胞数目最多的一组为（）A.目镜——5×，物镜——10×B.目镜——5×，物镜——40×C.目镜——10×，物镜——10×D.目镜——10×，物镜——40×600501510A9.在载玻片上写下一个小小的字母“d”，用显微镜观察时，会看到放大的图像形状是()b B.d C.q D.p10.显微镜放大倍数的计算方法是()A.以目镜倍数为准B.以物镜倍数为准C.目镜与物镜倍数的乘积D.目镜与物镜倍数之和DC12.遮光器上光圈的作用是()A.调节焦距B.调节光亮度C.调节光线角度D.调节图像清晰度13.观察同一材料的同一部位时，高倍物镜与低倍物镜相比，其（）

A、物像小、视野亮，看到的细胞数目多

B、物像小、视野暗，看到的细胞数目少

C、物像大、视野暗，看到的细胞数目少

D、物像大、视野亮，看到的细胞数目多

14.当显