电化学发光测定血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽的分析性能评价

电化学发光测定血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽的分析性能评价甘洁民;缪应新;张蓉;施泓【摘要】ObjectiveToevaluateautomatedelectrochemiluminescencesystemforassayofserumtotalN-terminalpropep-tideoftypeIcollagen(tP1NP)andestablishthereferencevalueinourlaboratory.MethodsSerumtP1NPwasmeasuredonElec-sys2010automatedanalyzer(Roche).Thebetween-runcoefficientofvariation(CV)wascalculatedwiththetestedvaluesofhighandlowlevercontrols.Thefunctionalsensitivitywasanalyzedwithaseriestestedresultsoflowleverserum.Theanalyticmeasure-mentrange(AMR)wasdeterminedwiththeresultsofmixedserum.ThereferencerangeofserumtP1NPinourlaboratorywases-tablishedwiththedetectedresultsof138normalsubjects.ResultsThebetween-runCVswere4.7%and2.4%.Thefunctionalsensitivitywas6.60ng/ml.AMRwas6.8~1020.2ng/ml.Thereferencerangewas17.8~55.8ng/ml.ConclusionTheECLIAmethodhasgoodperformancefordetectingtP1NPlevel.%目的：按美国病理家学会(CAP)的要I(tP1NP)的各项分析性220610d,138tP1NP，建立本实验室的参考范围。结CV4.72.46.60ng/ml；分析验证测量范围(AMR6.8~1020.2ng/mltP1NP17.8～55.8ml。结论用电化学发光免疫法测定血清I型前胶原氨基端前肽，灵敏度高，稳定性好,本系统的各项性能符合CAP要求。【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】3页(P389-391)【关键词】血清I型前胶原氨基端前肽(tP1NP);电化学发光免疫;方法学评价【作者】甘洁民;缪应新;张蓉;施泓【作者单位】复旦大学附属华东医院，上海200040;复旦大学附属华东医院，上海200040;复旦大学附属华东医院，上海200040;复旦大学附属华东医院，上海200040【正文语种】中文【中图分类】R446.62Ⅰ型胶原是骨的重要蛋白，是骨有机质的主要成分，约占骨基质的90%，由两条α1链及一条α2链构成的异三聚体，其中编码α1链基因为COLIA1，α2链为COLIA2，两种多肽链以2：1合成。Ⅰ型前胶原氨基端前肽(N-terminalpropeptideoftypeⅠprocollagen，tP1NP)1tP1NPPICP(procollagentypeIC-terminalpropeptide,Ⅰ型前胶原羧基端前肽)，它们是沉集于基质之前所释放出的物质，是各自从未成熟胶原释放的(在Ⅰ型胶原合成增殖期)，两者可反映Ⅰ型胶原形成速率。当成骨细胞活性增强时，前胶原合成增多，tP1NP在血液中浓度增高[1]。目前国内大多用酶联免疫法测定，本文采用罗氏公司近几年推出的产品测定血清tP1NP，并作初步的临床评价。为了提高检验质量，国际标准化组织(ISO)颁布了《医学实验室质量和能力的专用要求》(ISO15189)作为医学实验室认可的标准，要求申请认可的实验室应对检测系统和方法的主要分析性能进行验证或确认[2]，证实其能够达到所要求的性能标准。另外美国病理家学会(CAP)也要求申请认可的实验室，在开展某一检测项目前，必须对检测系统进行方法学评价和建立本实验室的参考区间，因此本文对罗氏Elecsys2010系统进行TP1NP检测的方法学评价，并对138例健康体检者进行tP1NP的检测，建立本实验室的参考范围。对象对照组：13830～707068BMDT-score＞-2.5。疾病组：均系明确诊断为18712340～78BMDT-score＜-2.5；甲状腺功能亢进组:2235～70岁；肾功能不全组:22例，年龄40～69岁；肿瘤骨转移组:9例，年龄42～68岁；变形性骨炎组：1例，年龄68岁；肝纤维化组：10例，年龄40～78岁。上述对象用含促凝剂的真空采血管采血3ml,3h内离心，直接上机检测。试剂和仪器电化学发光免疫法测定血清I(tP1NP)，仪器Elecsys2010方法电化学发光免疫法，其原理是双抗体夹心法待测样品中的血清I基端前肽(tP1NP)、钌标记的单克隆tP1NP抗体和包被抗体的磁性微珠充分反应，形成钌-抗体-抗原-抗体-微珠复合物。被磁性微珠捕获的钌在磁铁的作用下被吸附，並被激发电压激发，发生电化学发光反应，最后产生的光强度与钌的浓度呈线性关系，据此测出血清I型前胶原氨基端前肽(tP1NP)的含量。178227，浓度：75.4ng/ml)和高值(批号：178227，浓度：704ng/ml)220(2)准确度验证：用批号为178226-01610d1x﹑sCVCV20%(4)分析测量范围3：1﹑2：2﹑1：3354tP1NP，以理论值与测试值作回归分析。SPSSx±st220CV4.7%2.4%1)。21.4%～5.2%范围，达到11.9%)。2.313.26﹑11.18﹑9.32﹑8.46﹑7.49﹑6.62ng/ml4.14%﹑7.25%﹑10.12%﹑13.26%﹑17.09%﹑20.08%,CV20%时对应的tP1NP浓度为6.62ng/ml，为tP1NP检测的功能灵敏度。2.4分析测量范围理论值为1202.2﹑903.4﹑604.5﹑320.9和6.8ng/ml的样品，其检测值分别为1202.2﹑872.3﹑591.8﹑308.5和6.8ng/ml,回归方程为Y=0.990X-7.354,r2=0.999。按b=1.00±0.05,r＞0.975为判断标准，本次评估符合要求，本检测系统的AMR在6.8～1020.2ng/ml。(ng/ml)tP1NP36.8±9.7，x±1.96s95%的数据范围，则参考区间为17.8～55.8ng/ml。I(tP1NP)测定值各疾病组与对照组比均有显著差异。升高最明显的是异位甲状旁腺腺瘤，与其它各疾病组有非常显著的差异。其次是甲亢组，与其它各疾病组有非常显著的差异。见表2。美国病理家学会(CAP)要求申请认可的实验室，在开展某一检测项目前，必须对检2006分析性能进行评价，才可将分析系统用于常规工作。本研究对罗氏Elecsys2010I(tP1NP)的各项分析性的验证方法。25%，是构成胶原纤维的基本IN-MIN酶等，两者都有其局限性，前者受肾功能和药物影响较大[3]，后者易与肝源性碱性磷酸酶发生交叉反应。tP1NP[4]，tP1NP各种骨代谢疾病，由于骨转换率不同，骨转换生化指标有不同程度的升高，这些骨代谢疾病往往会导致继发性骨质疏松[5]。目前国内较多采用酶联免疫法测定血清I型前胶原氨基端前肽(tP1NP)，本文应用先进的电化学发光免疫技术(ECLIA)自动测定血清I型前胶原氨基端前肽(tP1NP)，灵敏度高，准确度高，稳定性好[6]，可克服上述缺点，能很好地反映骨转换的变化[7]，是骨代谢疾病研究的诊断、监测、治疗效果观察非常有价值的指标。【相关文献】MelkkoJ,KauppilaS,NiemiS,etal.ImmunoassayforintactaminoterminalpropeptideofhumantypeIprocollagen[J].ClinChem,1996,42(6):947-954.丛玉隆，冯仁丰，陈晓东,等.临床实验室管理学[M].北京：中国医药科技出版社，2004：1-39[3]IvaskaKK,HentunenTA,VaaraniemiJ,etal.Releaseofintactandfragmentedosteocalcinmoleculesfrombonematrixduringboneresorptioninvitro[J].JBiolChem2004,279(18):18361-18369.ClowesJA,HannonRA,YapTS,etal.Effectoffeedingonboneturnovermarkersanditsimpactonbiologicalvariabilityofmeasurements[J].Bone,2002,30(6):886-890.王继贵.继发性骨质疏松的实验室检查[J]2013,31(3):201-204.LomeoA,BolnerA.Stabil