无菌检查法标准操作规程

无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。4.职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。5.程序：5.1.定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(18〜26)°C及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。521.无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程(SOPZL0014)。5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程(SOPZL0006)、悬浮粒子监测规程(SOPZL0005)。实验设备及用具：电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服(衣、裤、帽、口罩等)。微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45ixm，应符合规定。除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程(SOPZL0015)进行操作。稀释剂：灭菌注射用水。5.5.培养基：需气菌、厌气菌培养基(流体硫乙醇酸盐培养基)；真菌培养基。5.52培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程(SMPZL0036)、培养基灵敏度检查规程(SOPZL0019)、培养基配制规程(SOPZL0016)进行操作。对照用菌液：金黄色葡萄球菌(Staphyoccussureus)菌液：取金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30〜35°C培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。生抱梭菌(Clostridumsporgenes)菌液：取生抱梭菌［CMCC(B)64941］的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30~35C培养18~24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1ml中含10~100个菌。白色念珠菌(Candidaalbicans)菌液：取白色念珠菌［CMCC(F)98001］的真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20~25C培养24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。操作法：供试品、培养基在移入缓冲间之前应先编号，并用75%酒精棉球擦拭瓶(管)外壁，然后连同其它用具(包括无菌衣、帽、口罩等)移入缓冲间，打开无菌间紫外光灯和空气过滤装置开关，并使其工作在30分钟以上。将所需物品移入无菌室，每次试验中所用物品，必须计划好，并有备用物。操作人员进入无菌室应严格遵守QC洁净室进出规程(SOPZL0013)。供试品外部消毒：橡皮塞、铝盖、压封小瓶：先用75%酒精棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用消毒镊子剔去铝盖上的铝质小圆片，用酒精棉球擦拭瓶盖及橡皮塞，并将酒精棉球盖于橡皮塞上待取样。安瓶：先用酒精棉球将安瓶外部擦拭消毒待干，用砂轮轻轻割安瓶颈部，便于折开安瓶。供试品溶液的制备：取供试品加入该药品项下规定的稀释剂用量，制成该药品项下规定浓度的供试品溶液。根据供试品的抑真菌和抑细菌试验，判定该供试品有无抑菌性，而决定采用直接接种法或薄膜过滤法。见供试品抑细菌、抑真菌试验规程(SOPZL0018)。5.7.6.直接接种法：本法适用于非抗菌作用的药品。吸取规定接种量的供试品溶液，以右手半握拳，小指为主，拔开培养基管的塞子，沿着培养基管壁分别接种于需气菌、厌气菌培养基6管，其中1管于操作结束后移到接种室接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml作阳性对照。另接种于真菌培养基5管。取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的稀释剂，作阴性对照。轻轻摇动，使供试品与培养基混合。5.7.66需气菌、厌气菌培养基管置电热恒温培养箱中30-35°C培养7日，真菌培养基管置电热恒温培养箱中20-25C培养7日。在培养期间，应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照管在24小时内应有菌生长。如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量，转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日观察是否再出现浑浊或斜面有无细菌生长。薄膜过滤法：本法适用于有抗菌作用或大容量的供试品。按集菌使用规程安装好集菌仪。取供试品擦拭消毒后，除去塑料盖，插好导管，进行抽滤，滤液从排液管排出。同法操作将培养基抽到全封闭式集菌培养器中。取需气菌、厌气菌培养基和真菌培养基各1管，同法操作加入相应的溶剂作阴性对照。5.7.76阳性对照管应根据供试品特性在接种橱内加入相应对照菌液1ml。(抗细菌药物以金黄色葡萄球菌为对照菌，抗厌氧菌药物以生孢梭菌为对照菌，抗真菌药物以白色念珠菌为对照菌)。需气菌、厌气菌培养基管置30-35C培养箱中，真菌培养基管置20-25C培养箱中各培养7日；阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。5.8.结果判断：当阳性管显浑浊并确有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊，但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格。如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，应重新2倍量取样，分别依法复试，除阳性对照管外，其它各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。6.本标准引用本公司内部标准：QC洁净室清洁、消毒规程(SOPZL0014)；QC洁净室进出程序(SOPZL0013)；洁净区沉降菌监测规程(SOPZL0006)；洁净区悬浮粒子监测规程(SOPZL0005)；培养基灵敏度检查规程(SOPZL0019)；培养基配制