高尿酸血症动物模型的建立及抗痛风中药的筛选解析

ft东大学博士学位论文姓名：刘文波申请学位级别：博士专业：内科学（风湿病学指导教师：李兴福20080420ft符号说明英文缩写ＸＯＤＣＯＸ英文全称ｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｃｙｃｌｏｘｙｇｅｎａｓｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１中文全称黄嘌岭氧化酶环氧化酶白细胞介素１Ｂ肿瘤坏死因子Ｑ微晶型尿酸钠ＩＬ—ｌｐＴＮＦ．ａＢｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ．ｎＭＳＵＵＡＯＡＮＳＡＩＤｓｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｕｒａｔｅｃｒｙｓｔａｌｕｒｉｃａｃｉｄｏｘｏｎｉｃａｃｉｄＮｏｎ．ｓｔｅｒｏｉｄａｌａｎｔｉ．．尿酸氧嗪酸非甾体抗炎药ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｒｕｇＬＴＰＧＩｇＩｐｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａＩｉｎｏｓｉｎｅ白细胞三烯前列腺素灌胃给药腹腔注射次黄嘌呤核苷酸５一磷酸核糖一１谱技术ｉｎｊｅｃｔｉｏｎＩＭＰＰＲＰＰｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅＰｈｏｓｐｈｏｒｂｏｓｙｌ—ｌ－ｐｙｒｏｐｈｏｓ—ｐｈａｔｅＡＡａａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄＭ／ＺＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳＭａｓｓ／ＣｈａｒｇｅＳｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅ－ｏｆ－ｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｌｌ原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：翻童遗Ｅｌ期：矽扎５．矽关于学位论文使用授权的声明本人完全了解ft东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权ft东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：三盟遮导师签名：虹日ft东大学博士学位论文高尿酸血症动物模型的建立及抗痛风中药的筛选博士研究生专业刘文波内科学（风湿病学）李兴福教授博士生导师中文摘要痛风（ｇｏｕｔ）是长期嘌呤代谢障碍、血尿酸增高引起组织损伤的一组异质性疾病．临床特点是：高尿酸血症（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）、痛风性急性关节炎反复发作、痛风石沉积、特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾脏引起的尿酸盐呈超饱和状态，一般认为血尿酸４ｌ６ｔｔｍｏｌ／Ｌ时为高尿酸血症。约５％－ｌ２％高尿酸血症患者会发展成为痛风。痛风的急性发作是尿酸钠（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｃｒｙｓｔａｌ，ＭＳＵ）在关节危害人类健康的一种严重的代谢性疾病。避免关节炎反复发作和肾脏病变形成，痛风患者需要长期服用有降低血尿酸ｒｉｃａｃｉｄ。ＵＡ）ＵＡ作用的中草药制剂具有重要的意义。降尿酸机制；第三部分建立急性痛风性关ft东大学博士学位论文节炎动物模型，观察中药对急性痛风性关节炎的治疗效果并分析其作用机制；第四部分应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术（ｓｕｒｆａｃｅ．ｅｎｈａｎｃｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ）分析急性痛风性关节炎动物模型与正常小鼠之间及模型小鼠中药治疗前后血清蛋白质谱的变化。本研究主要目的、方法、结果和结论概述如下：研究目的：建立高尿酸血症及急性痛风性关节炎动物模型，筛选具有降尿酸及抗炎镇痛作用的中药并分析其可能作用机制，应用蛋白组学方法寻找急性痛风性关节炎动物模型的血清蛋白标志物，分析急性痛风性关节炎动物中药治疗前后血清蛋白质谱的变化。ｋｇ／ｄ灌胃给药，每日２次，乙胺丁醇按２５０ｍｇ／ｋｇ次，均连续用药７天。尿酸、氧嗪酸钾盐分别按２５０ｍｇ／ｋｇ及／ｋｇ－－酸钾盐法造模，雄性昆明小鼠随机分组，分别予苯溴马隆２０ｍｇ／ｋｇ呤醇４０ｍｇ／ｋｇ性昆明小鼠随机分为９组，采用腹腔注射氧嗪酸钾盐法建模，分别给予生理盐Ｗｉｓｔａｒ每日１次，连续７天，收集第６—７天２４ｈ每日１次，连续６天。观察给药后关节肿胀度以及关节周围组织炎症介质ｌＬ．１ｐ和ＴＮＦ．ａ水平的变化，并进行关节病理学检查。２６．分别采用醋酸腹腔注射诱导小鼠扭体反应法和热板法的镇ft东大学博士学位论文泻、车前子和吲哚美辛的镇痛抗炎作用。７．用ＣＭｌ０芯片结合ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ技术检测正常组、模型组、土茯苓组各Ｉ２只小鼠血清ｈｅｒｇｅｎＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐ３．１性关节炎小鼠成模判断模型，观察模型小鼠中药治疗后蛋白质峰的动态变化。水平较正常对照组均显著升高（尿酸组从ｌ０８．９±ｌ０．１Ｉ．ｔｍｏｌ／Ｌ升高到３０１．８＋＿２４．７ｔｔｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ：组从１１９．Ｉ±２０．６９ｍｏｌ／Ｌ升高到２７６．３＋３２．５Ｉｔｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ：氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组从ｌｌ５．７±１７．４９ｍｏｌ／Ｌ升高到２８２．２＋＿４０．７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０１）泽泻组小鼠用药后血尿酸水平下降，分别为ｌ７１．２－４－２８．８１且ｌ／Ｌ、１６３．０士４８．８ｐ．ｍｏｌ／Ｌ、１５８．７士ｏｌ／Ｌ，与模型组（２５０．４４－５５．８“ｍｏｌ／Ｌ）比较有明显差小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性分别为７３．２３－４－７．２ｌＵ／Ｌ９士５．８４Ｕ／Ｌ，与模型组（８９．０７士８．３４Ｕ／Ｌ）比较明显下低。萆薜、泽泻、车前子组小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性与模型组比较无明显差度为ｌ８７．５０士４６．８ｌｐｍｏｌ／Ｌ，较模型组（１３６．０２＋１１．５５“ｍｏｌft东大学博士学位论文／Ｌ）明显增加，但低于苯溴马隆组（２３１．５５４－２９．３２９ｍｏｌ／Ｌ）尿尿酸浓度，同时，泽泻组大鼠２４ｈ尿量较模型组有增加趋势。土茯苓组大鼠尿量及尿尿酸浓度与模型组比较无明显差异。５．小鼠关节内注射ＭＳＵ溶液，２４ｈ后关节明显肿胀，ＩＬ．１模型组小鼠肿胀关节周围组织中炎症介质ｐ和ＴＮＦ．ａ水平明显增高，病理学检查发现模型组小鼠软骨破坏，滑膜组织充血、坏死伴炎细胞浸润。土茯苓组小鼠关节肿胀度明显减轻，关节周围组织中炎症介质ＩＬ．１ｐ和ＴＮＦ．ａ水平显著降低，关节组织病理学改变显著改善。泽泻、车前子组小鼠关节肿胀度、病理检查结果与模型组比较无明显差异。６．土茯苓ｌ２９／ｋｇ灌胃给药能显著减轻蛋清致小鼠足跖肿胀度及二甲苯致耳肿胀度；延长醋酸腹腔注射致小鼠扭体反应的潜伏期，减少扭体次数；对热板致小鼠疼痛反应潜伏期与模型组无明显差异，但有延长趋势。泽泻、车前子组小鼠镇痛抗炎实验结果与模型组比较无明显差异。７．急性痛风性关节炎模型组与正常组间表达差异有统计学意义的蛋白质峰２７个。９个蛋白质峰的ｔ检验或Ｍａｎｎ．Ｗｈｉｔｎｅｙ秩和检验所得Ｐ值在ｌ０。数量级以下．Ｍ／Ｚ位于４６ｌ２、ｌ２９ｌ５、５６３７、３０ｌ８和２３ｌ０３Ｄａ的５４＂差异蛋白峰在模型组高表达，Ｍ／Ｚ位于６４５６、４９７３、３９２３和ｌ５０９０Ｄａ的４个蛋白质峰在模型组血清低表达；急性痛风性关节炎模型组与土茯苓组间表达差异有统计学意义的蛋白质峰ｌ５个。其中６个蛋白质峰的ｔ检验或Ｍａｎｎ．Ｗｈｉｔｎｅｙ秩和检验所得Ｐ值在１０‘３数量级以下。Ｍ／Ｚ位于２５９８、４６ｌ４、３４４４、９６８６和３０ｌ－８Ｄａ的５个蛋白峰在模型组高表达，Ｍ／Ｚ为２９３７的１个蛋白质峰在中药组血清高表达．４６ｌ２Ｄａ和６４５６Ｄａ两个蛋白质峰组合所构建的模型能达到鉴别急性痛风性关节炎小鼠和正常小鼠的最佳检测效果，总准确率７５．Ｏ％。４６ｌ２Ｄａ在正常组低表达，模型组高表达；４６ｌ４Ｄａ在模型组高表达，中药治疗后低表达，软件分析二者为同一个融合峰，提示该峰可能为急性痛风性关节炎的候选标志蛋白质峰。研究结论：１．腹腔注射氧嗪酸钾盐法可作为建立高尿酸血症动物模型、筛选降尿酸药物的可靠方法。２．黄柏、土茯苓、泽泻能降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平；土茯苓降低高尿酸血症小鼠血尿酸水平的机制至少部分在于对肝脏黄嘌呤氧化酶的抑制作用；泽泻降低高尿４ft东大学博士学位论文酸血症小鼠血尿酸水平的机制可能主要在于促进尿酸排泄及增加尿量。３．土茯苓能减轻急性痛风性关节炎的关节肿胀，减少炎细胞浸润，降低局部组织炎症介质ＩＬ．１Ｂ和ＴＮＦ．ａ的水平表明土茯苓有较强的抗炎及镇痛作用。４．ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ技术检测到急性痛风性关节炎动物模型与正常小鼠及模型小鼠与中药治疗组间血清蛋白质谱的差异，对寻找急性痛风性关节炎模型小鼠血清蛋白标志物提供了有用的信息。研究意义：１．确立了简便可靠的高尿酸血症动物模型。２．研究中发现中药土茯苓在高尿酸血症动物模型表现出降尿酸效果，对急性痛风性关节炎模型有抗炎镇痛作用，对研制安全、经济、有效的新型抗痛风药制剂有重要意义．３．运用ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳ蛋白芯片技术，检测到急性痛风性关节炎动物模型血清中特异性标志蛋白质峰，为进一步发现痛风性关节炎的特异性诊断标志物提供实验依据。关键词高尿酸血症；痛风；动物模型；中药；ＳＥＬＤＩ．ＴＯＦＭＳft东大学博士学位论文ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴｏＦＡＮＩＭＡＬＨＹＰＥＲＵＲＩＣＥＭＩＡＭＯＤＥＬＡＮＤＳＥＬＥＣＴＩＯＮｏＦＣＨＩＮＥＳＥＴＲＡＤＩＴＩｏＮＡＬＭＥＤＩＣＩＮＥＦｏＲＡＮＴＩＧｏＵＴＳＡＢＳＴＲＡＣＴＧｏｕｔｉｓａｃｌｉｎｉｃａｌｓｙｎｄｒｏｍｅｏｆｔｉｓｓｕｅｄａｍａｇｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｃｈｒｏｎｉｃｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｄｉｓｏｒｄｅｒｏｆｐｕｒｉｎｅ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｍａｒｋｅｄｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ．Ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｌｅａｄｓｔｏｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｃｉｄｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｉｎｔｈｅｂｏｄｙｃａｕｓｉｎｇｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｕｒｉｃｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｎｅｐｈｒｏｌｉｔｈｉａｓｉｓ．Ｐｒｉｍａｒｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｓｕｃｈａｓｇｏｕｔｗａｓｏｂｅｓｉｔｙ，ｏｆｓｅｖｅｒａｌａｎｄｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ，ｄｉａｂｅｔｅｓｓｅｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃｉｓｍｅｌｌｉｔｕｓａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ａｓ晷ｋｉｎｄｃａｕｓｅｄｉｓｅａｓｅ，ｇｏｕｔｄｏｅｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｈａｒｍｔｏｈｕｍａｎｈｅａｌｔｈ．ｃａｎＴｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔｐｒｅｖｅｎｔａｎｄＩｎｒｅｃｅｎｔｇｒｅａｔｌｙｅｘｐｌｏｒｅａｓｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓｔｈａｔｃｕｒｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ，ａｓｗｅｌｌｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｇｏｕｔ．ａｎｄｇｏｕｔｈａｓｙｅａｒｓ，ｔｈｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｇｒａｄｕａｌｌｙｒｉｓｅｎａｌｏｎｇｗｉｔｈｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｌｉｖｉｎｇｓｔａｎｄａｒｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｇｏｕｔｅｎｔａｉｌｓｔｈｅｕｓｅｏｆａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｇｅｎｔｓｔｏｒｅｌｉｅｖｅｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅａｓａｓｗｅｌｌｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｔｏｕｓｅｂｌｏｃｋｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｃａｎｆｒｏｍｐｕｒｉｎｅ．Ｂｕｔｔｈｅｏｆｃｕｒｒｅｎｔｍｅｄｉｃａｔｉｏｎａｓｒｅｓｕｌｔｉｎａｎｕｍｂｅｒｏｆａｄｖｅｒｓｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓ，ｓｕｃｈａｄｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｓｌｉｍｉｔｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄａｌｌｅｒｇｉｃｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｒｅａｃｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｏｆｎｅｗｔｈｅｉｒｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｓａｆｅｔｙｉｓｈｙｐｏｕｒｉｃｅｍｉｃｗａｒｒａｎｔｅｄ．ａｇｅｎｔｓｇｒｅａｔｅｒｈｉｇｈｌｙＡｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｏｆｕｓｅｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｏｕｔｉｓｆｒｅｑｕｅｎｔＵＳｅＳｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓｙｓｔｅｍｓ，ｔｈｅｉｒｔｈｅｌａｃｋｏｆｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｉｎｍｏｄｅｒｎｍｅｄｉｃｉｎｅｓｕｆｆｅｒｆｒｏｍｈａｓｂｅｅｎｆｏｃｕｓｅｄｏｎｅｖｉｄｅｎｃｅｓ．Ａｔｔｅｎｔｉｏｎｐｌａｎｔｓｅｌｅｃｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｉｔｓ６ftｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｎｅｗｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ．Ａｉｍ：１．ＥｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｍａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌａｎｄｓｅｌｅｃｔｌｅｖｅｌＣｈｉｎｅｓｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅａｎｄｈａｖｅｗｈｉｃｈａｎｄｃａｎｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｕｒｉｃａｃｉｄｅｆｆｅｃｔｓ．Ｕｓｅａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｒｙｌａｓｅｒａｎａｌｇｅｓｉｃｔｉｍｅｏｆｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳ）ｔｏａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌ．ｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒｉｎＭｅｔｈｏｄｓ：１．Ｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉｃｍｏｄｅｌｓｗｅｒｅｍａｄｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎｍａｌｅｋｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅｂｙｙｅａｓｔｏｘｏｎａｔｅｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｉｇ，ｕｒｉｃａｃｉｄｉｐ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｉｇ，ａｎｄｉｐ，ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｉｐｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｉｇ．Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｕｒｉｃａｃｉｄｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍａｎｄｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ’Ｓａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｎｅｐｈｒｉｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．２．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｔｈｅｍｏｕｓｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｆｏｒｔｈｒｅｅｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｂｌｏｏｄａｎｄｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．３．Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｃｏｒｔｅｘ，ｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅ，ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｇｉｖｅｎｔｏｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅ，ｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｗｉｔｈｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｉｎｍｏｕｓｅｌｅｖｅｌｏｆｂｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄａｎｄｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ（ＸＯＤ）ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｌｉｖｅｒｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．４．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅ，ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｒａｔｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｆｏｒｓｅｖｅｎｄａｙｓ，ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ２４ｈｏｕｒｕｒｉｎｅａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｕｒｉｎｅａｃｉｄｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｄ．５．ＭｉｃｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｕｒｉｎｅｕｒｉｃｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＭＳＵｉｎｔｒａａｒｔｉｃｕｌａｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅ，ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅａｎｄｉｎｄｏｍｅｔａｃｉｎｗｅｒｅｇｉｖｅｎｔｏｔｈｅｍｏｄｅｌｆｏｒｓｉｘｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｄｅｇｒｅｅ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｉｎｔｈｅｊｏｉｎｔｌｅａｃｈａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｆｅｅｔｍｏｒｅｏｖｅｒｗａｓｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｖｉｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｗａｓｅａｒｄｏｎｅ．６．Ｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇａｌｂｕｍｉｎ，ｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ，ｔｈｅｍｉｃｅ７ft东大学博士学位论文ｗｒｉｔｈｉｎｇｉｎｄｕｃｅｄｒｅｓｐｏｎｓｅｒｅｓｐｏｎｅｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｃｅｔｉｃｂｙｈｏｔｐｌａｔｅ．Ｉｎａｎｄｔｈｅｓｅｍｏｄｅｌｓａｃｉｄｔｈｅａｎｄｔｈｅｍｉｃｅｓｗｅｌｌｉｎｇｐａｉｎｗａｓｄｅｇｒｅｅ，ｐａｉｎｄｅｔｅｃｔｅｄｌａｔｅｎｃｙｐａｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．７．ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳａｎｄＣＭ１０ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｉｐｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｏｍｉｃｐａｔｔｅｒｎｓｏｆ３６ｍｉｃｅｓｅｒｕｍｓｐｅｃｉｍｅｎｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｆｒｏｍｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂ．Ｔｈｅｄｅｃｉｓｉｏｎｍｏｄｅｌｆｏｒａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍｅｄｉｃｉｎｅｈｅｒｂｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１．Ｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｉｎｕｒｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｇｒｏｕｐａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐａｌｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｂｕｔｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｉｎｎｏｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｇｒｏｕｐａｎｄｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅｐｌｕｓｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．２．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌａｎｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅｂｏｔｈｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｍｏｒｅｏｖｅｒｌｅｖｅｌｏｆｍｏｄｅｌ．３．ａｌｌｃｏｕｌｄｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅＣＯＵｌｄｄｅｃｒｅａｓｅＰｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｔｈｅｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｇｌａｂｒａｌｅｖｅｌｃｏｒｔｅｘ，ｓｍｉｌａｘｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄＲｏｘｂ，ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｂｕｔｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅｏｒ．ｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅｈａｓｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｂｙｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｉｎｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｔｈｅｓｅｒｕｍＸＯＤａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｇｒｏｕｐａｎｄｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｔｈｅｓｅｒｕｎｂｃｏｒｔｅｘｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，ｂｕｔＸＯＤａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｎｏｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐａｎｄｐｌａｎｔａｇｉｎａｃｅａｅｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．４．Ｉｎｔｈｅｒａｔｇｒｏｕｐｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ，ｔｈｅｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｕｔｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅ．Ｔｈｅ２４ｈｕｒｉｎｅｖｏｌｕｍｅｏｆｒａｔｓｉｎａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｇｒｏｕｐｓｅｅｍｅｄｔｏａｄｄｂｕｔｈａｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．５．Ｉｎ８ft东大学博士学位论文ｔｈｅｍｏｕｓｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｍｏｄｅｌ，ｔｈｅｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｉｎｇｗａｓｖｅｒｙｏｂｖｉｏｕｓａｔ２４ｈ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ一１ＢａｎｄＴＮＦ一旺ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｈｉｓｔｏｐａｔｈｏＩｏｇｉｃｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｙｎｏｖｉａｌＲｏｘｂｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｅｒｉｏｕｓｌｙｉｎｊｕｒｅｄｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔＩＬ・ｌｊｏｉｎｔｓｗｅｌｌｉｎｇｏｆｍｏｕｓｅ，ｒｅｄｕｃｅｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｐａｎｄＴＮＦ・口ａｎｄｍａｒｋｅｄｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｎｇｅｓ．６．Ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙｏｖｉｇｌａｂｒａａｌｂｕｍｉｎ，ｔｈｅｓｗｅｌｌｉｎｇｄｅｇｒｅｅｉｎｓｍｉｌａｘｄｅｃｒｅａｓｅｄＲｏｘｂｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎａｎｄｗｒｉｔｈｉｎｇｒｅｓｐｏｎｅｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｒｅｄｕｃｅｂｙａｃｅｔｉｃｅａｒａｃｉｄ，ｓｍｉｌａｘｓｗｅｌｉｎｇｔｏｇｌａｂｒａＲｏｘｂｏｆｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｍｏｕｓｅａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｒｉｔｈｉｎｇｒｅｓｐｏｎｅ．ＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｓｅｅｍｅｄｏｎｐｒｏｌｏｎｇｐａｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｌａｔｅｎｃｙｈｏｔｐｌａｔｅｂｕｔｈａｓｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈａｔｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．７．２７ｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｓｅｒｕｍａｒｅａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６ｌ２，ｌ２９ｌ５，５６３７，３０１８ａｎｄ２３ｌ０３Ｄａａｒｅｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｏｔｅｉｎａｒｅｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ６４５６，４９７３，３９２３ａｎｄｌ５０９０Ｄａｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．１５ｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｒｅｄｏｗｎ・ｒｅｇｕｌａｔｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ２５９８，４６ｌ４，３４４４，１９６８６ａｎｄ３０ｌ８Ｄａａｒｅｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ２９３７Ｄａｉｓｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ａｄｅｃｉｓｉｏｎｍｏｄｅｌｗａｓｂｕｉｌｔｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓｏｆ４６ｌ２Ｄａａｎｄ６４５６Ｄａ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓｗｉｔｈｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙｏｆ７５．Ｏ％．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６１２Ｄａａｎｄ４６１４Ｄａｗｅｒｅｔｗｏｐａｒｔｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｉｎｍｏｄｅｌｏｂｔｕｓｅｐｅａｋ，ｏｆｗｈｉｃｈｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｕｐ・－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄｄｏｗｎ・・ｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｂｏｔｈｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎｐｅａｋｓａｔｔｈｅｍ／ｚｏｆ４６ｌ２ａｎｄ４６１４Ｄａａｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ｏｘｏｎａｔｅＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：１．Ｐｏｔａｓｓｉｕｍｇｉｖｅｎｂｙｉｐｃｏｕｌｄｅａｔａｂｌｉｓｈｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．２．Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉｃｏｒｔｅｘ，ｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂａｎｄ９ft东大学博士学位论文ａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｃｏｕｌｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｓｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂｍａｙｂｅｒｅｌｅｖａｎｔｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＸＯＤａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒａｌｉｓｍａｔａｃｅａｅｍａｙｂｅｒｅｌｅｖａｎｔｉｎａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｃｒｅｔｉｏｎｏｆｕｒｉｃａｃｉｄ．３．ＳｍｉｌａｘｍｅｃｈａｎｉｓｍｇｌａｂｒａｍａｙＲｏｘｂｂｅｐｏｓｓｅｓｓｅｄｔｏａｎｔｉｇｏｕｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｐｒｏｄｕｃｔｅｆｆｅｃｔｓ，ａｎｄｏｆｉｔｓｒｅｌａｔｅｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．４．ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦＭＳｃｏｕｌｄｄｉｓｃｒｉｍａｎａｔｅｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓｆｒｏｍｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｉｔｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｆｉｎｄｉｎｇｔｈｅｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ：１．ＥｓｔａｂｌｉｓｈＳｍｉｌａｘｇｌａｂｒａＲｏｘｂａｒｅｌｉａｂｌｅａｎｉｍａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｏｄｅｌ．２．ｉｓｆｏｕｎｄｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌａｎｄｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｒｙａｎｄａｎａｌｇｅｓｉｃｅｆｆｅｃｔｓ．Ｉｔｉｓｕｓｅｆｕｌｆｏｒｆｉｎｄｉｎｇａｎｅｗｔｏｍｅｄｉｃａｍｅｎｆｉｎｄｔｈｅｆｏｒｇｏｕｔ．３．ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦＭＳｉｓａｆａｖｏｕｒａｂｌｅａｒｔｈｒｉｔｉＳ．ｔｏｏｌｃａｎｄｉｄａｔｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆａｎｉｍａｌｇｏｕｔｙＫｅｙＷｏｒｄｓ：ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ；ｇｏｕｔ；ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；ｔｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＳＥＬＤＩ—ＴＯＦＭＳft东大学博士学位论文前言痛风（ｇｏｕｔ）是长期嘌呤代谢障碍、血尿酸增高引起组织损伤的一组异质性疾病…。临床特点是：高尿酸血症（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）、急性痛风性关节炎反复发作、痛风石沉积、特征性慢性关节炎和关节畸形，常累及肾引起慢性间质性肾炎和肾尿酸结石形成。上述表现可单独或联合存在．痛风的生化标志是高尿酸血症，指细胞外液的尿酸盐呈超饱和状态，一般认为血尿酸盐＞４ｌ７￥ｔｍｏｌ／Ｌ时应考虑高尿酸血症。约５％一ｌ２％高尿酸血症患者会发展成为痛风。痛风的急性发作是尿酸钠ｕｒａｔｅ（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍｃｒｙｓｔａｌ，ＭＳＵ）在关节及关节周围组织以结晶形式沉积引起的急性炎症反应。ＭＳＵ晶体作用于中性粒细胞、滑膜细胞、单核细细胞因子能够介导细胞间信号传导，在炎症反应中发挥作用。有研究表明ＩＬ．ＩＢ、ＩＬ．８和ＴＮＦ．ａ的发生、发展过程中起重要作用，分析滑液中相关细胞因子有利于指导临床诊断、治疗和疾病预测心】。痛风不仅可以侵犯骨和关节，而且还容易累及肾脏和心血管系统。高尿酸血症及原发性痛风与肥胖症、高脂血症、高血压病、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病呈显著正相关阳。５１．因此，痛风是危害人类健康的一种严重的代谢性疾病。近年来，随着人们生活水平的提高，饮食结构的变化，糖、脂肪、蛋白质摄入量明显增加，无论是欧美国家还是东方各国，痛风的患病率有逐年递增的趋势¨１。目前对高尿酸血症和痛风的预防主要是限制高嘌呤食物，控制饮酒，在治疗上既要控制急性发作的关节炎，又要长期治疗高尿酸血症，预防痛风石沉积ｎ引。化学药物分为治疗痛风性关节炎和纠正高尿酸血症两类…一引。前者有秋水仙碱、非甾体类抗炎药、糖皮质激素，它们能快而有效地缓解疼痛，减轻炎症；后者有丙磺舒、苯溴马隆（促进尿酸的排泄）和别嘌呤醇（抑制尿酸的生成）ｎ３ｑ引。但这些药物的不良反应较多，苯溴马隆可导致严重的肝损害及神经系统¨卜１８１。别嘌呤醇是唯一在临床上使用的黄嘌呤１２ft东大学博士学位论文氧化酶抑制剂，能够通过抑制黄嘌呤氧化酶抑制尿酸的生成，但其可致皮肤过安全使用ｎ尿酸血症药物成为今后的一个发展方向，也是药学研究的一个热点．中医中药治疗高尿酸血症和原发性痛风的报道较多心ｋ２益气健脾，泄浊祛疲等．但临床报道多为回顾性的总结，无对照观察，诊断标并初步探讨其作用机制。１３ft东大学博士学位论文参考文献痛风．内科学第６版．叶任高主编．人民卫生出版社．２００４；８６２．８．２ＰｕｎｚｉＬ，ＣａｌｏＬ，ＰｌｅｂａｎｉｉｎｓｙｎｏｖｉａｌＭ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｆｌｕｉｄ．ＣｒｉｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＲｅｖＣｌｉｎｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅＳｃｉ．２００２；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ３９：６３．８８．３Ｌａｂ志．１９９９；３：２４４．６．４ＫｏｈａＷＨ，ＳｅａｈＡ，ＣｈａｉＰ．Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｄｉｓｅａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｏｆｇｏｕｔ：ｈｏｓｐｉｔａｌｂａｓｅｄｓｔｕｄｙｏｆｌ００ｐａｔｉｅｎｔｓｉｎＳｉｎｇａｐｏｒｅ．ＡｎｎＡｃａｄＭｅｄＳｉｎｇａｐｏｒｅ．１９９８：２７：７－１０．５ＴａｋａｈａｓｈｉＳ，ＹａｍａｎｏｔｏＴ，ＭｏｒｉｗａｌｄＹ，ｅｔａ１．ＩｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍＬｐ（ａ）ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｒｉｍａｒｙｇｏｕｔ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ．１９９５；５４：９０－３．６ＬａｗｒｅｎｃｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅＲＣ，ＨｅｌｍｉｃｋＣＧ，ＡｒｎｅｔｔＦＣ，ｅｔａ１．ＥｓｔｉｍａｔｅｓｏｆｔｈｅｏｆａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｅｄｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌｄｉｓｏｒｄｅｒｓｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．１９９８；４ｌ：７７８—９．７杜蕙，陈顺乐，王员等．上海市黄埔区社区高尿酸血症与痛风的流行病学调查．中华风湿病学杂志．１９９８；２：７５．８．分析中华流行病学志．１９９６；ｌ７：ｌ０．１２．９苗志敏，赵世华，王颜刚等．ft东沿海居民高尿酸血症及痛风的流行病学调查．中华内分泌代谢杂志．２００６；２２：４２１．５．１０ＰｏｌｌｍａｎｎＧ，ＫｕｌｌｉｃｂＷ，ＫｌｅｉｎＧ．Ｔｈｅｒａｐｙｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａａｎｄｇｏｕｔ．ＷｉｅｎＭｅｄＷｏｃｈｅｎｓｃｈｒ．１９９７；１４７：３８２－７．１ｌＥｍｍｅｒｓｏｎＢＴ．Ｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｇｏｕｔ．ＮＥｎｇｌ４４５．５１．１２ＪＭｅｄ，ｌ９９６；３３４：研究进展．国外医学内分泌学分册．２００５；２５：２７７．９．１３ＦａｒｏＡＧ．Ｍａｎａｇｉｎｇｐｒｏｂｌｅｍｇｏｕｔ．ＡｎｎＡｃａｄＭｅｄＳｉｎｇａｐｏｒｅ．１９９８；１４ft东大学博士学位论文２７：９３．９．１４ＳｈｉｍｉｚｕＴ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｇｏｕｔａｒｔｈｉｔｉｓ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．１９９６；５４：３２６７．７１．１５ＴａｍａｎａｋａＨ．Ｈｏｗｔｏｓｅｌｅｃｔａｎｄｕｓｅｕｒａｔｅｌｏｗｅｒｉｎｇｆｏｒｈｙｐｅｒ－ｕｒｉｃｅｍｉａ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．１９９６；５４：３２６ｌ－５．．２０００；２ｌ：２８５。１７苯溴马隆：因肝损害报告被撤回．药物警戒通讯．２００３；５：ｌ６．７．１８张开达．痛风利仙致神经系统严重不良反应ｌ志．２０００；２０：６３９．１９ＫｅｌｌｅｙＷＮ．Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉｃｄｒｕｇｓ．Ｉｎ：ＫｅｌｌｅｙＷＮ，ＨａｒｒｉｓＥＤ，ＲｕｄｄｙＳ，ＳｌｅｄｇｅＣＢ．ＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＷＢＳａｕｎｄｅｒｓ．１９９ｌ；８６２—７７．。ＨｏｕｓｓｅｔＣ，ｅｔａ１．Ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌｈｙｐｅｒ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ．Ａｐｏｓｓｉｂｌｅｃａｕｓｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓｅｒｕｐｔｉｏｎｓｉｎａｐａｔｉｅｎｔｕｎｄｅｒ－ｇｏｉｎｇａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＲｅｖｕｅｄｅｓＭａｌａｄｉｅｓＲｅｓｐｉｒａｔｏｉｒｅｓ．１９９５；１２：３１４—６．ｌ陈光亮，徐叔云．中药治疗痛风研究近况．安徽中医学院学报．２００３；２２：５７－９．陈文照，姜宏，顾瑞生等．经方治疗痛风临床研究进展．中医正骨．１９９６；８：３３．ＫｏｎｇＬＤ，ＹａｎｇＣ，ＧｅＦ，ｅｔａ１．ＡＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅＥｒｍｉａｏｗａｎｒｅｄｕｃｅｓｓｅｒｕｍｕｒｉｃａｃｉｄｌｅｖｅｌａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｌｉｖｅｒｘａｎｔｈｉｎｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄｘａｎｔｈｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｉｎｍｉｃｅ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２００４；９３：３２５—３０．ＣｈｅｎＧＬ，ＷｅｉＷ，ＸｕＳＹ．ＥｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＴｏｔａｌＳａｐｏｎｉｎｏｆＤｉｏｓｃｏｒｅａｏｎａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ．ＡｍＪＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄ．２００５；３４：７７．８５．２２２２３２４ft东大学博士学位论文第一部分高尿酸血症动物模型的建立高尿酸血症（ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）是指由嘌呤代谢紊乱和（或）尿酸排泄障碍所致血尿酸增高，细胞外液尿酸盐呈超饱和的状态。正常男性血尿酸为ｌ５０－３８０９ｍｏｌ／Ｌ，女性更年期以前为ｌ００－３００９ｍｏｌ／Ｌ，更年期后其值接近男性。３７℃时，血清尿酸的饱和浓度约为４ｌ６ｐｍｏｌ／Ｌ，高于此值即为高尿酸血症…。超高蛋白膳食是引起嘌呤代谢紊乱的重要原因，过量糖、脂肪、蛋白质、盐的摄入及大量饮酒与患病率增加有重要关系他１。约５％－ｌ２％高尿酸血症患者会发展成为痛风，痛风不仅可以侵犯骨和关节，而且还容易累及肾脏和心血管系统。高尿酸血症和痛风是当前危害人类健康的一种严重的代谢性疾病。目前能够降低血尿酸的药物主要有两类，一类是抑制尿酸产生的黄嘌呤氧化酶抑制剂，主要有别嘌呤醇：另一类是促进肾脏清除尿酸的药物，主要有丙磺舒、苯溴马隆等。这些药物或价格昂贵（如苯溴马隆），或容易发生过敏等不良反应（如别嘌呤醇、丙磺舒），使高尿酸血症的临床治疗受到一定程度的限制。更加安全、有效、经济的降尿酸药物急待研究。建立高尿酸血症动物模型，对研究寻找防治高尿酸血症的药物具有重要意义门外。所以大多数动物体内血尿酸值较低，不宜用于观察药物对血尿酸水平的影剂，增加体内尿酸、尿酸前体（次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤）高尿酸血症建模方法，并利用别嘌呤醇和苯溴马隆对其进行检验。１６ft东大学博士学位论文材料与方法１．实验动物昆明种小鼠７２只，雄性，体重２０－２５克，由ft东大学实验动物中心提供。２．试剂与药物酵母膏（ｙｅａｓｔａｃｉｄＥＣｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅ９ｌｌ９４８）英国Ｏｘｉｏｄ公司；尿酸（ｕｒｉｃａｃｉｄ，２００．７２０—７）美国Ｓｉｇｍａ公司；氧嗪酸钾盐（ｏｘｏｎｉｃｓａｌｔｐｏｔａｓｓｉｕｍ９７％ＥＣ２ｌ８．６２７．５）美国Ａｌｄｒｉｃｈ公司；苯溴马隆（０６０３ｌｌ６）德国赫曼大药厂生产；别嘌呤醇（０６１００１）上海信宜万象药业股份有限公司；盐酸乙胺丁醇片（０６０４０５）上海医药集团有限公司信宜制药总厂．３．药物配制及使用方法酵母膏（ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｐａｓｔｅＹＥ）：用灭菌蒸馏水配成７５９／１００ｍｌ的混悬液，按照３０９／ｋｇ／ｄ体重的剂量每日分２次灌胃。尿酸（ｕｒｉｃａｃｉｄＵＡ）－用灭菌蒸馏水配成１２５０ｍｇ／１００ｍｌ的混悬液．按照２５０ｍｇ／ｋｇ体重的剂量一次性腹腔注射．氧嗪酸钾盐（ｏｘｏｎｉｃａｃｉｄ，ｐｏｔａｓｓｉｕｍｓａｌｔＯＡ）：用灭菌热蒸馏水配成１．５９／ｌ００ｍｌ的混悬液，按照３００ｍｇ／ｋｇ体重的剂量一次性腹腔注射。盐酸乙胺丁醇片（ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌＥ）：将药片压碎，加蒸馏水溶解、混匀，配成１０００ｍｇ／ｌ００ｍｌ，按照２５０ｍｇ／ｋｇ体重的剂量每日灌胃１次．苯溴马隆：将药片压碎，加蒸馏水溶解、混匀，配成按照２０ｍｇ／ｋｇ体重的剂量每日灌胃１次．别嘌呤醇：将药片压碎，加蒸馏水溶解、混匀，配成按照４０ｍｇ／ｋｇ体重的剂量每日灌胃１次．４．主要仪器设备罗氏全自动生化分析仪；ＬＤ４．２Ａ离心机（北京医用离心机厂）；Ｏｌｙｍｐｕｓ高倍光学显微镜；ＤＦ—ｌｌＯ型电子分析天平；ＪＥＭ．２００ＣＸ透射电子显微镜（日本ＪＥＯＬ公司）；会好优速尿酸测试仪（美国会好医疗１７ft东大学博士学位论文有限公司）：代谢笼：由ft东省实验动物中心提供。５．动物分组及建模将４８只小鼠随机分为６组，每组８只，分别为正常对照组（Ｃ）、酵母膏组（Ｙ）、尿酸组（ＵＡ）、氧嗪酸钾盐组（ＯＡ）、酵母膏＋乙胺丁醇组Ｅ）、氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组（ＯＡ＆Ｅ）。酵母膏按３０９／ｋｇ／ｄ量每日灌胃２次，共７天，乙胺丁醇按照２５０ｍｇ／ｋｇ的剂量每日灌胃１次，共７天。尿酸、氧嗪酸钾盐分别按２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ剂量在第７日取血前２小时腹腔注射一次。各组药物剂量见表１．５．１观察指标与测定方法第７日腹腔注射尿酸或氧嗪酸钾盐后２小时，鼠尾取血，用尿酸仪检测血尿酸构观察第７日取血后处死小鼠，迅速取出肾脏髓质组织，应用锋利刀片修成约的小块，置于４℃预冷的５％戊二醛中固定。取出固定好的组织块，用４℃０．１Ｍ的ＰＢＳ缓冲液反复冲洗，每次约２０ｍｉｎ；再用４℃ｌ％固定约Ｉｈ，４＂Ｃ条件下乙醇梯度（５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，ｌ００％）常规脱水３次，每次ｌ０ｍｉｎ，Ｅｐｏｎ８ｌ２包埋剂浸透，无水丙酮脱水３次，每次ｌ０ｍｉｎ，ｌ／２无水丙酮＋ｌ／２包埋剂ｌｈ，包埋剂过夜；后先经３７℃与４５℃加温各１２ｈ，２４ｈ；ＬＫＢ．ｖ超薄切片机切片，醋酸双氧铀染色３０ｍｉｎ，３０ｒａｉｎ，ＪＥＭ．２００ＣＸ透射电镜观察并摄片。６．检验模型的药物筛选作用采用氧嗪酸钾盐腹腔注射法建模，将２４只小鼠随机分为４组，每组６只，连续灌胃给药３天．正常对照组和模型组用生理盐水灌胃，苯溴马隆组按照２０ｍｇ／ｋｇ体重的剂量每日灌胃１次，别嘌呤醇组按照４０ｍｇ／ｋｇ日灌胃１次．除正常对照组外第３日灌胃给药前ｌ药后ｌ中饲养，收集每组动物第３—４日２４ｄ，时的尿液测尿尿酸浓度。７．统计学分析１８ft东大学博士学位论文所测数据以均值标准差（工４－Ｓ）２．０软件，用药前后比较、组间比较采用ｔ检验。１９ft东大学博士学位论文结果１．高尿酸血症动物模型建立方法１．１血０Ａ浓度的变化用药前，比较各组小鼠血尿酸水平无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。用药后，尿酸组、氧嗪酸钾盐组、氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组小鼠血尿酸值明显升高（尿酸组从ｌ０８．９＋１０．１１．ｔｍｏｌ／Ｌ升高到３０１．８＋＿２４．７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；氧嗪酸钾盐组从ｌｌ９．１±２０．６ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到２７６．３±３２．５ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组从１１５．７＋１７．４ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到２８２．２±４０．７ｐｍｏｌ／Ｌ），与用药前比较均有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０１）；而尿酸组、氧嗪酸钾盐组、氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组血尿酸值组间比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。酵母膏组和酵母膏＋乙胺丁醇组血尿酸值用药前后无明显差异（Ｐ＞Ｏ．０ｓ）。（见表２、图１）１．２血尿素氮浓度的变化用药后，酵母膏组和酵母膏＋乙胺丁醇组血尿素氮水平明显升高（酵母膏组从７．９５＋１．Ｉ４ｍｍｏｌ／Ｌ升高到ｌ１．３２±４．０４ｍｍｏｌ／Ｌ；酵母膏＋乙胺丁醇组从８．０９＋１．３０ｍｍｏｌ／Ｌ升高到ｌ２．０５±５．６６ｍｍｏｌ／Ｌ），与用药前比较有显著差异（Ｐ＜０．０１）。尿酸差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。（见表３、图２）１．３血肌酐浓度的变化用药后，酵母膏组和酵母膏＋乙胺丁醇组血肌酐水平明显升高（酵母膏组从４７．５５±６．１２ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到８９．２３十６．８３ｐ．ｍｏｌ／Ｌ；酵母膏＋乙胺丁醇组从４２．６９＋５．５７ｐ．ｍｏｌ／Ｌ升高到９０．０９十７．４２９ｍｏｌ／Ｌ），与用药前比较有显著差异（Ｐ＜０．０５）。尿酸组、氧嗪酸钾盐组和氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组血肌酐水平与用药前比较无显著差异（Ｐ＞０．０５）。（见表４、图３）１．４造模小鼠肾组织超微结构观察结果电镜显示空白组（图４Ａ）：态规则；酵母膏组（图４Ｂ）：肾近曲小管上皮细胞线粒体多处出现局部嵴缺失、空化；酵母膏＋乙胺丁醇组（图４Ｃ）：肾近ft东大学博士学位论文曲小管上皮细胞核周池肿胀、内质网扩张，形成大小不等的空泡；氧嗪酸钾盐组（图４Ｄ）：肾近曲小管上皮细胞线粒体结构正常。氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组（图４Ｅ）：肾近曲小管上皮细胞线粒体结构正常，部分线粒体基质呈低密度。尿酸组（图４Ｆ）：肾小管上皮细胞线粒体结构正常。２．检验模型的药物筛选作用与对照组比较，模型组小鼠的血ＵＡ水平明显升高，有显著差异（Ｐ＜Ｏ．０１）。与模型组相比，苯溴马隆组和别嘌呤醇组血ＵＡ值均明显降低，表明别嘌呤醇和苯溴马隆均可降低尿酸酶缺乏时异常升高的血ＵＡ值（Ｐ＜０．０Ｉ）．（见表５）２．２别嘌呤醇和苯溴马隆对尿ＵＡ浓度的影响与对照组比较，模型组小鼠的尿ＵＡ浓度明显升高（Ｐ＜０．０５）。与模型组比较，别嘌呤醇组尿ＵＡ浓度降低（Ｐ＜０．０５）而苯溴马隆组尿ＵＡ浓度明显增加，提示苯溴马隆促进了模型组小鼠尿尿酸的排泄（Ｐ＜０．０５）．（见表６）ft东大学博士学位论文讨１．建立高尿酸血症动物模型的意义论高尿酸血症和痛风是由于嘌呤代谢障碍，血尿酸增高引起的代谢性疾病。一般情况下，成人血尿酸值≥４ｌ６９ｍｏｌ／Ｌ即为高尿酸血症。由于尿酸的水溶性较差，血尿酸超过其溶解度时会形成结晶，沉积于关节、肾脏等处，引起关节炎症和肾脏损害。率约占总人口的Ｏ．１３％－０．３７％，年发病率约为０．２０％－０．３５％，而高尿酸血症的发病率远高于痛风的发病率，约为２％－ｌ８％…的痛风发病仅报道５８例，而到ｌ９９８年仅上海地区的一项流行病学调查显ft东沿海五市（青岛、烟台、东营、日照、威海）调查显示Ｈ引，高尿酸血症的患病率为ｌ３．１９％，痛风患病率为１．１４％。与ｌ９９５一ｌ９９６年对东营、日照和威海市的调查结果相比…近ｌｏｇ内，ft速增加，对高尿酸血症和痛风的研究已经逐渐受到重视。¨引，尿酸可以清除氧自由基，保护肝、肺、血管内皮细胞的ＤＮＡ，延缓自由基所引起的器官退行性病防御能力。临床还发现高尿酸血症常常与肥胖…１、糖尿病ｎ７１、高脂血症‘¨‘２０１、高血压Ⅲ一２１和冠心病旺３’于阐述各种与尿酸升高有关的疾病和医学现象亦有重要意义．２．高尿酸血症动物模型研究现状动物模型是研究疾病发病机理，寻找新型治疗药物的重要工具。动物模型设计应首先遵循相似性、再现性、可靠性、适用性、可控性ft东大学博士学位论文及易行性原则，而动物模型的评价则主要应从造模因素、模型症状表现、病理变化、反证治疗及模型稳定等方面进行．开展关于高尿酸血症和痛风的研究也应首先建立起可靠的高尿酸血症动物模型。而从现有对高尿酸血症动物模型的研究来看，不论在造模方法，还是实验动物的选择上，都存在很大的差异。由此可见，建立可靠的高尿酸血症动物模型是研究高尿酸血症及其相关疾病的发病、寻找新型治疗药物的基础。２．１动物的选择乳类动物体内存在尿酸酶，可以将尿酸进一步分解为尿囊素，尿囊素为无毒物水平升高发生高尿酸血症。有研究证实，禽类与人类的嘌呤核苷酸代谢途径相验动物，且普通实验室饲养不太方便。啮齿、哺乳类动物体内尿酸代谢与人类有很大区别，其体内的尿酸酶将尿酸分解为尿囊素排出体外，很少在体内蓄积，也不会在组织内沉积造成损害．因此，将啮齿、哺乳类动物造成高尿酸动物模型比较困难，印使造成模型，在其验证、评估药物作用部位及机制或在进行高尿酸血症发生机理研究时，均存在难以确定药物作用环节等。尽管存在这些不足，但大、小鼠是实验室的常用动物，操作、饲养较为方便，另外，在种属上与人类较为接近，都是哺乳动物，故仍广泛应用于高尿酸血症造模研究。在动物选择方面，除了动物种类外，还包括动物性别、年龄。虽有实验证明雌雄动物无明显差异，但在实际操作中，一般均用雄性动ft东大学博士学位论文物，因为雌雄动物及同性动物之间，血尿酸正常值差异较大，尤以雌鼠个体之间血尿酸值波动更为明显，可能与雌性动物激素分泌波动有关。实验证明年老的动关，但在实验中通常选用机体各项机能正常的年轻动物。２．２造模方法的研究酵母法：酵母含有丰富的蛋白质、核苷酸、Ｂ族维生素等物质，在体内充分水解能产生含氮的有机碱（包括嘌呤碱类、嘧啶碱类）及磷酸，大剂量的酵母进入体内，引起嘌呤代谢紊乱、黄嘌呤氧化酶活性增加，从而使尿酸的生成增加，产生高尿酸血症。陈光亮等凹引采用酵母膏灌胃建立小鼠高尿酸血症模型，发现以ｌ５－３０９／ｋｇ／ｄ连续灌胃卜２周，小鼠血清尿酸显著升高，别嘌呤醇及苯溴马隆均可降低此高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平。刘小青等ｎ引以酵母食饵饲养鹌鹑建立高尿酸血症模型，结果表明连续饲喂酵母食饵（１５９／ｋｇ）７天，鹌鹑血清尿酸水平明显升高，且稳定持续５周。补充尿酸或尿酸前体法：在体内，尿酸的产生过程表现为腺嘌呤核苷一次黄嘌呤核苷一次黄嘌呤一黄嘌呤一尿酸，最终尿酸经肾小管分泌排出体外．故增加体内尿酸、尿酸前体（腺嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤）的量或抑制肾小管尿酸的分泌均可导致体内血尿酸含量的增高而致高尿酸血症．陈光亮等妇＂给小鼠腹腔分别注射ｌ２５，２５０，５００，ｌ０００ｍｇ／ｋｇ尿酸，ｌｈ后取血测定血尿酸水平，结果发现小鼠腹腔注射尿酸可以形成高尿酸血症动物模型，以２５０ｍｇ／ｋｇ剂量较好，并且观察到小鼠腹腔注射尿酸２５０ｍｇ／ｋｇ，ｌＯｍｉｎ后血尿酸达高峰，高尿酸血症维持４ｈ以上．金沈锐等强钉使用黄嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ力Ｎ乙胺丁醇２５０ｍｇ／ｋｇ或５００ｍｇ／ｋｇ给小鼠灌胃５天，建立高尿酸血症模型。结果显示造模两组血尿酸水平均升高，与正常对照组小鼠血尿酸水平有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），以别嘌呤醇及苯溴马隆进行治疗反证，显示两组小鼠血尿酸均明显降低。唐灿等心引采用尿酸生成的前体物质次黄嘌呤（１０００ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射小鼠，能显著升高尿酸，制备了一种较为稳定的高尿酸血症模型，并对造模的量效、时效、动物性别、黄嘌呤氧化酶抑制２４ft东大学博士学位论文增加血尿酸的排泄或抑制黄嘌呤氧化酶活性。熊湘明等阳采用腺嘌呤（ＡｄｅｎｉｎｅＡ）加乙胺丁醇（ＥｔｈａｍｂｕｔｏｌＥ）动物模型，分高、中、低剂量组分别给药：ｍｇ／ｋｇ，Ｅ高剂量组Ａ２００２５０ｍｇ／ｋｇ：中剂量组ｋｇ，Ｅ２５０ｍｇ／ｋｇ；低剂量组Ａ５０ｍｇ／ｋｇ，Ｅ２５０ｍｇ／ｋｇ，结果高剂量组于第７天、１４天、２ｌ肾损害（ＢＵＮ、Ｃｒ）尿酸酶抑制剂法：人类缺乏尿酸酶，而实验易得的啮齿、哺乳类动物体内有尿酸酶，如何抑制动物体内的尿酸酶、建立一个接近于人类尿酸代谢的高尿酸血症动物模型成为研究的热点。ｌ９６５年Ｆｒｉｄｏｖｉｅｈ¨¨发现氧嗪酸钾盐（ｐｏｔａｓｓｉｕｍｏｘｏｎａｔｅ）无论在体内还是体外作为尿酸酶抑制剂都具有很强的活性，都可以有效地提高血液和尿液中的尿酸水平。此后Ｊｏｈｎｓｏｎ¨含有５％的氧嗪酸钾盐的饲料喂养大鼠３周，大鼠的血浆尿酸盐水平在几天内就可达到对照组的３倍，尿液中尿酸水平可达对照组的四倍，尿囊素可降至正常水平的一半．而当上述饲料中再加入ｌ％的尿酸喂养９天，血清中尿酸水平可达对照组的６；倍，尿中尿酸水平甚至可达２２倍．并且随着时间延长发生了类似于人类的尿酸性肾病。此后这种方法成为国外高尿酸血症造模的主流方法，但给药ｍｇ／ｋｇ）的方法在Ｗｉｓｔａｒ大鼠建立高尿酸血症动物模型。国内近年来也广为采用此种模型，如孔令东等钉在研究二妙丸对高尿酸血症小鼠的影响遍用此法评价药物的抗高尿酸血症作用ｎ５。圳．破坏尿酸酶基因及基因重组¨引通过首先破坏小鼠尿酸ft东大学博：ｔ学位论文氧化酶基因，再用基因重组法，获得尿酸酶缺乏的突变小鼠，从而造成高尿酸血症模型小鼠。但该方法使半数以上突变的小鼠活期不到４周，因此不是理想的动物模型。酸水平在实验前后变化不显著。因此，灌胃比饲料喂养效果好。２。３阳性药物的选择降低血尿酸，清除体内的尿酸池是高尿酸血症的治疗原则。降低血尿酸水平的药物在临床上可分为两大类，一是抑制尿酸合成的嘌呤氧化酶抑制剂；二是促进尿酸排泄的药物。抑制尿酸合成的药物别嘌呤醇（ａｌｌｏｐｕｒｉｎ０１）是次黄嘌呤的同分异构体，在体内可缓慢地氧化为黄嘌呤类似物氧嘌呤，别嘌呤和氧嘌呤均是黄嘌呤氧化酶的抑制物，其在体内与黄嘌呤氧化酶的亲和力大于次黄嘌呤及黄嘌呤，故别嘌呤醇是临床上常用的能有效减少尿酸生成、降低血及尿中尿酸水平的药物。促尿酸排泄的药物苯溴马隆（ｂｅｎｚｂｒｏｍａｒｏｎｅ）及其代谢产物均可主动抑制肾脏近曲小管的主动吸收，从而促进尿酸排泄。在本实验中我们选用了别嘌呤醇和苯溴马隆作为阳性对照药，以保证该研究的客观性。３．本研究高尿酸血症动物模型建立方法３．１建模方法的选择本实验共验证了５种建立高尿酸血症模型的方法，分别应用酵母膏（Ｙ）、尿酸（ＵＡ）、氧嗪酸钾盐（ＯＡ）、酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）、氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）五种药物或药物组合进行建模。尿酸组（ＵＡ）、氧嗪酸钾盐组（ＯＡ）以及氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）组小鼠用药后血尿酸水平较用药前均明显升高，分别升高了ｌ７６．７％，ｌ３１．９％，ｌ４３．２％，说明这三种方法均造模成功。氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）组血尿酸水平较单用氧嗪酸钾盐稍高，但二者无统计学差异。曾有报道，抗结核药物毗嗪酰胺可使８６％的服药者发生高尿酸血症∞＂，进一步研究发现其代谢产物吡嗪酸抑制了肾小管对ft东大学博士学位论文尿酸的分泌从而抑制肾脏对ＵＡ的排泄使血尿酸升高ｎ＂．金沈锐等ｎ。１曾报道用尿酸前体黄嘌呤加抗结核药乙胺丁醇灌胃给药５天，在小鼠成功建立了高尿酸血症模型。本实验中除验证氧嗪酸钾盐单用的建模效果，另观察氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇（ＯＡ＆Ｅ）联合应用的建模效果，但本实验数据显示联用乙胺丁醇组血尿酸值与单用氧嗪酸钾盐组无明显差异说明乙胺丁醇在本实验中促血尿酸升高的作用不明显，原因可能在于小鼠具有强大的排泄尿酸的能力，削弱了乙胺丁醇的抑尿酸排泄作用，另外近来有报道认为高浓度的吡嗪酸盐可以促进动物的尿酸¨的实验研究中也发现，给予黄嘌呤ｋｇ、乙胺丁醇２５０ｍｇ／ｋｇ和黄嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ、乙胺丁醇５００ｍｇ／ｋｇ均造模成功，但乙胺丁醇低剂量组中小鼠血尿酸水平更高，提示乙胺丁醇在不同浓度下对尿酸排泄的作用可能也存在差异。因此乙胺丁醇在高尿酸血症发生中的确切机制还有待进一步研究。建模成功的尿酸组和氧嗪酸钾盐组小鼠肾脏超微结构检查未发现明显异常，原因可能在于该法成模时间短，尿酸虽有明显升高，但短时间内难以对肾脏造成明显损害。联用乙胺丁醇组小鼠肾脏超微结构除肾近曲小管上皮细胞线粒体密度稍低外，无明显异常亦说明短期应用乙胺丁醇不会引起肾脏的损害。同样，检测这三组小鼠血尿素氮及肌酐水平与空白组比较无明显差异亦提示这些动物模型的肾功能无明显损害，与电镜结果相符。从升高血尿酸的情况来看，这三组模型对研究评价高尿酸血症适合，但不适合进行尿酸性肾病的相关研究．酵母膏组（Ｙ）、酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）组小鼠用药后血尿酸水平与用药前比较有升高趋势但无统计学差异，提示在本实验中这两种方法建立高尿酸血症模型未成功．酵母富含蛋白质、核苷酸、Ｂ族维生素等物质，在体内充分水解能产生含氮的有机碱（包括嘌呤碱类、嘧啶碱类）浓度不宜准确定量，同时用酵母膏灌胃时，按３０９／Ｋｇ体重剂量配ft东大学博：ｂ学位论文制时酵母膏已相当粘稠，而小鼠的灌胃容积量有限使溶媒量不宜过多，故酵母膏的浓度增加受限，较直接给予黄嘌呤、次黄嘌呤造模时嘌呤摄入量的可控性身存在遗传缺陷，如磷酸核糖焦磷酸合成酶（ＰＰＳ）呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）部分缺乏症、腺嘌呤磷酸核糖转移酶Ｔ）缺乏症等酶缺陷存在及（或）肾脏尿酸转运蛋白如ＵＲＡＴｌ酸水平升高不大。所以上述因素可能是造成酵母膏组（Ｙ）（Ｙ＆Ｅ）组血尿酸水平升高不明显的原因，但电镜检查发现酵母膏组和酵母膏＋乙胺丁醇（Ｙ＆Ｅ）此酵母膏灌胃制造的动物模型可能更适合作为尿酸性肾病来研究．３．２选择建模方法的依据通过对５种建立高尿酸血症模型方法的比较，决定选用氧嗪酸钾盐（ＯＡ）法作为本研究后续实验的建模方法，选择该方法的依据：（１）从建模动物小鼠与人类尿酸代谢的差异点入手，给予尿酸酶抑制剂抑制尿酸代谢，直接升高尿酸，效果肯定。（２）该法是目前国际上最普遍使用的高尿酸血症动物造模方法，在降尿酸药物筛选、评价研究时，与国外相关研究的可比性强。ft东大学博士学位论文（３）该法操作方便，干扰因素少，可重复性好。３．３对氧嗪酸钾盐建模方法的验证组血、尿ＵＡ浓度均低于模型组，亦符合其抑制ＵＡ合成的药理作用。ft东大学博士学位论文结论腹腔注射尿酸、腹腔注射氧嗪酸钾盐、腹腔注射氧嗪酸钾盐＋灌胃乙胺丁醇均可成功建立小鼠高尿酸血症动物模型。腹腔注射氧嗪酸钾盐因操作简便、可比性强、可重复性好被作为后续实验的造模方法。平，表明该模型可用来筛选降尿酸药物，并且协助判断药物的可能作用机理。ft东大学博士学位论文附表表１各造模组的药物及剂量Ｔａｂｌｅ１Ｔｈｅｎａｍｅａｎｄｄｏｓａｇｅｏｆｄｒｕｇｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ表２各组小鼠血尿酸水平变化Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏ用药前后比较，★★Ｐ＜０．０１ft东大学博士学位论文表３各组小鼠血尿素氮水平变化Ｔａｂｌｅ３Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ用药前后比较，★★Ｐ＜Ｏ．０ｌ表４各组小鼠血肌酐水平变化Ｔａｂｌｅ４Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ用药前后比较，★★Ｐ＜Ｏ．０１３２ft表５Ｔａｂｌｅ５药物对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｏｎｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｉｃｅ与对照组比较，★★Ｐ＜０．０１；与模型组比较，木木Ｐ＜Ｏ．０Ｉ表６Ｔａｂｌｅ６药物对高尿酸血症小鼠尿尿酸水平的影响Ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｒｕｇｏｎｕｒｉｎｅｕｒｉｃａｃｉｄｏｆｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａｍｉｃｅ与对照组比较，★★Ｐ＜０．０１，★Ｐ＜Ｏ．０５：与模型组比较，木Ｐ＜０．０５３３ft东大学博士学位论文附图图ｌ各建模组用药前后血尿酸水平的变化Ｆｉｇｕｒｅ１Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｉｃａｃｉｄｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ图２各建模组用药前后血尿素氮水平的变化Ｆｉｇｕｒｅ２Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐft东大学博士学位论文图３各建模组用药前后血肌酐水平的变化Ｆｉｇｕｒｅ３Ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｅｂｌｏｏｄｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ３５ftＡ重ＤＥＦ图４电镜扫描观察各造模组小鼠肾脏超微结构的变化Ａ正常对照组Ｂ酵母膏组Ｄ氧嗪酸钾盐组Ｆ尿酸组Ｃ酵母膏＋乙胺丁醇组Ｅ氧嗪酸钾盐＋乙胺丁醇组ft东大学博士学位论文ＴｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅＳａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｅｎｅｐｈｒｉｄｉａｌｔｉｓｓｕｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．ＡｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐＢｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔｇｒｏｕｐＣｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ＆ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐＤｏｘｏｎｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐＥｏｘｏｎｉｃａｃｉｄ＆ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌｇｒｏｕｐＦｕｒｉｃａｃｉｄｇｒｏｕｐ３７Ｆｉｇｕｒｅ４ft东大学博士学位论文参考文献叶任高，８６２．５．２ＣｈｏｉＨＫ，ＬｉｕＳ，ＣｕｒｈａｎＣ．Ｉｎｔａｋｅｏｆｐｕｒｉｎｅ－ｒｉｃｈｆｏｏｄｓ，ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｔｈｅＴｈｉｒｄＮａｔｉｏｎａｌＨｅａｌｔｈａｎｄｓｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｕｒｉｃａｃｉｄ；ＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎＳｕｒｖｅｙ．陆再英主编．内科学第６版．人民卫生出版社．２００４；ＮｕｔｒｉｔｉｏｎＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．２００５；５２：２８３—９．３１ｗａｔａｎｉＭ，ＷａｓａｄａＴ，１ｗａｍｏｔｏＹ，ｅｔａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒａｎｄｕｒａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＮｉｐｐｏｎＲｉｎｓｈｏ．２０００；５８：４３０－４．４ＪｉｎｇＦ，ＡｌｄｅｒｍａｎＭＨ．血清尿酸与心血管病死亡率—ｌ９９２年版．２００１；２０：５３．９．５陈光亮，徐叔云．高尿酸血症动物模型研究进展．中国药理学通报．２００４；２０：３６９－７３．验动物科学与管理．２０００；ｌ７：６．９．７唐灿，杨奎．高尿酸血症动物模型初探．中药新药与临床药理．２０００；ｌｌ：２９２－４．８周小舟，张盛光，杨晓等．腺嘌呤所致大鼠慢性肾功能衰竭的机制研究．基础医学与１１６ｉ床。ｌ９９７；ｌ７：５４．７．９奚九一，赵兆琳，鲁培基等．高尿酸血症肾病的实验动物模型研究．上海中医药杂志．２００１０Ｉ；ｌ０：ｌ０．２．何力群，聂永红，邹士林．新型尿酸性肾病动物模型的建立，上海实验动物科学．２００ｌ；２ｌ：２２．５．ＤＴ，ｅｔａ１．Ｅｓｔｉｍａｔｅｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｉｎｔｈｅｔｈｅ１ｌＬａｗｒｅｎｃｅＲＣ，ＦｅｌｓｏｎｏｆＤＴ，ＦｅｌｓｏｎａｎｄｏｔｈｅｒｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｒｔｈｒｉｔｉｓｒｈｅｕｍａｔｉｃＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ．Ｐａｒｔ１２ＬａｗｒｅｎｃｅＩＩ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．２００８；５８：２６－３５．ＦＣ，ｅｔａ１．ＥｓｔｉｍａｔｅｓｏｆｔｈｅＲＣ，ＨｅｌｍｉｃｋＣＧ，Ａｒｎｅｔｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｅｄｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌｄｉｓｏｒｄｅｒｓｉｎft东大学博士学位论文ｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ．１９９８，４ｌ：７７８－９９．１３苗志敏，赵世华，王颜刚等．ft东沿海居民高尿酸血症及痛风的流行病学调查．中华内分泌代谢杂志．２００６；２２：４２ｌ１４姜宝法，张源潮，徐晓菲等．ft东沿海地区痛风和高尿酸血症的流行病学调查．中国公共卫生．１９９９；１５：５０２．４．１５ＦａｎｇＪ，ＡｌｄｅｒｍａｎＭＨ．Ｓｅｒｕｍｕｒｉｃａｃｉｄａｎｄｃａｒｄｉｏ—ｖａｓｃｕｌａｒｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＴｈｅＮＨＡＮＥＳｌ／Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃｆｏｌｌｏｗ—ｕｐｓｔｕｄｙ１９７１・９２．ＪＡＭＡ．２０００；２８３：２４０４－ｌ０．１６ＴｓｕｎｏｄａＳ，ＫａｍｉｄｅａｃｉｄｂｙＫ，ＭｉｎａｍｉｏｆＪ，ｅｔａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｓｉｎｓｅｒｕｍｕｒｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎｉｎｓｕｌｉｎｏｆｉｎｏｖｅｒｗｅｉｇｈｔｄｉｅｔａｎｄａｎｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓ：ｅｆｆｅｃｔｌｏｗ—ｅｎｅｒｇｙｉｎｓｕｌｉｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ．ＡｍＪＨｙｐｅｒｔｅｎｓ．２００２；１５：６９７－７０１．１７ＣｏｓｔａＡ，ＩｇｕａｌａＩ，ＢｅｄｉｎｉＪ，ｅｔ２ａ１．Ｕｒｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｏｓｕｂｊｅｃｔｓａｔｒｉｓｋｏｆｏｆｔｈｅｔｙｐｅｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ３７２・５．１８ｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．２００２；５１：ＩｎｏｕｅＫ，ＮａｍｉｋｉＴ，１ｗａｓａｋｉＹ，ｅｔａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｕｒｉｃｈｕｍａｎｓａｌｉｖａｂｙｈｉｇｈ・ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄａｃｉｄｉｎｗｉｔｈｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＢＡｎａｌｙｔＴｅｃｈｎｏｌＢｉｏｍｅｄＬｉｆｅＳｃｉ．２００３；７８５：５７－６３．１９ＴｈｅＥｘｐｅｒｔＰａｎｅｌ．ＲｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＰｒｏｇｒａｍｈｉｇｈｅｘｐｅｒｔｐａｎｅｌｏｎＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌＥｄｕｃａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｉｎａｄｕｌｔｓ．ＡｒｃｈＩｎｔｅｒｎｂｌｏｏｄｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌＭｅｄ．１９８８；１４８：３６－６９．２０ＳｃｏｔＪＴ．Ｏｂｅｓｉｔｙａｎｄｈｙｐｅｒｕｒｉｃａｅｍｉａ．ＣｌｉｎＲｈｅｕｍＤｉｓ．１９７７；３：２３．３５．２ｌＤａｎｇＡ，ＺｈａｎｇＹ，ＬｉｕＧ，ｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｌｏｓａｒｔａｎａｎｄｉｒｂｅｓａｒｔａｎｏｎｓｅｒｕｍｕｒｉｃａｃｉｄｉｎｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｙｐｅｒｕｒｉｃａｅｍｉａｉｎＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＪＨｕｍＨｙｐｅｒｔｅｎｓ．２００６；２０：４５－５０．２２ＬｅｖｙＤ，ＫａｎｎｅｌＷＢ，ＶａｓａｎＲＳ，ｅｔａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｏ