基因工程抗体

基因工程抗体1第一页，共四十三页，2022年，8月28日抗体研究的世代第一代多克隆抗体第二代单克隆抗体第三代基因工程抗体2第二页，共四十三页，2022年，8月28日传统抗体抗原免疫所有抗体混合物123412341234脾脏淋巴結B細胞3第三页，共四十三页，2022年，8月28日

一.多克隆抗体（polyclonalantibody）：指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体的混合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）。

实际意义：（1）预防、治疗感染性疾病如：破伤风抗毒素血清抗破伤风胎盘球蛋白抗病毒感染（2）临床诊断，缺点：特异性差。

4第四页，共四十三页，2022年，8月28日

二.单克隆抗体（monoclonalantibody,McAb）由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的特异性抗体。特点：具有高度均一性。由杂交瘤细胞产生：杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞无限增殖；免疫B细胞合成、分泌特异性抗体。

5第五页，共四十三页，2022年，8月28日可生产有用抗体的

淋巴細胞

若与

癌细胞融合，则形成稳定而可培养的细胞株。癌细胞可培养生长浆细胞Bcell可分泌抗体融合瘤HybridomaYYYYYYYYYYYYYYYYYY细胞融合两组染色体混在一起也可以培养生長产生专一性抗体一個Bcell只产生一种抗体6第六页，共四十三页，2022年，8月28日7第七页，共四十三页，2022年，8月28日8第八页，共四十三页，2022年，8月28日鼠源单抗临床应用的障碍血清半衰期短，20h抗原抗体结合力、亲和力不够HAMA反应：8－10天出现，20－30天高峰，anti-id封闭与抗原结合位点，抗鼠抗体加速单抗清除。过敏休克9第九页，共四十三页，2022年，8月28日影响单抗与靶细胞或抗原结合引起变态反应和器官损害HAMA反应的示意图10第十页，共四十三页，2022年，8月28日基因工程抗体

单克隆抗体在诊断和治疗中具有重要的作用。但是鼠源性的单抗用于临床治疗易产生人抗鼠抗体（Humananti-MouseAntibody,HAMA)。利用基因工程技术，对抗体进行改造，减少鼠源性的成分，增加人源化的成分。利于单抗的临床应用。11第十一页，共四十三页，2022年，8月28日第二节鼠单抗的人源化1.人鼠嵌合抗体：鼠单抗的可变区序列＋人抗体恒定区序列2.利用计算机辅助设计，通过定点突变，改变 可变区的氨基酸，减少鼠源性。12第十二页，共四十三页，2022年，8月28日1人一鼠嵌合抗体(ChimericAntibodies)

人一鼠嵌合抗体是将鼠源单抗的可变区与人抗体的恒定区融合而得到的抗体。13第十三页，共四十三页，2022年，8月28日

构建嵌合抗体的大致过程是，将鼠源单抗的可变区基因克隆出来，连到包含有人抗体恒定区基因及表达所需的其它元件(如启动子、增强子、选择标记等)的表达载体上，在哺乳动物细胞(如骨髓瘤细胞、CHO细胞)中表达。构建重组表达载体14第十四页，共四十三页，2022年，8月28日2鼠单抗可变区的人源化

尽管嵌合抗体的免疫原性已降低很多，但有时它仍可能引发较强的免疫反应。为了进一步降低抗体的鼠源成分，发展出CDR移植技术。

CDR移植即把鼠抗体的CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体称CDR移植抗体或改型抗体，也就是人源化抗体。

15第十五页，共四十三页，2022年，8月28日16第十六页，共四十三页，2022年，8月28日

经过CDR移植，抗体的免疫原性很低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源化抗体。17第十七页，共四十三页，2022年，8月28日18第十八页，共四十三页，2022年，8月28日2002年完全人源化单抗humira获得批准上市，这是单克隆抗体药物发展具有里程碑意义的大事，预示着单克隆抗体药物一个迅猛发展的新时代的来临。Humira是一种治疗类风湿关节炎的单克隆抗体药物。19第十九页，共四十三页，2022年，8月28日第三节小分子抗体和融合蛋白抗体1.小分子抗体：改造基因，截取具有生物活性的区段，加以重组表达。2.融合蛋白抗体：抗体的部分基因片段＋其他蛋白的基因。其他蛋白如蓖麻蛋白或绿脓杆菌外毒素等。20第二十页，共四十三页，2022年，8月28日噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术是抗体工程领域的重要进展。在该技术出现以前，基因工程抗体主要是用DNA重组技术对已有单抗进行改造。而抗体库技术发展到了用基因工程技术克隆新的抗体，使抗体工程进入了一个全新的时期。21第二十一页，共四十三页，2022年，8月28日由于人杂交瘤-单抗体系的低效性，使人单抗的制备一直进展缓慢。抗体库技术为人单抗的制备提供了有效的手段。对于能获得体内免疫的抗原，从被免疫者获取淋巴细胞构建抗体库很容易得到高亲和力的人源抗体。22第二十二页，共四十三页，2022年，8月28日随着抗体库技术的成熟，大容量抗体库的构建，已能够不经免疫从总抗体库筛选出高亲和力的人源抗体。23第二十三页，共四十三页，2022年，8月28日治疗型单克隆体－基因时代明星单抗药物主要集中在肿瘤和自身免疫疾病的治疗。全球销售额500亿美元。美国占90%。国内单抗药物发展迅速，上市的国产单抗药物有9个，处于临床研究阶段的有23个。销售额10亿美元。24第二十四页，共四十三页，2022年，8月28日国际上已批准上市的单抗适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段移植排斥大肠癌冠心病淋巴瘤移植排斥炎症性肠病、类风湿CD317-1A血小板受体ⅡbⅢaCD20CD25TNF-аOKT3PanorexReoProRituxanSimulectRemicade鼠单抗鼠单抗人－鼠嵌合抗体人－鼠嵌合抗体人－鼠嵌合抗体人－鼠嵌合抗体19861995(德国)1994199719981998、199925第二十五页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段移植排斥乳腺癌RVS感染AMLCLLCD25HER-2RSVF蛋白CD33CD52ZanapaxHerceptinSynagisMylotargCAMPATH人源化抗体人源化抗体人源化抗体人源化抗体－化疗药物交联物人源化抗体1997199819982000200126第二十六页，共四十三页，2022年，8月28日正在进行临床开发中的

基因工程抗体适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段银屑病IL－8CD11a(IgG1)ICAM-3CD80CD2CD3ABX－IL8Anti-CD11aICM3IDEC-114MEDI-507Smartanti-CD3Human(人源)Humanized(人源化)HumanizedPrimatizedHumanizedHumanized(IgG)ⅡⅠ，Ⅱ临床前ⅠⅠⅠ/Ⅱ27第二十七页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段风湿性关节炎Complement(C5)TNF-аTNF-аTNF-аCD4CD45G1.1D2E7CDP870InfliximabIDEC-151MDX-CD4HumanizedHumanHumanized(Fab)Chimeric(IgG1)(嵌合)Primatized(IgG1)Human(IgG)ⅡⅢⅡFDA批准（1999）ⅡⅠ28第二十八页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段克罗恩病，节段性回肠炎溃疡性结肠炎自身免疫病TNF-аTNF-аа4ß7CD4CD3InfliximabCDP571LDP－02OrthoCloneOKT4ASmartanti-CD3Chimeric(IgG1)Humanized(IgG4)HumanizedHumanized(IgG)HumanizedFDA批准（1998）ⅡⅡⅡⅠ/Ⅱ29第二十九页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段系统性红斑狼疮多发性硬化症C5CD40LCD40LComplement(C5)VLA-4CD40L5G1.1AntovaIDEC-1315G1.1MEDI-507AntegrenIDEC-131HumanizedHumanized(IgG)HumanizedHumanized(IgG)Humanized(IgG)HumanizedⅠⅡ(继续)ⅡⅠ/ⅡⅡⅡ30第三十页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段自身免疫出血性病症气喘/变态反应CD64(FcgR)IL-5IL-5IL-4IgECD23MDX-33SCH55700SB-240563SB-240683rhuMab-E25IDEC-152HumanHumanized(IgG4)HumanizedHumanizedHumanized(IgG1)PrimmatizedⅡⅡⅡⅡⅢⅠ31第三十一页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段移植物抗宿主疾病同种异体移植排斥CD147CD2CD2CD3CD3ABX-CBLBTI-322MEDI－507Orthoclone/OKT3SMATanti-CD3Murine(IgM)(小鼠)Rat(IgG)(大鼠)HumanizedMurine(Ig2a)HumanizedⅢⅡⅠ/ⅡFDA批准（1996）Ⅰ/Ⅱ32第三十二页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段同种异体移植排斥CD25CD25ß2-integrinCD4CD147ZenapaxSimulectLDP-01OKT4AABX-CBLHumanized(IgG1)Chimeric(IgG1)Humanized(IgG)Humanized(IgG)Murine(IgM)FDA批准（1997）FDA批准（1998）Ⅰ/ⅡаⅡⅢ33第三十三页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段同种异体移植排斥中风青光眼抗凝血剂CD40LCD18ß2-integrinTGF－ß2FactⅦAntovaAnti-LFA-1LDP-01CAT-152CorsevinMHumanized(IgG)Murine[F(ab’)2]Humanized(IgG)HumanChimeric(Fab)Ⅰ/Ⅱ(继续)ⅢⅠ/ⅡаⅡⅠ34第三十四页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段冠状血管成形术并发症心肌梗死罗氏肉瘤病毒GlycoproteinⅡbⅢareceptorPDGFßRCD18FproteinReoProAbciximabCDP860Anti-CD18SynagisHumanized(IgG)Humanized[F(ab’)2]Humanized[F(ab’)2]Humanized(IgG1)Ⅰ/ⅡаⅡⅡFDA批准（1998）35第三十五页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段艾滋病乙型肝炎巨细胞病毒中毒性休克一般癌症Gp120HepBCMVTNF-аCD14VEGFPRO542OstavirProtovirMAK-195(SEGAND)IC14Anti-VEGFCD4fusionHumanHumanMurine[F(ab’)2]?Humanized(IgG1)ⅡⅡ(批准)ⅢⅢⅠⅢ36第三十六页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段卵巢癌结肠病肺病头、颈部病变CA12517-1ACellsurfaceantigenAnti-idiotypicGD3epitopeEGFROvaRexPanorexBEC2IMC－C225MurineMurine(IgG2a)Murine(IgG)MerckKGaAChimeric(IgG0Ⅱ/Ⅲ德国批准（1995）ⅢⅢ37第三十七页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段乳腺病慢性淋巴细胞白血病急性粒细胞白血病非何杰金淋巴瘤HER2/neuCD52CD33CD20CD22HerceptinCampath1/(LDP03)SmartRituxanLymphoCideHumanized(IgG1)Humanized

(IgG1)M195Chimeric(IgG1)Humanized(IgG)FDA批准（1998）生物制品许可申请蛋白质设计FDA批准Ⅰ/Ⅱ38第三十八页，共四十三页，2022年，8月28日适用病症靶抗原抗体名称抗体来源临床阶段非何杰金淋巴瘤黑色素瘤HLAHLADR抗id(GD2)*Smart1D10Oncolym(Lym-1)TriGemHumanizedRadiolabelledmurineMurineⅠⅡ/ⅢⅡ39第三十九页，共四十三页，2022年，8月28日