roche lightcycler荧光定量pcr仪-lc480使用操作说明

2010Sino-MDgeneTechnologyLC480使用操作说明席超技术支持部2010Sino-MDgeneTechnology第一步双击打开数据库第二步双击打开LC480软件2010Sino-MDgeneTechnology输入用户名和密码确认数据库打开2010Sino-MDgeneTechnology1、定量试验开始一个新的实验2010Sino-MDgeneTechnology设定反应体积选择检测通道查看选择的检测通道在相应的大步骤内选择收集荧光设定循环数设定反应大步骤设定每个大步骤内具体的实验参数，比如温度，时间等2010Sino-MDgeneTechnology在相应的大步骤内设定收集信号的小步骤2010Sino-MDgeneTechnology如果需要对设定的实验条件在数据库中进行保存或调出可以选择saveas或apply，之后点击开始，进行实验。2010Sino-MDgeneTechnology点击这里可以查看实验实时的信息2010Sino-MDgeneTechnology设置样品子集编辑子集2010Sino-MDgeneTechnologyAbs：绝对定量Rel：相对定量Sca：HRMColor：色差补偿Tm：溶解曲线Melt：杂交探针基因分型Endpt：水解探针基因分型设置样品类型设置样品名称样品编辑结果导入样品编辑结果导出编辑样品样品编辑结果在数据库中的保存和调用2010Sino-MDgeneTechnology选择分析方法结果分析2010Sino-MDgeneTechnology点击分析标准曲线的错误率、扩增效率、斜率、截距。2010Sino-MDgeneTechnology重复样品的平均Cp值、Cp值的方差、平均浓度、浓度的方差Cp值、实际浓度等数据2010Sino-MDgeneTechnology单击鼠标右键后选择ExportChart选择保存的格式输入文件名选择保存的路径保存图片2010Sino-MDgeneTechnology高可信度/高灵敏度标准曲线的保存和调用选择检测通道色差补偿2010Sino-MDgeneTechnology如果选择这种分析方法2010Sino-MDgeneTechnology首先选择分析的循环区间之后调整阈值线2010Sino-MDgeneTechnology首先调整阈值线接着点击最后点击2010Sino-MDgeneTechnology保存分析结果选择保存的路径和文件名称2010Sino-MDgeneTechnology首先选择报告所包含的内容生成报告接着点击2010Sino-MDgeneTechnology保存报告选择保存路径及下面的文件名2010Sino-MDgeneTechnology开始一个新的实验2、溶解曲线试验2010Sino-MDgeneTechnology设定反应体积选择检测通道查看选择的检测通道在相应的大步骤内选择溶解曲线设定循环数设定反应的大步骤设定每个大步骤内具体的实验参数，比如温度，时间等在相应的大步骤内选择收集荧光2010Sino-MDgeneTechnology在相应的大步骤内设定收集信号的小步骤2010Sino-MDgeneTechnology设定溶解曲线相关参数点击开始试验2010Sino-MDgeneTechnology设置样品子集2010Sino-MDgeneTechnology编辑样品选择其他项目的编辑同前面的定量试验。2010Sino-MDgeneTechnology分析样品首先选择2010Sino-MDgeneTechnology点击分析2010Sino-MDgeneTechnology2010Sino-MDgeneTechnology可以看到峰左侧77.2℃至77.7℃之间所有样品的熔解曲线基本一致；峰右侧83℃开始所有样品熔解曲线基本一致。记下以下数值：左侧77.2-77.7，右侧>832010Sino-MDgeneTechnology点击2010Sino-MDgeneTechnology接着选择首先点击最后点击2010Sino-MDgeneTechnology选择2010Sino-MDgeneTechnology将前面Tmcalling得到的数值填入:左侧Melting设置77.2-77.7,右侧Melting设置83-842010Sino-MDgeneTechnology对于单个样品，以左侧温度区间内荧光强度平均值作为100%，以右侧温度区间内荧光强度平均值为0每个样品100%区域和0区域都完全重合建议温度区间一般跨度1度对于特殊情况可以适当减少，以保证所有样品Tm熔解曲线部分完全吻合为准（如本例由于二聚体存在，温度曲线为77.2-77.7）2010Sino-MDgeneTechnology接着选择计算首先点击2010Sino-MDgeneTechnology选择2010Sino-MDgeneTechnology保存同前面的定量试验2010Sino-MDgeneTechnology首先选择报告所包含的内容生成报告接着点击2010Sino-MDgeneTechnology保存报告选择保存路径及下面的文件名2010Sino-MDgeneTechnology