免疫分析技术生化分析

免疫分析技术生化分析第一页，共三十八页，2022年，8月28日

脊髓灰质炎Polio

狂犬病Rabies

风疹Rubella肝炎HepatitisA

肝炎HepatitisB

流感Influenza白喉diphtheria

天花Smallpoxvirus轮状病毒RotavirusPertussis百日咳第二页，共三十八页，2022年，8月28日Comparisonofmaximumandcurrentmorbidityforvaccine-preventablediseases

DiseaseMaximumcasesYear1992Percentagechange白喉Diphtheria麻疹Measles腮腺炎Mumps百日咳pertussis脊髓灰质炎

Polio(paralytic)风疹RubellaCRS破伤风Tetanus乙型流感HeamophilusinfluenzaetypeB乙型肝炎HepatitisB206,939694,134152,209265,26921,26957,68620,0001,56020,00026,6111921194119681934195219691964,6519231984198542,2372,5724,083416011451,41216,12699.9999.7598.3198.4699.9899.7299.9597.1292.9439.40第三页，共三十八页，2022年，8月28日疫苗的原理疫苗是将病原微生物及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。

免疫分析法是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法。第四页，共三十八页，2022年，8月28日

第一节抗原第五页，共三十八页，2022年，8月28日抗原(Antigen，Ag)：能够刺激机体产生免疫应答，并且能与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)特异性结合的物质。第六页，共三十八页，2022年，8月28日抗原的两种基本特性：（1）免疫原性(immunogenecity)：指抗原分子能够诱导机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。

（2）抗原性(antigenicity，又称免疫反应性)：指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)发生特异性结合的性质。第七页，共三十八页，2022年，8月28日

完全抗原（completeantigen)：具有免疫原性和抗原性的物质，如：异种动物的血清、细菌、病毒等。半抗原（hapten，又称不完全抗原incompleteantigen）：无免疫原性，只有抗原性的物质，如：多为某些简单的小分子物质，如青霉素、磺胺。载体（carrier）：赋予半抗原以免疫原性的蛋白质。半抗原+蛋白质完全抗原第八页，共三十八页，2022年，8月28日半抗原

+载体抗体BT完全抗原BBBT在青霉素进入体内后，如果其降解产物和组织蛋白结合，就获得了免疫原性，并刺激免疫系统产生抗青霉素抗体。当青霉素再次注射人体内时，抗青霉素抗体立即与青霉素结合，产生病理性免疫反应，出现皮疹或过敏性休克，甚至危及生命。

第九页，共三十八页，2022年，8月28日第一部分抗原的类型一．根据抗原性质：完全抗原、半抗原第十页，共三十八页，2022年，8月28日

二．根据与人体的亲缘关系：

1.异种抗原（xenogenicAg）：来源于不同物种的抗原，如微生物、动物蛋白对于人是异种抗原；

2.同种异型抗原（allogenicAg）：来源于同一物种的不同个体的抗原，如来自于另一个个体的血型抗原，主要组织相容性抗原等；

3.自身抗原（autoantigen）：来自于自身的抗原，如眼晶状体蛋白等。第十一页，共三十八页，2022年，8月28日

三．根据抗原的合成方式：天然抗原：异己抗原自身抗原人工抗原：人工结合抗原人工合成抗原基因工程抗原第十二页，共三十八页，2022年，8月28日第二部分医学上重要的抗原一.病原微生物：

1.细菌性抗原：细胞壁：蛋白质、脂多糖等。鞭毛：蛋白质夹膜：多糖

2.病毒性抗原：衣壳：蛋白包膜：糖蛋白

3.其它：螺旋体、真菌等。第十三页，共三十八页，2022年，8月28日痢疾杆菌

霍乱弧菌伤寒杆菌链球菌大肠杆菌第十四页，共三十八页，2022年，8月28日狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒病毒（viruses）流感病毒第十五页，共三十八页，2022年，8月28日真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)疟原虫第十六页，共三十八页，2022年，8月28日二．细菌的外毒素与类毒素

外毒素：某些病原菌生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物，为次级代谢产物。其主要成分为可溶性蛋白质。

类毒素：经0.3%～0.4%甲醛处理过的失去毒性保留免疫原性的外毒素。仍然具有刺激人体产生抗毒素，以起到机体从此对某疾病具有自动免疫的作用。它们广泛地应用于预防某些传染病、注射到动物体内用于制备抗毒素。第十七页，共三十八页，2022年，8月28日

三．异种动物血清异种动物的血清蛋白对人具有免疫原性。如：马的血清进入人的体内，马血清中的许多蛋白质就成为人的抗原物质。

第十八页，共三十八页，2022年，8月28日四．血型抗原：

——已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30种

1.ABO血型系统：血型抗原（RBC）抗体（血清）

———————————————————A型A抗原抗B抗体

B型B抗原抗A抗体

AB型AB抗原无抗A、抗B抗体

O型无A、B抗原抗A、抗B抗体

———————————————————第十九页，共三十八页，2022年，8月28日2.Rh血型系统：

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阳性。

第二十页，共三十八页，2022年，8月28日

实际意义新生儿溶血症孕妇(Rh-)→胎儿(Rh+)

↓↓抗Rh抗体+新生儿RBC(Rh+)↓

溶血反应

第二十一页，共三十八页，2022年，8月28日

第二节抗体第二十二页，共三十八页，2022年，8月28日抗体（antibody,Ab）:

机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的B细胞分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）:

具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。

所有抗体都是Ig，但并非所有Ig都具抗体活性。第二十三页，共三十八页，2022年，8月28日血清疗法：一种利用被动免疫的疗法。将已被免疫的动物血清（抗血清）注射到相应疾病的患者身上以达到治疗的目的。这种血清称为治疗血清。恢复期病人的血清也可治疗其他病人。

第二十四页，共三十八页，2022年，8月28日第二十五页，共三十八页，2022年，8月28日第一部分免疫球蛋白的结构

第二十六页，共三十八页，2022年，8月28日N端C端可变区恒定区VHVLCH1CH2CH3CL铰链区V区：和抗原特异性结合的关键部位C区：决定抗体分子的异种抗原性第二十七页，共三十八页，2022年，8月28日第二部分单克隆抗体和基因工程抗体抗原决定簇：决定抗原性的特殊化学基团。大多存在于抗原物质的表面，有些存在于抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后才暴露出来。一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。如白喉类毒素有8个抗原决定簇，流感病毒有40多个抗原决定簇。

第二十八页，共三十八页，2022年，8月28日一.多克隆抗体病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，即针对多种抗原决定簇的抗体。易出现非特异性交叉反应。第二十九页，共三十八页，2022年，8月28日二、单克隆抗体单克隆抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的。所有制备抗体的细胞都是同一个细胞的拷贝，因此其产生的抗体完全相同。第三十页，共三十八页，2022年，8月28日杂交细胞设计方案：

一个B淋巴细胞---只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞---能无限增殖第三十一页，共三十八页，2022年，8月28日单克隆抗体是大规模细胞培养的产物，而不是直接来自于动物血清。制备单克隆抗体的过程涉及到细胞培养、细胞融合等多种步骤。第三十二页，共三十八页，2022年，8月28日杂交瘤技术产生的3个技术关键1.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：

B淋巴细胞（Blymphocytes）：

接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。

B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡---短命细胞第三十三页，共三十八页，2022年，8月28日骨髓瘤细胞（myelomacells）：恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活---长命细胞。

经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株---没有抗体分泌物。第三十四页，共三十八页，2022年，8月28日2.细胞融合技术：第三十五页，共三十八页，2022年，8月28日3.杂交瘤细胞的筛选：不能合成

DNA死亡不能合成

DNA死亡第三十六页，共三十八页，2022年，8月28日单克隆抗体的应用1．检验医学诊断试剂

作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体有着特异性强、纯度高、均一性好