GMP质量体系醋酸氢化可的松检验操作规程

PAGE4PAGE1目的：为检验为检验醋酸氢化可的松规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。范围：适用于醋酸氢化可的松的检验。职责：检验室主任、检验员。规程：性状:本品为白色或几乎白色的结晶性粉末，无臭。本品在乙醇或氯仿中微溶，在水中不溶。1.1熔点：取本品，按熔点测定法(SOP-QC-307-00)，熔点为216-224℃，熔融时同时分解，为符合规定。1.2比旋度：取本品，精密称取250mg，置25ml量瓶，加二氧六环溶解并定量稀释至刻度，摇匀，按(SOP-QC-310-00)测定，比旋度为+158°至+165°为符合规定。a×25[a]=W×（1－B）式中：a：旋光仪读数；W：样品称重量（mg）；B：水分含量（%）。1.3吸收系数:精密称取本品50mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精吸2ml，置100ml量瓶中加无水乙醇，稀释至刻度，摇匀，照分光光度法(SOP-QC-301-00)，在241nm的波长处测定吸收度，吸收系数（E1cm1%）为383-407为符合规定。2.鉴别2.1试剂与仪器2.1.1 硫酸苯肼试液 2.1.2 硫酸、硫酸溶液（1→2）2.1.3 乙醇制氢氧化钾试液 2.1.4 小型3用水箱2.1.5 烧杯、试管 2.1.6 红外分光光度计2.1.7 移液管（10ml，2ml） 2.1.8 电子天平(万分之一克)2.2检验步骤2.2.1取本品约0.1mg，置试管，加乙醇1ml溶解后，加新制的硫酸苯肼试液(SOP-QC-349-00)8ml，在70℃加热15分钟，即显黄色为符合规定。2.2.2取本品约2mg，加硫酸2ml溶解，即显黄至棕黄色，并带绿色荧光为符合规定。2.2.3取本品约50mg，加乙醇制氢氧化钾试液2ml(SOP-QC-349-00)，置水浴上加热5分钟，冷却，加硫酸溶液（1→2）2ml，缓缓煮沸1分钟，即发生醋酸乙酯的香气为符合规定。2.2.4取本品，照红外分光光度法(SOP-QC-302-00)测定，红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集552图）一致为符合规定。3.检查3.1试剂与仪器3.1.1 氯仿-甲醇（9：1） 3.1.2 1，2-二氯乙烷-甲醇-水（95：5：0.3）3.1.3 碱性四氮唑蓝试液 3.1.4 移液管(2ml)3.1.5 电子天平(万分之一克) 3.1.6 容量瓶(100ml，10ml)3.1.7 微量进样器 3.1.8 层析缸3.1.9 称量瓶 3.1.10 恒温烘箱3.1.11 喷雾器 3.1.12 硅胶G薄层板3.2项目与步骤3.2.1其他甾体:取本品，精密称取30mg，置10ml量瓶中，加氯仿-甲醇(9:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加氯仿-甲醇(9:1)稀释至刻度，作为对照品溶液；照薄层色谱法(SOP-QC-304-00)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1，2-二氯乙烷-甲醇-水（95：5：0.3）为展开剂，展开后，晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液(SOP-QC-349-00)，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色对照溶液的主斑点比较，不得更深为符合规定。3.2.2干燥失重：称取本品约1g，置称量瓶中，按干燥失重测定法(SOP-QC-325-00)，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5%为符合规定。4.含量测定4.1试剂与仪器4.1.1 C18硅胶色谱柱 4.1.2 醋酸氢化可的松对照品4.1.3 炔诺酮对照品 4.1.4 甲醇4.1.5 容量瓶(100ml，25ml)，单标移液管（5ml）4.1.6 电子天平（万分之一克）4.1.7 称量瓶 4.1.8 注射器(10ml)，过滤器，滤膜4.1.9 高效液相色谱仪4.2检验步骤按高效液相色谱法(SOP-QC-306-00)检测。4.2.1色谱条件与系统适用试验用C18硅胶色谱柱，流动相为甲醇-水（65：35），流速为每分钟1ml，检测波长为240nm。量取醋酸氢化可的松对照溶液与内标溶液的混合对照溶液[*]20μl，注入液相色谱仪，醋酸氢化可的松峰和内标物质峰的分离度应大于2.0，理论板数按醋酸氢化可的松峰计算应不低于1300。4.2.2内标溶液的制备：取炔诺酮30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。4.2.3醋酸氢化可的松对照溶液与样品溶液的制备以及测定醋酸氢化可的松对照液与内标溶液的混合对照溶液的制备：[*]取醋酸氢化可的松对照品约35mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇30ml，温热溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液。样品溶液与内标溶液的混合样品溶液的制备以及测定：取本品约35mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇30ml，温热溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，量取10μl注入液相色谱仪，将混合对照溶液按同法测定，按下式计算本品中醋酸氢化可的松（C23H32O6）的折干含量，应在97.0%-102.0%为符合规定。Cd=CW/（1－B%）Cd：本品的折干含量；CW：本品的湿品含量；B%：本品的含水百分数；A1×WsCW＝f××100%As×W1A1：样品溶液中醋酸氢化可的松色谱峰面积或峰高；AS：内标物溶液中炔诺酮的峰面积或峰高；W1：样品的称样量（g）；Ws：内标物的称样量（g）；f:为校正因子；As/Wsf=A2/W2