化妆品微生物五项检测

化妆品微生物五项检验第一页，共二十八页。菌落总数（Aerobicbacterialcount）：化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。菌落总数检验菌落总数的测定便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。第二页，共二十八页。48小时出结果（30-300）：测试流程数据处理混合平板的制备细菌的培养检查结果、观察与计数供试液的制备书写检验记录单第三页，共二十八页。为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。TTC亦不可多加会抑制菌落生长第四页，共二十八页。推荐了解：人员培训能力掌握的检验重要指标。有条件可做视具体样品测试结果。在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的有效性。接种阳性菌计算回收率第五页，共二十八页。未检出2天，检出3-4天耐热大肠菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指标来评价化妆品的卫生质量,推断化妆品中有否污染肠道致病菌的可能。耐热大肠菌群

检验操作流程第六页，共二十八页。产酸：黄色产气：气泡产酸产气书写检验记录单不产酸不产气增菌培养供试液的制备配培养基和稀释液检查结果判断44.5±0.5℃24-48h分离培养蛋白胨水培养最终结果判断44.5±0.5℃24±2h靛基质特征菌落36±1℃18~24h双倍胆盐乳糖EMB琼脂液面玫瑰红色紫黑色★粪大肠菌群检查流程图镜检第七页，共二十八页。结果报告根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出耐热大肠菌群。第八页，共二十八页。未检出2天，检出4天铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。铜绿假单胞菌

检验操作流程该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。在自然界中分布甚广，空气、水、土壤第九页，共二十八页。最终结果判断增菌培养供试液的制备书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液革兰染色、镜检→氧化酶试验绿脓菌素试验生化试验硝酸盐还原试验

42℃生长试验明胶液化试验★铜绿假单胞菌检查流程图SCDLP培养基十六烷三甲基溴化铵琼脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周围有水溶性蓝绿色素镜检第十页，共二十八页。十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基黄绿色菌膜灰白色湿润氧化酶试验粉红/紫红色第十一页，共二十八页。绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验N2明胶液化试验明胶培养基（高层）明胶液化第十二页，共二十八页。被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。结果报告第十三页，共二十八页。未检出2天，检出3天金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。金黄色葡萄球菌

检验操作流程该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。第十四页，共二十八页。革兰染色、镜检→生化试验:血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验最终结果判断增菌培养供试品的处理书写检验记录单分离纯化无菌落或无特征菌落配培养基和稀释液36±1℃36±1℃SCDLP培养基或7.5%NaCl肉汤24±2hBairdParker’s或血琼脂24~48h特征菌落金黄色葡萄球菌检查流程图镜检耐盐分第十五页，共二十八页。BairdParker’s平板灰/黑色血浆凝固酶试验血浆凝块液态血浆甘露醇高盐琼脂第十六页，共二十八页。凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。结果报告第十七页，共二十八页。霉菌和酵母菌数测定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妆品检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。（5-50）霉菌和酵母菌

检验操作流程第十八页，共二十八页。革兰氏染色操作流程第十九页，共二十八页。设备：恒温培养设备高压灭菌器（验证）超净工作台（生物安全柜）均质器(旋涡混合器)天平（0.1g）显微镜（可要可不要无硬性要求）保证检验结果正确第二十页，共二十八页。常规洁净工作台设置第二十一页，共二十八页。目前大部分微生物实验室布局第二十二页，共二十八页。人员操作方面：无菌操作，避免污染；一定专业技术或工作经验（招聘与外部审核时）相互协作；测试结果的证明。第二十三页，共二十八页。日常维护：设备的计量与保证；超净台及时清洁与杀菌（操作前后半小时）；检验后材料的及时处理；环境卫生（沉降菌的检测每周）。第二十四页，共二十八页。油性样品如何处理稀释液生理盐水-极性溶剂、液体石蜡-非极性溶剂、吐温80-非离子型表面活性剂，分子一端是亲水基团，一端是亲油基团，常用作增溶剂和油/水乳化剂。决定了加入的顺序。问题2第二十五页，共二十八页。微生物许可检验项目问题3检验项目非特殊用途化妆品特殊用途化妆品育发类染发类烫发类脱毛类美乳类健美类除臭类祛斑类防晒类菌落总数○○

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○○耐热大肠菌群○○

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○○金黄色葡萄球菌○○

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○○铜绿假单胞菌○○

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○○霉菌和酵母菌○○

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○○第二十六页，共二十八页。④一个样品包装内有两个以上