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疟原虫分子诊断和基因检测溯源的原理、意义以及全球基金疟疾项目镜检的质量控制

广西壮族自治区疾病预防控制中心寄生虫病防制所一、背景、任务和目的1、《广西壮族自治区消除疟疾实施方案》（2010-2020年）2、中国全球基金疟疾项目（2010.7.1-2015.6.30）

病例核实（省级CDC任务部分）：1、网报所有疟疾病例进行分子诊断核实（基因分析？）2、疑似疟疾病例（定义）进行分子诊断核实病例溯源（省级CDC任务部分）：方式：个案调查，基因溯源二、疟原虫分子诊断简介检测目标基因：PlasmodiumssrRNA基因方法：巢式PCR疟原虫PCR检测引物引物名称序列特异性Tm(℃)产物大小(bp)rPLU55’-CCTGTTGTTGCCTTAAACTTC-3’Plasmodiumsp.56.061100rPLU65’-TTAAAATTGTTGCAGTTAAAACG-3’51.26rFAL15’-TTAAACTGGTTTGGGAAAACCAAATATATT-3’P.f56.57

205rFAL25’-ACACAATGAACTCAATCATGACTACCCGTC-3’63.40rVIV15’-CGCTTCTAGCTTAATCCACATAACTGATAC-3’P.v62.03120rVIV25’-ACTTCCAAGCCGAAGCAAAGAAAGTCCTTA-3’63.40rOVA15’-ATCTCTTTTGCTATTTTTTAGTATTGGAGA-3’P.o56.57

800rOVA25’-GGAAAAGGACACATTAATTGTATCCTAGTG-3’60.67rMAL15’-ATAACATAGTTGTACGTTAAGAATAACCGC-3’P.m59.30144rMAL25’-AAAATTCCCATGCATAAAAAATTATACAAA-3’53.83Pmk85’-GTTAGCGAGAGCCACAAAAAAGCGAAT-3’P.knowlesi

62.00

153Pmkr95’-ACTCAAAGTAACAAAATCTTCCGTA-3’55.42三、疟原虫基因溯源简介原理和方法：微卫星DNA（SSR）与SSR检测技术；高度多态性、个体特异性；PCR（间日疟），半巢式PCR（恶性疟）工作程序：建立本地疟原虫SSR数据库。四、工作平台与工作要求：工作平台：省级疟疾检测参比实验室（包括镜检和分子生物学）；市、县、乡疟疾监测网络。工作要求：疟疾病例以及疑似疟疾病例（定义）要求进行详细的、可靠的病例个案调查，血片（至少2片），干燥的滤纸血样（至少2份）。五、关于镜检的质量控制方法：现场督导、批量测试、随机抽样（血片复核）和盲法复检；要求：完善镜检实验室网络，建立镜检数据库；相关记录和表格：《疟疾病例个案调查表》《发热病人疟原虫血片镜检登记表》（表18）《疟原虫血片镜检复核统计表》（表20）《疟原虫镜检督导表》（表37

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