氯霉素ELISA检测试剂盒说明书

氯霉素（Chloramphenicol）ELISA检测试剂盒说明书一、概要（chloramphenicol,CAP）本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。1.5小时。二、试验原理ELISATMB得出样品中氯霉素的含量。三、适用范围（血清、肠衣、牛奶、奶粉等样本中氯霉素的残留量。四、交叉反应率氯霉素 100%；琥珀氯霉素… 92%；

┅┅七水合硫酸锌（分析纯（供奶样用）┅┅葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)（供尿样本用）┅┅醋酸钠（分析纯（供尿样本用）┅┅肝素钠（分析纯（供血样本用）┅┅醋酸（分析纯（供尿样本用）----去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原）2、标准液6（2ml瓶）0ppb,0.025ppb,0.075ppb,0.225ppb,0.675ppb,2.025ppb3（2ml瓶）100ppb47ml57ml、底物液A液 7ml、底物液B液 7ml87ml9、20×浓缩洗涤液 40ml10、2×浓缩复溶液 ………………50ml七、溶液的配制配液1:C液（供奶样专用）0.36M二水合亚硝基铁氰化钠NaFe(CN)·NO2H）溶氯霉素-葡萄糖苷酸………57%。 液

2 5 2五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置

称取10.7g二水合亚硝基铁氰化钠加去离子水溶解定容至100ml。配液2:D液（供奶样专用）1M七水合硫酸锌（ZnSO·7HO）溶液4 2┅┅均质器┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅洗耳球┅┅容量瓶：100ml、500ml┅┅玻璃试管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、15ml、50ml┅┅微量移液器：单道20l～200l、100l～1000l多道250l试剂：┅┅乙酸乙酯（分析纯）┅┅乙腈（分析纯）┅┅正己烷（分析纯）┅┅二水合亚硝基铁氰化钠（分析纯（供奶样用）

称取28.8g七水合硫酸锌加去离子水溶解定容至100ml。配液3:pH4.8100mM醋酸钠溶液（供尿样本用）2.4g1.2ml500ml配液4:乙腈-水溶液84ml16ml混匀配液5:复溶工作液2×1：1（12×浓缩复溶液+1份去离子水取样本的复溶，复溶工作液在4个月。配液6:洗涤工作液20×1：19比进行稀释（120×+19水）4可保存一个月。八、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：，，定结果减去空白试剂的测定结果为样本中氯霉素的实际残留量。组织样本空白对照试剂的制备┅┅取4ml乙酸乙酯在氮气流下完全干燥；┅┅用1ml正己烷充分溶解；1ml复溶液工作液（51min，静置分层后去除上层正己烷相；┅┅取100l水相用于分析。未处理的样本冷冻保存。处理后的样本可在2-824h己烷之前，吹干的样本保存效果更好。分上层有机相，605～10min消除乳化后，再重复离心步骤。（一）组织(鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法┅┅用均质器均质组织样本；┅┅3.0±0.05g50ml聚苯乙烯离心管中，加6ml10min，3000g室温（20-25℃）10min；┅┅移取4ml上层有机相（约相当于2g的样本）至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；┅┅1ml30s1ml工作液（51mi，3000g上，室温（20-25℃）15min；┅┅除去上层有机相，取下层100ull用于分析。,1ml正己烷溶解干燥的1ml10s2ml－3ml。（二）鸡血前处理方法┅┅用加有肝素钠单位/ml血）（建议采血注射器也用肝素钠润洗1h，待析出血浆后，3000g以上，15℃离心10min；┅┅取1ml血浆至10ml聚苯乙烯离心管中，加2ml乙酸乙酯振荡1min；┅┅室温（20-25℃）下静置待水相与有机相完全分层或

3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；┅┅移取上层的有机相至15ml干净的玻璃试管中，于50～60℃氮气流下吹干；┅┅1ml复溶工作液（见配液52min溶解干燥的残留物；┅┅取100l用于分析。（三）┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心直至尿液样本清亮；┅┅2ml50ml0.5mlpH4.8100mM醋酸钠缓冲液（3）合；┅┅加40l葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)372h（或过夜温（20-25℃）放置；┅┅8ml1min；┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心10min，取出10ml干燥的玻璃试管中，于50～60气流下吹干；┅┅1ml复溶工作液（52min燥的残留物；┅┅100l用于分析。（四）肠衣前处理方法┅┅用均质器均质样本注：干样本需剪碎（长度不超5mm）后再均质，湿样本需用去离子水漂洗20min以上(去除表面的盐份)，沥干后再进行均质；┅┅称取1.0±0.05g均质后的样本至50ml聚苯乙烯离心管10ml10min，3000g室温（20-25℃）10min；┅┅取出5ml上层有机相（相当于0.5g的样本）至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干；┅┅加入1ml正己烷，涡动30s，再加0.5ml复溶工作液（见配液5）强烈振荡1min3000g以上，室温（20-25℃）离心5min；┅┅除去上层有机相，取下层100l用于分析。（五）牛奶和奶粉前处理方法牛奶前处理方法┅┅脂肪；┅┅5ml10ml150lC液（1）15s，再150lD液（2，1min充分混合；┅┅3000g以上，15℃离心10min，移取上层液；┅┅用复溶工作液（见配液5）以等体积稀释上层液（+1；┅┅取100l用于分析。注：如果离心后仍然浑浊，再重复脱脂过程。牛奶前处理方法┅┅取牛奶样本,3000g℃离心肪；┅┅5ml10ml250（1）250（2）10min（如没有℃再进行离心；┅┅移取2.2ml上层液（相当于2ml奶样）至另一个聚苯乙烯离心管中，加入 4ml乙酸乙酯上下振荡10min；┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心10min；┅┅2ml（1ml，10ml50～60℃下吹干；┅┅0.5ml（52min干燥的残留物；┅┅取100l用于分析。由于阴性样本可能会产生背景干扰（在某些情况230.15ppb

3000g以上，15℃离心10min；┅┅3ml3ml4.5ml乙5min，3000g15℃离心n┅┅10ml60℃水浴氮气流下吹干；┅┅1ml30s2ml（51min，3000g5min；┅┅除去上层有机相，取下层100l用于分析。九、检测步骤测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-2℃。2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。3ELISA一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温30min2cutof奶粉前处理方法

断值。

保存于2-8℃。3、洗涤工作液在使用前也需回温。┅┅2.00.0510ml10ml┅┅1mlC（1）1mlD（2）充3000g4～110min（℃再进行离心；┅┅移取3.6ml上层（相当于0.6g奶粉至另一个聚苯乙烯离心管中，加入 6ml乙酸乙酯上下振荡10min；┅┅3000g以上，室温（20-25℃）离心10min；┅┅4ml（0.4g10ml50～60℃┅┅0.4ml2min┅┅取100l用于分析。由于阴性样本可能会产生背景干扰（在某些情况230.15ppb

4、编号：2位置。5加标准品加标准品100ul到对应的微孔中，50ul孔后，再加抗体工作液50ul25℃避光环境中反30min。6、洗板：作液（6）250l4－5（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破。7A50lB5025℃避光环境15min（8。cutof（六）蛋类前处理方法

断值。

850l450nm处（450/630nm┅┅用均质器低速均质鸡蛋样本，使得蛋清和蛋黄充分混合；┅┅3.00.0515ml9ml（4n

5minOD值。十、结果判定结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而2成负相关。1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本10.410，样本2的吸0.9200.05ppb为1.701；0.15ppb为1.342；0.45ppb0.869；1.35ppb0.1831的浓度范围

准确度：鸡肉/鸡肝猪肉/猪肝虾鱼 85±10%7 0 ± 1 0 %85±10%是1.35ppb-4.05ppb再乘以其对应的稀释倍数即可得出样70±15%本中氯霉素残留的浓度范围；样本2的浓度范围是0.15精密度：ppb-0.45ppb氯霉素残留的浓度范围。2、定量分析（双孔一个标准（0标准）100%，即BB百分吸光度值（%）＝ ×100%B0B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0ppb标准溶液的平均吸光度值标准曲线的绘制与计算的半对数为横坐标,分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际残留量。（欢迎来电索取）样本的稀释倍数：组织样品稀释倍数：0.5尿液样品稀释倍数：11方法处理牛奶样品稀释倍数：2奶粉样品稀释倍数：1蛋类样品稀释倍数：2十一、检测方法灵敏度、准确度、精密度试剂盒灵敏度：0.05ppb样本最低检测限：

试剂盒的变异系数均小于10%十二、注意事项120℃或试剂及样本没有回到室温OD值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。4、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。5、储存条件保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。6、试剂变质的迹象0（450/630n0.（450n<0.5