药物分析笔记

第一章:1、现行药典2015年版，于2015年12月1日执行。最新药典：2020年7月份公布，12月30号执行。2、《中国药典》的分为四部：一部收载药材及饮片、植物油脂和提取物、成分制剂和单味制剂。二部收载化学药品、抗生素、生化药品以及放射性药品。三部收载生物制品。四部收载通那么、药物辅料。3、药典的内容为凡例、正文、附录和索引四局部组成。凡例是为解释和使用《中国药典》，正确进行质量检验提供指导原那么；正文局部为所收载药品或制剂的质量标准。附录：药典中的通用方法、制剂通那么、通用检测方法、一般杂志检查方法、一般鉴定试验、有关物理常数测定法等。索引：中英文索引，用于查找药典中的各条目。4、GLP：《药物非临床研究质量管理规范》；GMP：《药品生产质量管理规范》；GSP:《药品经营质量管理规范》；GCP：《药品临床试验管理规范》；AQC：《分析质量管理》第二章：生物药物杂志检查1、杂志的分类：按化学类别和特性：有机杂质和无机杂志。按来源分类：有关物质（包括化学反响的前体、中间体、副产物和降解产物等）、其他杂质和外来物质。按结构关系分为：其他画体、其他生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物。按毒性分类：毒性杂质和普通杂质。2、杂质来源：(1)生产过程中引入：未反响完全的原料、反响的中间体和副产物；生产过程中使用的试剂和溶剂；生物药物中可能存在的一些生物活性与有效成分有很大差异的无效、低效异构体或晶体；以及在制剂的过程中也会产生新的杂质。(2)贮存过程中受外界条件的影响，引起生物药理性质改变而产生杂质：生物药品在贮存的过程中，尤其是贮藏保存不善，在温度、适度、日光、空气等影响下，或者因为微生物的作用，引起药物发生氧化、分解、水解、晶型转变、聚合、异构化、潮解和发霉等变化，使药物外观性状发生改变，降低药物的稳定性和质量，甚至失去疗效或对人体产生危害。3、杂质限量要求计算：杂质限量是指药物中所含杂志的最大容许量，通常不要求准确测定其含量，只要其含量在一定的范围即可。通常用百分之几(％)或百万分之几(10-6)表示。非特定杂质的含量一般不得超过0.10%,重金属最大的容量不超过50x10-6。(计算公式P31)4、一般杂志的检查：(1)氯化物的检查法：原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比拟，以判断供试品中氯化物是否超过了限量。考前须知：有色供试品处理；有色供试品的消色法；干扰物除去法；浑浊度的比拟；滤纸过滤。(P32)(2)硫酸盐检查法：原理：药物中微量的硫酸盐在稀盐酸酸性条件下，利用硫酸根离子与氯化钢在盐酸酸性溶液中生成硫酸钢的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比拟，以判断药物中硫酸盐是否超过限量。SO2+Ba—>BaS04I考前须知：供试品加稀盐酸后，如不澄清，可用滤纸滤过，但应先用稀盐酸使成酸性的水洗净滤纸上的硫酸盐供试液如有色，可采用内消色法处理。《（中国药典乂2020年版）采用25%氯化领溶液，呈现的挥浊较稳定，使用时不必新制。经验证，放置1个月后，反响的效果无显著改变。（3）铁盐检查：原理：利用铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氨酸铁生成红色可溶性硫氨酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比拟。反响在HCI酸性溶液中进行，可防止Fe3+水解。（4）重金属的检查：（-）硫代乙酰胺法：原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下（PH3.5醋酸盐缓冲液）水解产生硫化氢，与微量重金属离子（以Pb2+为代表）生成黄色到棕黑色的硫化物悬液，与-定量标准铅溶液同法处理后所呈颜色比拟，白色背景，自上而下。以判断供试品中重金属的含量是否符合限量规定要求。硫代乙酰胺法适用于在实验条件下供试液澄清、无色，对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。考前须知：⑴本法适宜的目视比色范围为10-20pigPb/35ml0重金属的含量以Pb计算在20ug（相当于标准铅液2ml时），加硫代乙酰胺试液后所显黄褐色最适于目视法观察。如小于10ug那么显色太浅，大于30|jug那么显色太深，均不利于观察与区别。⑵溶液pH值对金属离子与硫化氢呈色影响较大，pH在3.0〜3.5,硫化物沉淀比较完全，酸度太大或太小都使颜色显色浅，结果不正确。⑶供试品如有色可采用外消色法或内消色法消除干扰。⑷供试品中如果有微量高铁离子存在时，能在弱酸溶液中氧化硫化氢溶液而析出硫，产生浑浊而影响重金属的比色，因此必须除去。《中国药典》（2020年版）中利用在供试管和对照管中分别加入维生素C或盐酸羟胺0.5〜1.0g,使Fe3+还原成Fe2+,再依法检查。（-）炽灼残渣法原理：当硫代乙酰胺法不能检查重金属时，可采用该方法。通过高温炽灼破坏供试品，加硝酸加热处理后，加盐酸溶解，最后按第一法进行检查。该法适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。考前须知⑴炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属的回收越低。用该法进行重金属检查时，⑵操作过程中加入的硝酸必须蒸干，氧化氮必须除尽，否那么会析出硫而影响比色。⑶用该法检查含有钠盐和氟的有机药物时，在炽灼的过程中会腐蚀瓷土甘摒,所以应该使用粕土甘摒或硬质玻璃蒸发皿。（三）硫化钠法原理：以硫化钠作为显色剂，供试品在碱性条件下生成PbS微粒混悬液。与一定量同法处理的标准铅溶液比拟，颜色不得更深。该法适用于溶于喊而不溶于稀酸或在稀酸中会生成沉淀的药物。（5）神盐检查法（一）古蔡法（二）USP法：原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量的珅反响，生成具有挥发性的珅化氢。珅化氢把二乙基二硫代氨基甲酸银还原为红色的胶态银。与相同条件下制备的一定量标准珅盐溶液产生的红色进行比拟，判断药物中珅盐是否过量。5、水分测定：费休氏法测定水分。6、特殊杂质的检查：第三章：生物药物的平安性检查1、热敏原检查法：（1）原理：家兔对热原的反响与人基本相似，因而本法系将一定剂量的供试品溶液，以静脉注射的方式注入家兔体内，在规定的时间内，对家免体温升高情况进行观察，通过观察结果判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。⑵结果判断：在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6C,并且3只家兔体温升高总和低于L3C;或在复试的5只家兔中，体温升高0.6C或高于0.6C的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5C或低于3.5C,均判定供试品的热原检查符合规定。好在初试的3只家兔中，体温升高0.6C或高于0.6C的家免超过1只;或在复试的5家兔中，体温升高0.6C或高于0.6C的家兔超过1只:或在初试、复试合并8只家兔的温升高总和超过3.5C,均判定供试品的热原检查不符合规定。2、细菌内毒素的检查法：(1)原理：通过邕试剂与细菌内毒素产生凝集反响的实验原理来检测或半定量由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。(2)内容包括壁试剂灵敏度复核试验和干扰实验、检查法。2、无菌检查：(1)薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。检查品种包括水溶液供试品、水溶性固体供试品、非水溶性供试品、可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品、无菌气(喷)雾剂供试品、装有药物的注射器供试品、具有导管的医疗器具(输血、输液袋等)供试品。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45klm，滤膜直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜外表。供试液经薄膜过滤后，假设需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一-般为100ml,总冲洗量不得超过500ml，最高不得超过1000ml,以防止滤膜上的微生物受损伤。(2)直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，检查品种包括混悬液等非澄清水溶液供试品、固体供试品、非水溶性供试品、敷料供试品、肠线，缝合线,灭菌医用器具供试品、放射性药品等。取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐培养基和胰酪大豆豚液体培养基中。除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的供试品数量相等;对生物制品进行无菌检查时，硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆豚液体培养基接种的供试品数量为2:lo除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%,同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml,胰酪大豆月东液体培养基每管装量不少于10ml。在对供试品进行检查时，培养基的用量和高度同方法适用性试验。将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养不少于14d;接种生物制品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置30〜35度培养，一份置20到25度培养。培养期间应定期观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14d后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液不少于1ml转种至同种新鲜培养基中，将原始培养物和新接种的培养基继续培养不少于4d,观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊;或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。・结果判定阳性对照管应是生长良好，阴性对照管不得有菌生长，否那么，试验无效。假设供试品管均澄清，或虽显浑浊，但经确证无菌生长，那么判供试品符合规定;假设供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。当符合以下至少一个条件时方可判试验结果无效：⑴无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。⑵回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。⑶供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当弓I起的。试验假设经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法检查，假设无菌生长，那么判定供试品符合规定;假设有菌生长，那么判定供试品不符合规定。3、宿主细胞内蛋白质检测法：ELISA.蛋白质印迹法。原理：ELISA是一种免疫测定，基础为抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加人酶反响的底物后，底物被酶催化成为有色严物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。实验过程和结果判断（P61）4、残留DNA的检测法：DNA探针杂交法、荧光免疫法。DNA探针杂交法：5、抗生素残留量检测法：（1）原理：依据在琼脂培养基内抗生索对微生物的抑制作用，比拟对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小来检测抗生索的残留量。（2）结果判定对照品溶液有抑菌圈，阴性对照溶液无抑菌圈。供试品溶液抑菌圈的直径小于对照品溶液抑菌圈的直径时判为阴性;否那么判为阳性。第四章：微生物限量检查标准：通过不同的给药途径分别检测什么？给药途径口服给药

固体制剂

液体及半固体制剂控制菌口腔黏膜给药制剂

齿龈给药制剂

鼻用制剂不得检出大肠埃希德（1g或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙口菌（10g或10ml）耳用制剂

皮肤给药制剂不