微生物培养和应用

微生物培养和应用【目标导航】

1.了解培养基的成分及种类。2.掌握无菌操作的技术方法。一、培养基1．按照物理形态可将培养基分为

和

两种。2．培养基含水、

、

和无机盐等物质。在牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏主要提供

等营养，蛋白胨主要提供

等营养，NaCl可提供

。液体培养基固体培养基碳源氮源碳源、磷酸盐和维生素氮源和维生素无机盐二、无菌技术1．消毒指的是使用温和的

方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括

和芽孢)。常用的消毒方法有

消毒法和巴氏消毒法，以及用

进行消毒。2．灭菌指的是用强烈的

杀死物体内外

(包括

和孢子)。常用的灭菌方法有灼烧灭菌、

和

。物理或化学孢子煮沸化学药剂理化因素所有的微生物芽孢干热灭菌高压蒸汽灭菌判断正误：(1)所有的培养基中都要加入琼脂(

)(2)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(

)(3)培养基只有液体培养基和固体培养基两种(

)(4)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(

)(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌(

)答案(1)×

(2)√

(3)×

(4)√

(5)×一、培养基的成分及其类型1．碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳营养要素来源功能碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物①构成细胞物质和一些代谢产物；②有机碳既是碳源又是能源有机碳源糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等氮源无机氮源无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等将无机氮合成含氨的代谢产物有机氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物生长因子维生素、氨基酸、碱基①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应2．培养基类型划分划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红－美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈现深紫色，并带有金属光泽)1．自养型微生物和异养型微生物的培养基成分的主要差别是什么？ 答案自养型微生物可以直接利用一些无机碳源如CO2中的碳，而异养型微生物只能利用有机物中的碳，所以二者的培养基的主要差别是碳源不同。2．液体培养基为什么适合用于工业生产？ 答案因为在液体培养基中营养物质和菌体接触更充分，可以提高菌体和培养基的物质交换效率，所以适合用于工业生产。3．如果要从土壤中分离某种微生物，所用的培养基从物理性质和用途两个方面进行分类，该培养基分别属于何种培养基？ 答案从物理性质分该培养基为固体培养基，从用途分该培养基属于选择培养基。4．某同学将霉菌和金黄色葡萄球菌混在一起，请你用培养基培养的方法将其中的霉菌选择出来。 答案可在培养基中加入青霉素，然后将混合微生物在该培养基中培养，存活的就是霉菌。1．下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是(

)原料①②③④蛋白胨/g10101010乳糖/g5555蔗糖/g5555KH2PO4/g2222A.①③B．②①C．②④D．③①伊红/g0.4美蓝/g0.065琼脂/g1020NaCl/g20蒸馏水/mL1000100010001000【问题导析】(1)四种培养基中共有的成分不能作为判断培养基种类的依据。(2)培养基①中因为含有

，所以可以鉴定大肠杆菌；培养基③中因为含有

，所以可以用来选择培养金黄色葡萄球菌。伊红、美蓝高浓度的食盐解析在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。答案D【一题多变】1．表格中的蛋白胨主要为微生物提供何种成分？ 答案主要为微生物提供氮源和维生素。2．乳糖和蔗糖在培养基中的作用是什么？ 答案可以为微生物提供碳源和能源。3．如果用培养基培养某种自养微生物，则该配方中的哪种物质可以去除？ 答案乳糖和蔗糖。二、消毒和灭菌的比较项目概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min一般物品巴氏消毒法：70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温的液体，如牛奶消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外线照射30min接种室、接种箱或超净工作台灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌：用酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧接种环、接种针或其他金属工具干热灭菌：160～170℃下灭菌1～2h玻璃器皿(吸管、培养皿)、金属工具的灭菌注意：消毒与灭菌最大的区别是芽孢和孢子是否存活。灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃条件下，灭菌15～30min培养基及容器的灭菌1．一些需要保持生物活性的物体如实验者的双手应该使用何种无菌操作？为什么？ 答案应使用消毒的方法，因为用灭菌的方法会杀死或破坏人的皮肤组织细胞。2．对于一些没有生物活性的物体如培养基、接种环、培养皿等要使用何种无菌技术？ 答案应使用灭菌的方法，其中培养基一般采用高压蒸汽灭菌，接种环使用灼烧灭菌，培养皿等玻璃器皿使用干热灭菌。3．无论是接种微生物还是制备培养基中的倒平板，都要在酒精灯火焰附近进行，请简述理由。 答案在酒精灯火焰附近进行接种或倒平板，目的是造成一个无菌环境，避免操作过程中受到杂菌的污染。2．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(

) ①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法

A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥

C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤【问题导析】(1)人的双手具有组织细胞，牛奶中的蛋白质成分在高温作用下会变性，所以对于它们不能采用

的方法处理。(2)无生物活性且容易燃烧的物体如培养基，可采用

进行无菌操作；无生物活性且不易燃烧的物体如培养皿和接种环，可以采用

进行无菌操作。灭菌高压蒸汽灭菌法灼烧灭菌解析培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅