细胞激活与增殖炎症性介质产生前炎症性细胞因子分泌金属蛋白酶及

青藤碱的药理学根底研究香港浸会大学中医药学院周华2021.4.22长沙©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104222主要内容青藤碱的来源及性质类风湿性关节炎的简介青藤碱的抗关节炎药理作用及作用机理青藤碱的其它药理作用©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104223一.青藤碱的来源及性质来源©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104224ImagescourtesyofQianX.Z.(plant)andDr.ZhaoZ.Z.(crudedrug)防己科青藤及毛青藤青風藤化学性质中药青风藤中提取的生物碱免疫抑制剂临床用于治疗类风湿性关节炎等疾病小白鼠口服半数致死量：580±51mg/kg©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104225青藤碱吗啡二.類風濕關節炎的簡介

©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042271、類風濕性關節炎〔RheumatoidArthritis，RA〕的性質難治性自身免疫性疾病以關節的慢性炎症和最終的骨關節破壞為特徵尚無理想治療方法及藥物，需長程用藥©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104228在歐洲，類風濕性關節炎的記載至少可追朔至17世紀©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042292、類風濕性關節炎的發病特點人類發病率約為0.3~2.1%，全世界約有1800-6000萬患者中国為低發病區，約為0.35%致殘率高、嚴重影響生存品質：遷延性RA患者的20年死亡率為35%，致殘率為80%，其中19%為嚴重致殘40歲左右為高發病年齡，嚴重影響勞動力，醫療經濟負擔沈重©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042210為全身系統性免疫功能失調所致，病因未明，病理複雜主要表現為慢性關節周圍組織及關節滑膜炎症，關節軟軟骨及骨破壞，反復發作，病情纏綿不愈SmolenJ.S.etal,2002,NatureReview(2)479©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042211細胞激活

與增殖炎症性介質

產生前炎症性細胞

因子分泌金屬蛋白酶及其組織抑制因子平衡失調T淋巴細胞巨噬細胞滑膜纖維細胞關節滑膜炎症關節軟骨及骨破壞關節滑膜增生關節疼痛關節功能

障礙關節僵硬關節炎症類風濕性關節炎的發病機理和主要臨床表現IL-1TNF-IL-6©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042212Centralroleoftumornecrosisfactorα

(TNF-α)andinterleukin-1(IL-1)inthepathogenesisofrheumatoidarthritis.Anti-TNF,antiTNFantibody;TNFR,TNFreceptor;IL-1Ra,IL-1receptorantagonist;VSM,vascularsmoothmuscle;MMPs,matrixmetalloproteinases.©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422133、西藥治療RA的現狀和特點非甾體類抗炎藥〔NSAIDs〕：對乙酰氨基酚、扶他林、萘普生、布洛芬等緩解病情藥〔DMARDs)：甲氨喋呤、萊弗米特、羥基氯喹、柳氮磺氨吡啶、青黴胺、環胞素A、金製劑等生物製劑〔抗TNF及IL-1抗体〕：依拉昔普〔etanercept〕、英利昔單抗〔infliximab〕、阿那白滯素〔anakinra〕糖皮質激素：強的松、地塞米松等這些藥物對許多病例的療效欠佳，或僅能緩解其症狀，副作用較多，有的藥物價格昂貴©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042214有效藥物數量有限對抚慰劑對照臨床實驗數据的系統綜述说明，僅局部藥物的臨床療效得到支持InfliximabCyclosporineSulphasalazineParenteralgoldAuranofinG.Jones.

Rheumatology,2003:42:6-13LeflunomideMethotrexate(MTX)CorticosteroidsIL-1receptorantagonist©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042215幾種常用藥物的平安性資料甲氨喋呤：7.5~15mg/每週，大鼠LD50：60mg/kg不良反應：胃腸道症狀、口腔炎、皮疹、脫髮，骨髓抑制、肝臟毒性、肺間質變〔罕見但嚴重，可能危及生命〕肝臟毒性發生率：47/1000(SinghG,JRheumatol(1991))萊弗米特10~20mg/次/日；大鼠LD50:100-250mg/kg不良反應：腹瀉、瘙癢、肝臟毒性、脫髮、皮疹肝臟毒性發生率：296/104000(約0.3%)，嚴重肝毒性：129/104000〔EMEA〕©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042216環胞素A3~5mg/kg/天，口服；大鼠LD50：94mg/kg不良反應：高血壓、肝腎毒性、神經系統損害、繼發感染和腫瘤，以及胃腸道反應、齒齦增生、多毛等，48%患者6個月內由於毒副作用而停藥(SinghG,JRheumatol(1991))依拉昔普30天治療需約US$1500，完成一個治療週期約需US$15000©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422174、中醫治療類風濕關節炎的特點RA屬於中醫學“痹症〞範疇中醫藥治療RA具有悠久的歷史，?黃帝內經?已有記載治療原則：袪風，散寒，除濕，清熱，止痛等整體性治療，但同時對不同患者根據不同病情和病理階段，以及不同體質，進行“個體化治療〞©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042218應用中藥復方治療：多種化學成分，通過多環節和多靶點的藥物作用，達致對疾病的複雜性病理進行整合性調節；副作用小，病者的耐受性較好，適合于長程治療病情控制后，較穩定而不易復發©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042219現行市場流通的中藥製劑青藤鹼類正清風痛寧片劑、注射液帕夫林〔白芍總皂苷〕雷公藤屬植物雷公藤製劑、火把花根片、昆明山海棠片含附子烏頭類風濕骨痛膠囊、風濕聖藥膠囊含虫類藥物的複方製劑©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042220三.青藤碱的抗关节炎药理作用

及作用机理LiuL.Int.J.lmmunopharmac.,Vol.18,No.10,pp.529543,1996©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422211、对佐劑性關節炎(AA)的影响MeasurementsIncidenceofarthritisArthriticscoreandpawvolumeErythrocytesedimentationrate(ESR)Leucocytecount015101520…36Drugadmimistration:

SinomeninewasgiventoratsrightaftertheinjectionofMTonday0untilday36Inductionofarthritisbys.c.injectionofMycobacteriumtuberculosis(MT)NormalpawArthriticpawsTime(Day)Time(Day)TheEnd©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042222©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422232、对抗原诱导的關節炎(AIA)的影响关节炎诱导D-21andD-14：皮下注射2mlmBSA/PBS+CFA〔0.5mg/ml+2mgMT/ml〕D0：右膝关节腔内注射50μlmBSA/PBS(0.1mg)，左膝对照Flare-upatD42：右膝关节腔内注射50μlmBSA/PBS(0.1mg)，左膝对照©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042224LiuL.Int.J.lmmunopharmac.,Vol.18,No.10,pp.529543,19962、对抗原诱导的關節炎(AIA)的影响治疗方案短期：D-1~D6腹腔注射给药，D7处死动物，观察药物在关节炎发作期的作用中期：D-1~D14腹腔注射给药，D19处死动物，观察药物在关节炎发作期的作用，以及停药后关节炎是否反跳长期：D8~D41腹腔注射给药，D42加强，D51处死动物，观察药物在关节炎发作期长时间的治疗作用，以及停药后是否能控制关节炎的再次诱发©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042225©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042226©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042227©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042228©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042229©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422303、对II型胶原型关节炎(CIA)的影响©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042231PrepareratsandloadCII/IFAintoasyringeIntradermallyinjectionofcollagenIIonday0and7Arthriticsignsappearedaroundday10-15PrepareCII/IFAemulsionZhouH.BBRC;376(2):352-357.©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042232Fig.1.Inhibitionoftheincidences(A),arthriticscores(B),hindpawvolumes(C),andESR(D)ofCIAratsbytreatmentwithsinomenine.Ratsweretreateddailyeitherwithani.p.injectionof25,50or100mg/kgsinomenineorvehicle,orwithanoraldoseof1mg/kgindomethacinbeginningonday0afterimmunizationwithCII/IFAuntilday30.*p<0.05,**p<0.01versusthevehicle-treatedrats(n=10).©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042233©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042234©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422354、抗炎镇痛©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042236霍海如，等,西安交通大学学报(医学版),1989(4):第346-349页.5、作用机理〔RA患者〕抑制RA患者树突状细胞中TLR2和TLR4表达，从而抑制TLR介导的炎症信号转导抑制趋化因子对RA患者树突状细胞的趋化作用，减少其趋化因子的分泌抑制树突状细胞转录因子-κB活性，阻断其分化成熟，阻止它在RA发病中的抗原提呈作用抑制树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA的表达，阻断对其T细胞的协同刺激抑制树突状细胞IL-12的分泌及其外表分子CD40、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达，从而抑制树突状细胞激活T细胞的能力©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422375、作用机理〔RA患者〕调节Th1/Th2亚群间网络失衡，抑制RA患者CCP-AST分泌IFN-γ水平，上调IL-4的表达下调bcl-2蛋白表达及阻滞G1期细胞向S期移行，诱导RA患者滑膜细胞凋亡抑制RA患者成纤维样滑膜细胞的增殖，并下调MMP-3的表达抑制RA患者成纤维样滑膜细胞增殖，诱导其凋亡©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422385、作用机理〔动物实验〕抑制滑膜细胞内NF-κBp65核转位和NF-κB的DNA结合活性下调致炎因子(IL-1,TNF)，上调抗炎因子(IL-4及IL-10)抑制炎症局部区域细胞因子活性〔IL-1,TNF〕和降低炎症介质〔NO,PGE2〕含量降低滑膜细胞内TNF-αmRNA及IL-1βmRNA的表达©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422395、作用机理〔细胞实验〕抑制T淋巴细胞活化和增殖,将细胞阻断于G0/G1期,其作用可能与下调T细胞转铁蛋白受体的表达，减少细胞对铁离子摄入有关通过影响钙离子依赖的T细胞活化信号传导途径抑制T细胞活化异常抑制单核细胞的增殖，促进其凋亡提高巨噬细胞吞噬能力，减少炎症因子TNF-α、IL-6mRNA和蛋白表达抑制巨噬细胞NF-κBp65核移位和IκB-α降解有关©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422405、作用机理〔细胞实验〕下调人外周血单个核细胞IL-1β、IL-8mRNA抑制人外周血单核细胞COX、IL-1β、TNF-α基因表达选择性抑制COX-2的活性抑制DC的发育成熟和免疫应答功能抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达、抗血管平滑肌细胞增殖抑制肥大细胞增殖，能促进肥大细胞凋亡，抑制肥大细胞活化脱颗粒抑制补体激活的中性粒细胞的溶酶体酶释放©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042241©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042242四.青藤碱的其它药理作用?肾病减轻实验性系膜增生性肾小球肾炎的肾脏病理损害，抑制肾小球分泌TNF-α及下调TNF-αmRNA的表达,延缓疾病进展减轻微小病变型肾病综合征肾损害，减少蛋白尿保护糖尿病大鼠的肾脏，下调肾组织TGF-β1的表达水平抑制单侧输尿管梗阻模型小鼠肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚，降低BUN、SCr、FN、LN的含量，减少ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达、TGF-β1蛋白表达减轻肾小球免疫性炎症、改善肾功能©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042243缺血再灌注损伤糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白减少Bax表达、上调Bcl-2/Bax比值减轻P-选择素和ICAM-1所介导的炎症反响减少再灌注损伤后PGE2含量、减轻血脑屏障通透性有关降低缺血再灌注损伤脑组织MCP-1和TNF-α含量，抑制再灌注损伤炎症反响©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042244缺血再灌注损伤脑缺血再灌注损伤抑制脑组织NF-κBp65及ICAM-1表达和MPO活性，减轻IR后脑组织的炎症反响和脑水肿抗凋亡、抑制炎症反响和自由基〔MPO及MDA含量减少、SOD活性提高〕抑制再灌注损伤后COX-2表达，减少PGE2含量©AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042245缺血再灌注损伤心脏拮抗垂体后叶素引起的急性心肌缺血抑制H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡去除氧自由基保护O2-损伤的心肌细胞抑制乳鼠心