免疫检测技术第2章 抗原抗体反应

(免疫检测技术）第2章抗原抗体反应

第一节抗原抗体反应的原理

一、抗原抗体结合力

二、抗原抗体的亲和性和亲和力

三、亲水胶体转化为疏水胶体第二节抗原抗体反应的特点一、特异性二、可逆性三、比例性四、阶段性第三节影响抗原抗体反应的因素

一、反应物自身因素

二、环境因素第四节免疫学检测技术的类型思考题小结第一节抗原抗体反应的原理

抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。物质基础:

抗原表位与抗体高变区间的互补结合抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体静电引力（electrostaticforces）范德华引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氢键:最具特异性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）

抗原抗体结合力示意图一、抗原抗体结合力抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力亲和力(affinity)抗原抗体亲和力示意图二、抗原抗体的亲和力和亲合力抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度亲合力(avidity)抗原抗体亲合力示意图

可见反应抗原抗体复合物

(疏水胶体)电解质

抗原(亲水胶体)

抗体(亲水胶体)

+三、亲水胶体转化为疏水胶体第二节抗原抗体反应的特点特异性可逆性比例性阶段性特异性：抗原与抗体结合反应的专一性抗原抗体反应特异性示意图分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性一、特异性两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应交叉反应（crossreactions）抗原抗体交叉反应示意图二、可逆性可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性影响因素：抗体对相应抗原的亲合力－亲合力越高，结合越牢固，越不易解离环境因素对复合物的影响－pH、离子强度

前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalencezone)：

抗原抗体比例合适

抗原抗体反应比例性示意图比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系三、比例性第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、沉淀和细胞溶解等现象四、阶段性第三节影响抗原抗体反应的因素抗原、抗体反应物的自身因素环境因素一、反应物自身因素抗原:理化性状、表位种类和数目抗体:来源、特异性、亲和性、效价抗体效价/滴度（titer）:实验组和阴性对照组光吸收比值≥2.0时最大的血清稀释倍数。电解质:生理盐水或缓冲液酸碱度:pH6～pH9温度:15℃～40℃，37℃最适二、环境因素反应类型实验技术结果判断凝集反应直接凝集试验观察凝集现象间接凝集试验同上抗球蛋白试验同上沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察测定溶血现象补体结合试验同上第四节免疫学检测技术的类型反应类型实验技术结果判断中和反应病毒中和试验检测病毒感染性毒素中和试验检测外毒素毒性标记免疫反应荧光免疫技术检测荧光现象放射免疫技术检测放射性强度酶免疫技术检测酶底物显色发光免疫技术检测发光强度金免疫技术检测金颗粒沉淀按实际用途分为:①免疫组织化学技术(immunohistochemistrytechnique,IHCT)②免疫测定(immunoassay)按检测现象分为:

①放射免疫技术②荧光免疫技术③酶免疫技术④化学发光免疫技术⑤金免疫技术按测定反应体系的物理状态分为:

①均相免疫测定(homogenousimmunoassay）②非均相免疫测定(heterogenousimmunoassay)

标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析1．什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2．抗原抗体的结合力有哪些？3．抗原抗体反应有哪些特点？4．如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？5．什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？6．如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？7．抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？8．抗原抗体反应有哪些影响因素？9．基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？10．什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？思考题小结

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原抗体之间的结合力涉及静电引力、范德华引力、氢键和疏水作用力。抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性。影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。凝集反应（agglutinationtest）【əˌglu:tin'eiʃən】

一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。

可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。直接凝集反应

颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反应（Wrighttest）均属定量凝集反应。间按凝集反应将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质，如人（O型）和动物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现