氟喹诺酮类药物检测（酶联免疫吸附法）

氟喹诺酮类药物检测方法兽药残留检测酶联免疫吸附法制样

1．样品的制备取新鲜或解冻的空白或供试动物组织，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。取鸡蛋去除壳后用均质器500r/min匀浆20s，使蛋清和蛋黄充分混合。取新鲜的蜂蜜样品备用。2．样品的保存-20℃冰箱中贮存备用。试剂和材料1．乙腈。2．正己烷。3．二氯甲烷。4．氢氧化钠。5．十二水合磷酸氢二钠。6．二水合磷酸二氢钠。试剂和材料7．氟喹诺酮类快速检测试剂盒：2℃-8℃冰箱中保存。（1）氟喹诺酮类系列标准溶液：0ug/mL、1ug/mL、3ug/mL、9ug/mL、27ug/mL、81ug/mL。（2）包被有氟喹诺酮类药物偶联抗原的96孔板：12条×8孔。（3）氟喹诺酮类药物抗体工作液。（4）酶标记物工作液。试剂和材料（5）底物液A液。（6）底物液B液。（7）终止液。（8）2倍浓缩缓冲液。（9）20倍浓缩洗涤液。试剂和材料8.缓冲液工作液：用水将2倍浓缩缓冲液按1:1体积比进行稀释（1份2倍浓缩缓冲液+1份水），用于溶解干燥的残留物。4℃保存，有效期1个月。9．洗涤工作液：用水将20倍浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释（1份20倍浓缩洗涤液+19份水），用于酶标板的洗涤。4℃保存，有效期1个月。10．0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.4g氢氧化钠加水溶解稀释至100mL。11．乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（84:16，v/v）：取乙腈84ml加到0.1mol/L氢氧化钠溶液16mL中混合均匀。试剂和材料12．乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（50:10，v/v）：取乙腈50ml加到0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml中混合均匀。13．磷酸盐缓冲液（0.02mol/L，pH7.2）：取5.16十二水合磷酸氢二钠和0.87g二水合磷酸二氢钠加水溶解稀释至1L。14．磷酸盐缓冲液（0.05mol/L，PH7.2）：称取12.9g十二磷酸氢二钠和2.18g二水磷酸二氢钠加水溶解定容至1L。仪器和设备1．酶标仪：配备450nm滤光片。2．氮气吹干装置。3．均质器。4．振荡器。5．涡旋仪。6．离心机。7．天平：感量0.01g。8．微量移液器：单道20uL-200uL、100uL-1000uL；多道250uL。仪器和设备1．酶标仪：配备450nm滤光片。2．氮气吹干装置。3．均质器。4．振荡器。5．涡旋仪。6．离心机。7．天平：感量0.01g。8．微量移液器：单道20uL-200uL、100uL-1000uL；多道250uL。试料的制备试料的制备包括。1.取制备后的供试样品，作为供试试料。2.取制备后的空白样品，作为空白试料。3.取制备后的空白，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。测定

1．鸡肌肉、鸡肝脏、猪肌肉、猪肝脏前处理过程称取3g±0.03g试样于50mL离心管中，加乙腈-0.1mol/L氢氧化钠溶液（84+16，v/v）9mL，振荡混合10min，4000r/min离心10min；移取上清液4mL于50mL离心管中，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液4mL，再加二氯甲烷8mL,振荡5min，4000r/min离心5min；取下层有机相4mL于10mL玻璃试管中，于50℃氮气吹干；用0.05mol/L磷酸缓冲液1mL溶解干燥的残留物，50μL分析。稀释倍数2倍。测定

2.蜂蜜前处理过程称取1g±0.02g试样于50mL离心管中，加0.05mol/L磷酸盐缓冲液2mL，用振荡器振荡至蜂蜜全部溶解；加二氯甲烷8mL，振荡5min，4000r/min离心5min；取下层有机相4mL于10mL玻璃试管中，于50℃下氮气吹干；用0.05mol/L磷酸盐缓冲液1mL溶解干燥的残留物，取50uL分析。稀释倍数为2倍。测定

3．鸡蛋前处理过程称取2g±0.02g试样于15ml离心管中，加乙腈8mL，振荡5min，4000r/min离心5min；取上清液2mL至10mL离心管中，50℃下氮气吹干；加正己烷1mL，涡动1min；加缓冲液工作液1mL，涡动2min，4000r/min离心5min；取下层清液50uL分析。稀释倍数为2倍。测定

4．虾、鱼前处理过程称取4g±0.04g试样于50mL离心管中，加乙腈0.1mol/L氢氧化钠溶液12mL，震荡5min，4000r/min离心5min；取上清液6mL，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液6mL，再加二氯甲烷7mL,震荡5min。4000r/min离心5min；取下层有机相6mL于10mL离心管中，于50℃下氮气吹干；加0.02mol/L磷酸盐缓冲液0.5mL，涡动2min，加正己烷1mL,涡动30s，4000r/min离心5min；取下层清液50μL分析。稀释倍数为0.5倍。测定

（六）测定1．使用前将试剂盒在室温（19℃-25℃）下放置1h-2h。2．按每个标准溶液和试样溶液至少两个平行，计算所需酶标板的数量，插入板架。3．加系列标准溶液或试样液50uL到对应的微孔中，加酶标记物工作液50uL/孔,再加喹诺酮类药物抗体工作液50uL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温下避光反应60min。测定4．倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打。以保证完全除去孔中的液体。加250uL洗涤工作液工作液至每个孔中，5s再倒掉孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，以保证完全除去孔中的液体。再加250uL洗涤液工作液，重复操作两遍以上。5．每孔加50uL终止液，轻轻振荡混匀，置酶标仪于450nm处测量吸光度值。（七）结果计算与表达用所获的的标准溶液和试样溶液吸光度值的比