培养基质量控制作业指导书

培养基质量控制作业指导书文件编号：WLCDC/ZD7651、目的：为加强我屮心检验科实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，特制定此作业指导书；2、范围：适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程屮的质量控制。3、职责：3、1检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程屮进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。3、2科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。4、生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列文件：培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。5、验收实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。6、贮存及使用前质量确认6、1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。6、2验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。6、3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。64每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长？等。如果发生上述异常情况，则不应再使用。7培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。7、11）20°C25°CpH2）琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。7、2法或定性方法（1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。73个（1%）37°C养18ho8、生长特性8、1生长率将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基屮，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。PR：PRNS/NONS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。N0：从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应NlOOcfu）o要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0、7,该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率最低应0、1；每平板（或每试管）10CFU〜lOOCFUo半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，G,G准规定的允许范围。定性方法定性方法采用划线法观察。104CFU/mL〜106CFU/mL株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。SF：SFDOParker［S］生长率37°C24-48h金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR2O、5黑色/37°C48hATCC25922/8739——定性全部抑制——特异性37°C24-48hATCC12228——定性——黑色/灰色菌落，周MYP［S］30°C24-48hATCC11778TSAPR20、737°C48hATCC25922——定性全部抑制——特异性37°C48h枯草芽胞杆菌ATCC6633——定性一—不具沉淀带的粉色VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）［S］生长率37°C24hATCC25922/8739TSAPR20、5ATCC14028ATCC29212/19433—一定性全部抑制一一VRBL（紫红胆汁乳糖）［S］生长率30°C20h大肠杆菌ATCC25922/8739TSAPR20、5粪链球菌ATCC29212/19433——定性全部抑制——特异性30°C20hATCC27853——定性无色至浅棕色菌落CT-SMAC（改良ft梨醇麦康凯琼脂）［S］37°C24h菌0157：H7ATCC43894/43895TSA定量PR20、51mm37°C24h37°C24hATCC11775/25922BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）［L］生长率30°C24-48h大肠杆菌ATCC25922/8739TSA2+1/3ATCC29212/19433—EC［L］44°C24〜48hATCC25922——半定2+1/344°C24〜48h铜ATCC27853b——定性不生长——EC-MUG/LS-MUG［L］44°C24〜48hATCC25922——半定量浊度2+1/344°C24〜48hATCC27853b——定性不生长——乳糖胆盐发酵培养［L］37°C24hATCC2592237°C24hATCC14028——定性——不产气、仍为紫色LST（月桂酸肉汤）［L］生长率37°C24hATCC259221/337°C24hCMCC51572——定性表2养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应PCA（平板计数琼脂）［S］30°C72hTSA定量PR20、7——金黄色葡萄球菌ATCC66333EE［L］37°C24hATCC25922/8739VRBG±＞10CFU粉红至红色菌落，有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌ATCC14028选择性粪肠球菌ATCC29212全部抑制RVS［L］生长率41、5°C24hATCC14028XLD性培养基上＞1OCFUATCC13076选择性41、5°C24h大肠杆菌ATCC25922半定量TSA±全抑制——粪ATCC29212TSAV10CFUSC（亚硒酸盐胱氨酸）［L］37°C24hATCC14028XLD其他选择性培养基上＞1OCFU（见标准）ATCC25922ATCC27853bATCC25922TSAV10CFU——粪链球ATCC29212TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）［L］37°C24hATCC14028XLD其他选择性培养基上＞1OCFU（见标准）CMCC5007137°C24h大肠杆菌ATCC25922TSAV10CFU——碱性蛋白月东水［L］37°C24hCMCC16109TCBS1OCFUCMCC20001大肠杆菌ATCC25922/8739TSAV10CFU——福氏志CMCC515727、5%氯化钠肉汤［L］37°C24hB-P10CFU落特征不同（见标准）4BHI37°C24hATCC65381〜2——蛋白月东盐［L］〜25°C45minATCC25922+/-50%菌落数/至（+/-50%ATCC259234非选择性增菌培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应乳糖蛋白月东肉汤［L］生长率37°C24hATCC25922——1/337°C24hATCC14028——定性——SCDLP［L］37°C24hATCC278531~2ATCC25922沙氏培养基［L］26°C5CMCC980011〜2—真菌培养基［L］26°C5CMCC98001定性浊度1〜2——表5选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应亚硫酸酸钳琼脂（BS）［S］37°C48hATCC14028定性良好生长（2）CMCC51572ATCC25922/8739（0〜1）无典ATCC29212/19433（0）XLD［S］生长37°C24hATCC14028（2）菌落呈黑色福氏志贺氏菌CMCC51573菌落呈无色选择性大肠杆菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（0〜1）无典型菌落粪链球ATCC29212/19433（0）血琼脂平板［S］生长率37°C24〜48hATCC6538/25923（3溶血,透ATCC29212aTCBS［S］37°C24〜48hCMCC16109定性良好生长菌落较大，呈黄色副溶血性弧菌CMCC200014［S］37°C24〜48hCMCC1610901CMCC17045透明、湿润、中心带有黑色选择性37°C24hATCC25922/8739（0〜1）5离培养基（续）征反应伊红美兰琼脂［S］37°C24hATCC14028TSI（三糖铁琼脂）［S］37°C24-48hATCC25922/8739CMCC51573ATCC140286用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应营养琼脂［S］生长率37°C24h大肠杆菌ATCC25922定性良好生长(2)鼠伤寒沙门菌ATCC14